高效液相色谱法测定洋蓟叶中洋蓟素含量
作者：杨海英 杜刚 杨阳 张建胜 李正全 李干鹏。
【摘要】 目的建立了测定洋蓟叶中洋蓟素含量的高效液相色谱方法。方法用水加热回流提取样品，采用Shim—pack CLC—ODS色谱柱（150 mm×6 mm，5 μm），乙腈—2%的醋酸水溶液（13∶87）等度洗脱，检测波长320 nm。结果洋蓟素在0.004 9～0.196 mg·ml—1范围内线性关系良好，平均回收率为98.12%,相对标准偏差（RSD）为1.01%。结论该方法快速、简便、准确，可用于洋蓟叶中洋蓟素的含量测定。
洋蓟Cynara scolymus L.又名朝鲜蓟、菊蓟、菜蓟、荷兰百合,为菊科菜蓟属多年生草本植物,原产地中海地区，20世纪90年代传入我国，在浙江、云南等地有一定规模栽培［1］。洋蓟有较高营养价值和药用价值,经研究发现洋蓟叶中含有绿原酸、洋蓟素、黄酮类化合物、天冬酰胺等成分，可促进胆汁分泌，促进氨基酸代谢，具有抗氧化、降低胆固醇、抗微生物等活性作用。用于治疗消化不良、肝病等疾病［1］。 洋蓟素（Cynarin）又称洋蓟酸，朝鲜蓟酸，菜蓟素，洋蓟苷，1,3—二咖啡酰奎宁酸，是洋蓟抗氧化、抗微生物作用的主要活性成分之一［2，3］。明确洋蓟中的洋蓟素含量，对于洋蓟的食用、药用成分等综合开发有着重要的意义。目前,只有对洋蓟中的绿原酸及天冬酰胺进行含量测定的报道［4，5］，洋蓟叶中的洋蓟素含量测定国内尚未见报道。本实验就云南省引进栽培的洋蓟中洋蓟素的提取及检测分析方法进行了初步研究，筛选并建立了快速、准确测定洋蓟素含量的反相高效液相色谱方法。
1 仪器与试剂 日本岛津SPD—10AT高效液相色谱仪： SPD—10Avp检测器；SIL—10AP自动进样器；超纯水器(arium 611UF,Sartorius)；超声波清洗器(AS3120A，天津瑞森特)；电子天平(AdventurerTM，AR2140，上海奥豪斯公司)； 旋转蒸发仪(R—200,瑞士Buchi)。岛津UV2100型紫外—可见光谱仪。 乙腈、甲醇为色谱纯；实验用水为超纯水，蒸馏水自制，其它试剂均为国产分析纯试剂。洋蓟素对照品购自成都普瑞法科技开发有限公司（纯度≥98%）。洋蓟叶由昆明卡麦生物科技有限公司提供，栽种于云南省陆良县。洋蓟样品由云南中医学院杨礼攀副教授鉴定为菊科菜蓟属Cynara scolymus L.的干燥叶。
2 方法和结果。
2.1 色谱条件色谱柱为岛津Shim—pack CLC—ODS柱（150 mm×6 mm，5 μm）， 流动相为乙腈—2%的醋酸水溶液（13∶87） ，流速1 ml·min—1，检测波长320 nm，柱温30℃，进样量20 μl。
2.2 对照品溶液的制备称取洋蓟素适量，精密称定，用流动相溶解，制成每毫升含洋蓟素0.196 mg的对照品储备液, 置于4℃的冰箱中避光保存。 取对照品溶液适量，加流动相制成0.004 9，0.009 8,0.019 6，0.049，0.098 mg·ml—1 系列标准溶液。