不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定

作者：王言才 段金廒 华永庆 宿树兰。

【摘要】 　　目的建立不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定方法。方法采用RP—HPLC法，以甲醇—水（32∶68）为流动相，检测波长为250 nm测葛根素含量；紫外分光光度法测柴葛、粉葛中总黄酮含量。结果葛根素峰分离度提高，峰形改善；葛根素0.204～2.04 μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9），回收率为98.7%(n=5)，精密度RSD=0.86%。总黄酮浓度在4.08～16.32 μg/ml范围内与吸收度线性关系良好（r=0.999 8)。结论该法灵敏、准确、简便易行,重复性好,可用于中药葛根药材及饮片的质量控制。

【关键词】 柴葛 粉葛 葛根素 总黄酮 高效液相色谱。

Abstract:ObjectiveTo study the determination method of puerarin and isoflavones in Pueraria lobata (Willd)Ohwi and Pueraria thomsonii Benth. MethodsThe separation was performed on RPHPLC with a mobile phase of CH3OH—H2O (32∶68V/V) solution and the detection wavelength was 250 nm for the determination of Pueraria. UV—spectrophotometry for the determination of isoflavones.ResultsPuerarin and other peaks were separated well and the peak shape was presented well. There was a good linearity within the range of 0.204 to 2.04 μg of Puerarin (r =0.999 9). The average recovery was 98.7 %(n=5). The RSD was 1.3% .The isoflavones had a good linearity within the range of 4.08～16.32 μg/ml(r=0.999 8).Conclusion This method is sensitive, accurate and reproducible. It can be used as the quality control method of Pueraria lobata and drug.

Key words:Pueraria lobata (Willd. )Ohwi； Pueraria thomsonii； Pueraria； isoflavones； HPLC 　　葛根为豆科植物柴葛Pueraria lobata (Willd. )Ohwi 和甘葛藤Pueraria thomsonii Bent h. 的干燥根，前者习称柴葛，甘葛藤习称“粉葛”［1］，始载于《神农本草经》，味甘、辛，性平，具有增加脑及冠状动脉血流量、降低血管阻力、收缩平滑肌、降血糖及解热等多种功效［2］。民间用于治疗伤寒、温热头痛、烦热消渴等症，也是中医常用的祛风解毒药。现代研究表明，葛根含葛根异黄酮，主要为葛根素(perarin) 、大豆苷(daidzin) 、大豆苷元(daidzein) 3种活性成分，其中葛根素是本属的特征成分，也是主要成分，为了对葛根进行有效的质量控制，本实验以葛根素为指标，以柴葛、粉葛药材为对象，建立了高效液相色谱法测定其葛根素的含量方法，并采用紫外分光光度法对其中的总黄酮进行了含量测定，为柴葛、粉葛的药材鉴定提供参考方法。

1 仪器与材料。

1.1 仪器美国 Waters 公司600—2487高效液相色谱仪,Millenium数据处理系统;Waters2487紫外检测器；岛津UV—2401PC型紫外分光光度计；岛津AY120型万分之一电子分析天平；SB3200型超声清洗器。

1.2 材料葛根素对照品：中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏超纯水；其它试剂均为分析纯。柴葛产于安徽岳西，粉葛产于广西。

2 方法与结果。

2.1 HPLC法测定葛根中葛根素的含量。

2.1.1 色谱条件色谱柱：Zorbax XDB—C18（4. 6 mm ×250 mm , 5 μm)；流动相∶甲醇—水（32∶68）；流速1 ml/min；检测波长250 nm；柱温22℃；进样体积10μl。理论板数按葛根素峰计算不低于5000。在该色谱条件下，样品中的葛根素与其它峰均能达到基线分离，保留时间在14.3 min左右，对照品与样品的色谱图见图1。

图1 对照品Ⅰ、柴葛索氏提取Ⅱ、粉葛索氏提取Ⅲ的HPLC色谱图（略）。

2.1.2 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品5.1mg，甲醇定容于25 ml量瓶。分别移取0.5，1.0，2.0，2.5 ml于5 ml量瓶，水定容，与原液共同作为HPLC用对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 　　热回流提取法：精密称取柴葛、粉葛粉末（过50目筛）各0.1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 ml，称重。回流提取30 min，放冷，称重并以30%乙醇补足减失重量，摇匀过滤，取续滤液为供试品，待测。 　　索氏提取法：称取柴葛、粉葛粉末各0.5 g, 精密称定，以甲醇为提取剂提取4h，过滤，浓缩提取液并用甲醇定容于10 ml量瓶。超声处理30min，取上清液以水定容于10 ml量瓶，待测。