UPLC(超高效液相色谱)/MS/MS联用技术测定全血中的西罗莫司

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作者：祝仕清 牛长群 耿亚鹏 毕业论文。

【摘要】 目的 建立全血中西罗莫司的UPLC(超高效液相色谱)/MS/MS测定 方法 。方法 全血样品中加入他克莫司(FK506)作内标，用叔丁基甲醚进行提取。以乙腈与含千分之五甲酸的水溶液为流动相(40∶50)，色谱柱为Acquity UPLCTM BEH C8(50mm×2.1mm，1.7μm)，流速0.5ml/min。三重四极杆质谱采用正离子模式，离子采集方式为多反应监测模式(MRM)，离子源温度105℃，离子源电离电压为3300V，雾化气流速500L/h。采集离子(母离子/子离子)西罗莫司为931.2/864.1，FK506为822.0/577.0。结果 西罗莫司在1～240μg/L浓度范围内呈良好的线性(r=0.9995)。日内、日间精密度均在15%以内，提取回收率大于75.0%，方法回收率为95.0%～98.5%，最低检测限为0.2μg/L。结论 本方法灵敏、准确，适合临床西罗莫司的全血 分析 。 毕业论文。

【关键词】 超高效液相色谱质谱联用 血药浓度 西罗莫司。

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Determination of sirolimus in whole blood by UPLC/MS/MS 论文代写。

ABSTRACT Objective To establish a UPLC/MS/MS method for the detemination of sirolimus in whole blood. Methods The blood sample was extracted with methyl tertbutyl ether and separated over an ACQUITY UPLCTM BEH C8 (50mm×2.1mm, 1.7μm). The mobile phase consisted of a mixture of water (0.5% formic acid) and acetonitrile (50∶40). The flow rate was 0.5ml/min. Tacrolimus (FK506) was used as an internal standard. The triple quadrupole mass spectrometer with the turbo ion spray interface was operated in the positive ion mode and the temperature of the turbo was set at 105℃ and the ionization voltage was 3300V. The multireaction monitoring (MRM) mode was employed to scan the ions. The selected ions (precursorion/product ion) were 931.2/864.1 for sirolimus and 822.0/577.0 for FK506. Results The calibration linear range of bloodsirolimus concentrations was 1 to 240 μg/L (r=0.9995). The betweenday and withinday RSD% were less than 15%. The extraction recoveries were more than 75.0% and the method recoveries were between 95.0% and 98.5%. The low limit of detection was 0.2μg/L. Conclusion The UPLC/MS/MS method is rapid, sensitive and reliable and can be applied to monitor sirolimus of whole blood.

KEY WORDS UPLC/MS/MS; Whole blood; Sirolimus 毕业论文。

西罗莫司(sirolimus)是一种新型、强效大环内酯类免疫抑制剂，由于 治疗 用剂量低(0.01～0.3mg/kg)，个体差异大，治疗指数窄，特别对特殊患者(儿童，肝功能不良者)血药浓度监测是非常必要的。另外，由于西罗莫司免疫抑制作用与稳定态的谷浓度(Cmin)相关，需要灵敏的检测方法。超高效液相色谱(UPLC)技术作为近年来 发展 起来的分离技术，与传统的液相色谱相比具有更高的分离效率和更快的分离速度，尤其与质谱联用更能显示其优越的性能，本文采用UPLC/MS/MS方法分析检测血中西罗莫司的浓度。该方法的灵敏度高(最低检测限为0.2μg/L)，分离速度快，优于 文献 报道的LC/MS/MS测定法［1～3］。

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1 材料与方法。

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1.1 仪器 毕业论文。

美国Waters液质联用仪，AcquityTM超高效液相色谱(Ultra performance LC)系统； Quattro PremierMICROMASS质谱仪，MsssLynx工作站；十万分之一 电子 分析天平(Sartorius)。 毕业论文。

西罗莫司对照品(华北制药新药中心试制)；他克西司(FK506，华北制药新药中心提供)；叔丁基甲醚、甲醇及乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯。

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1.2 溶液的配制 论文代写。

西罗莫司溶液 精密称取西罗莫司对照品10.0mg，置100ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，作为西罗莫司的储备液(100mg/L)，置—20℃冰箱保存，使用当天将储备液用乙腈稀释至所需浓度。 毕业论文。

内标溶液 精密称取FK506对照品10.0mg，置500ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，作为内标储备液(20mg/L)，置4℃冰箱保存。使用当天将内标储备液用乙腈稀释至所需浓度(1.0mg/L)。 论文网。

缓冲液 将4.11g乙酸钠固体溶于100ml去离子水中，用乙酸调pH值至4.6，定容至500ml。 论文网。