新疆锁阳中总黄酮的提取工艺优化及含量测定
作者：康新平 热娜 卡斯木 刘亚婷。
【摘要】 目的优选新疆锁阳中总黄酮的提取工艺，比较不同产地新疆锁阳中总黄酮的含量。方法以总黄酮含量为指标，以芦丁为对照品, 用分光光度法比较了回流法、超声法、煎煮法从锁阳干燥肉质茎中提取黄酮类化合物的提取效率，采用正交表进行实验优化了超声法的提取工艺。比较了不同地区不同生长期的锁阳中总黄酮的含量。 结果固液比和超声时间对黄酮类化合物的提取效率有显著影响，乙醇浓度对提取效率影响不显著。结论最佳提取工艺为60%乙醇、1:60固液比、超声1.5 h，且总黄酮含量以奇台地区的锁阳最高，出土期比开花期高，花中总黄酮含量高于茎中。
Abstract：ObjectiveTo ascertain the optimum condition for extracting Cynomorium songaricum Rupr.MethodsTaking rutin as a comparison, we compared the extraction methods of the total flavones of Cynomorium songaricum Rupr., and studied the optimal conditions for extracting flavonoid compounds of Cynomorium songaricum Rupr.by using L9 (34) orthogonal table, and compared the total flavone contents of Cynomorium songaricum Rupr. from different regions at different growth stages.Results The volume of alcohol and the time of extraction affected the total flavones significantly. ConclusionThe results showed that the highest extraction rate of the total flavones could be obtained with 60% ethanol solution at a ratio of solid to liquid 1:60 and ultrasound 1.5 h and the highest content of the total flavones is obtained from Qitai region at unearthed stage.
Key words：Cynomorium songaricum Rupr.; Total flavones; The optimum extraction process; Ultrasound 锁阳Cynomorium songaricum Rupr., 又名不老药、铁棒槌、锈铁棒、地毛球、乌兰高腰(蒙语) 、锁严子， 是锁阳科Cynomoriaceae锁阳属的单科单属单种植物, 多寄生于蒺藜科(Zygophyllaceae) 白刺属(Nityaria L. )植物根部, 是全寄生种子植物。主要产于甘肃、新疆、青海、内蒙古等干旱沙漠地带。近年来，锁阳的保健价值已被广泛重视，化学成分被逐步揭示，而且对其生理、药理作用也有了更广泛的认识。目前，大量研究证明锁阳黄酮类化合物主要为儿茶素(Catechin)、柑桔素4′—O—吡喃葡萄糖及一种以柑桔素为苷元的配糖体［1］。近几年研究表明，黄酮类化合物有明显的抗溃疡、抗菌、抗炎、降血脂等药用保健功能［2］；有防止动脉硬化或栓塞等效果，可作血管保护剂；对胸闷、心悸及早搏均有一定作用；对眩晕综合征、急性耳鸣、口臭等症状有防治功能［3］。作为天然来源的黄酮类化合物，能有效地清除自由基和脂质过氧化物，捕捉生物体内的超氧化物及过氧离子，切断生物体内导致人体衰老与病痛的脂质过氧化物连锁反应，螯合金属离子使之钝化， 防止脂肪氧化酶作用，从而具有抗衰老作用，是一种具有广泛开发前景的天然抗氧化剂［3～5］。 目前对锁阳中黄酮类化合物提取工艺及生理活性报道不多。我们利用不同方法浸提锁阳中黄酮类化合物，对锁阳中总黄酮类化合物的提取工艺作了系统的研究，为今后锁阳的综合开发利用提供科学依据。
1 器材。
1.1 仪器S54紫外可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；KQ3200型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SZ202型电热温度干燥箱（浙江诸暨县马剑电热仪器厂）；HH—S恒温水浴锅(江苏金坛县医疗仪器厂)。
1.2 试剂芦丁对照品（中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，1097—050103）；乙醇（A.R）；亚硝酸钠（A.R）；氢氧化钠（A.R）；硝酸铝（A.R）。
1.3 生药来源本课题所用药材分别采于2007年乌拉泊地区、奇台地区、昌吉地区未出土期、出土期、开花期的锁阳全草，品种由新疆医科大学生药教研室邢文斌老师鉴定。
2 方法与结果。
2.1 标准溶液的制备 精密称取芦丁对照品2 mg，置于10 ml容量瓶中，加入50%乙醇适量，超声处理使之溶解，放冷，加50%乙醇水溶液至刻度，摇匀，为供试品储备液。
2.2 测定波长的选择 取芦丁对照品适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
2.3 标准曲线的制备 精密吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml芦丁储备液，分别置于10 ml容量瓶中，先加入0.3 ml 5%亚硝酸钠溶液，放置6 min后再加0.3 ml10%硝酸铝，再放置6 min后加4 ml 4%氢氧化钠溶液，最后用50%的乙醇定容至10 ml，放置15 min后以试剂做空白在510 nm处测吸光度。其吸光度做线性回归，得芦丁含量与吸光度的回归方程为Y=12.88X—0.0032，r=0.999 6。
2.4 方法学考察。
2.4.1 稳定性考察 取同一供试品在不同时间间隔测定吸光度，结果表明样品在50 min内稳定。
2.4.2 重复性考察 精密称取锁阳粉末5份，每份1.000 0 g，依法制备供试品，测定，计算总黄酮含量，RSD=2.03%。
2.4.3 精密度考察 取同一供试品溶液重复测定5次，计算其RSD=0.73%。
2.4.4 加样回收率实验精密称取已测知含量的锁阳样品9 份，分别加入相应量的对照品，按“供试品溶液制备”方法操作，测得平均回收率为100.97% ，RSD=3.6% 。