小鼠沙眼衣原体肺炎的诱生及检测
【摘要】 目的 探讨沙眼衣原体小鼠肺炎感染模型的建立及检测。 方法 用沙眼衣原体小鼠肺炎株（MoPn）鼻腔吸入感染C57BL/6小鼠。用过氧化物酶连接的鼠抗衣原体脂多糖单抗染色及RT—PCR，检测衣原体在小鼠肺组织的生长;通过肺组织髓过氧化物酶检测，确定肺炎症细胞类型。 结果 一定剂量的衣原体MoPn经鼻腔吸入可引起小鼠衣原体肺炎，以肺组织衣原体生长及肺组织大量中性粒细胞浸润为特征。 结论 小鼠可作为研究沙眼衣原体肺炎有价值的动物模型。 【关键词】 沙眼衣原体 小鼠 肺炎 髓过氧化物酶。
Establishment and detection to Chlamydia trachomatis pneumonitis of the mouse 【Abstract】 Objective To establish a mouse model of Chlamydia trachomatis pneumonitis and investigate the detective method.Methods Pneumonitis was produced by intranasal inoculation of Chlamydia trachomatis mouse pneu—monitis（MoPn）biovar in C57BL/6mice.Chlamydia growth in the lungs were determined by chlamydia infectivity and chlamydia mRNA expression in the lungs.Lung inflammatory cell type was determined by lung myeloperoxidase assay.The infection was confirmed by inoculating Hela229cell monolayer with lung homogenates followed by HRP conjugate anti—Chlamydia LPS mAb.Results Intranasally infected with C.trachomatis MoPn in mice resulted in Chlamydia mouse pneumonitis featured by chlamydia growth and massive infiltration of neutrophils in the lung.Conclusion Mice may serve as a useful animal model for the study of the Chlamydia trachomatis pneumonitis. 【Key words】 Chlamydia trachomatis mouse pneumonitis myeloperoxidase 沙眼衣原体小鼠肺炎菌株（MoPn）是小鼠肺炎的天然病原体，最初是从小鼠肺组织分离得到的，所以MoPn感染的小鼠模型最常用于研究衣原体体内感染。本研究以MoPn通过呼吸道感染易感小鼠，并通过检测衣原体在肺组织中的生长及肺组织炎症细胞的浸润，对小鼠衣原体肺炎进行检测和鉴定。
1 材料与方法 1.1 沙眼衣原体菌株 MoPn生长于HeLa229细胞，用不连续密度梯度离心法纯化衣原体，进行活性测定后用于感染小鼠。 1.2 感染小鼠 6～8周龄雌性C57BL/6小鼠（中国医学科学院血液病研究所提供），在微麻状态下鼻腔内吸入40μl含1×10 3 包涵体形成单位（IFU）的MoPn。 1.3 肺组织上清液中衣原体活性测定 无菌采集小鼠肺组织右叶，制备成组织匀浆，离心。用肺组织上清液滴定HeLa细胞单层。用连接有过氧化物酶的鼠抗衣原体脂多糖单抗（anti—LPS mAb）（Virostat）染色，以鉴定衣原体的感染性，感染强度以IFU表示 ［1］ 。 1.4 肺组织髓过氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）检测 ［2］ 制备肺组织匀浆，沉淀物超声粉碎。上清液与25μl TMB底物液反应，以人髓过氧化物酶做标准品，在全自动酶标仪上读取650nm OD值。 1.5 MoPn mRNA的表达 RT—PCR检测小鼠肺组织沙眼衣原体MoPn mRNA表达。