产ESBLs、ESBLs+AmpC酶的肺炎克雷伯菌检出及其耐药性分析
作者：卜黎红 徐瑞龙 单小云 许健波 朱以军。
近年来，随着β—内酰胺类抗生素，尤其是头孢三代类药物的广泛应用，引起产超广谱β—内酰胺酶（ESBLs）、AmpCβ—内酰胺酶（AmpC酶）、ESBLs+AmpC酶等一系列耐药菌株的产生，细菌耐药现象日益严重。为更好地了解我院临床分离菌株中产ES—BLs、ESBLs+AmpC酶肺炎克雷伯菌的检出率及耐药性，对138株肺炎克雷伯菌进行ESBLs、ESBLs+Am—pC酶测定及药敏试验，现将结果报道如下。
1材料与方法。
1.1材料。
1.1.1试验菌株 138株肺炎克雷伯菌均为我院2003年8月～2004年8月住院及门诊病人感染标本中分离的菌株，根据临床资料去除重复菌株。
1.1.2质控菌株大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603，分别作为产ESBLs阴性和阳性对照菌。
1.1.3 VITEK—AMS细菌鉴定系统及配套的GNI鉴定卡与GNS—120药敏卡为生物梅里埃公司生产。
1.1.4 药敏纸片 头孢替坦（CTT）、头孢吡肟（FEP）为英国Oxoid产品，亚胺培南（IPM）由默沙东公司提供，头孢哌酮/舒巴坦（SCF）为舒普深公司提供，哌啦西林/他唑巴坦（TZP）等纸片购自北京天坛药物生物技术开发公司。
1.1.5药敏用培养基 Mueller—Hinton琼脂，英国Oxoid产品。
1.2方法。
1.2.1菌株培养和鉴定细菌分离培养按照《全国临床检验操作规程》进行。用VITEK—AMS专用卡GNI+鉴定。
1.2.2ESBLs检测。
（1）VITEK—AMS测定:采用GNS—120专用药敏卡，严格按说明书操作，仪器自动检查其ESBLs4个检测孔，头孢他啶（CAZ）与头孢他啶/克拉维酸（CAZ/CA），头孢噻肟（CTX）与头孢噻肟/克拉维酸（CAZ/CA）孔的生长浊度≥50%时，判定为ESBLs阳性。
（2）双纸片协同试验及确认试验:将阿莫西林/克拉维酸（AMC）纸片置Mueller—Hinton平板中央，依次贴上头孢曲松（CRO）、CAZ、CAZ/CA、ATM、CTX、CTX/CA，其中CRO、CAZ、氨曲南（ATM）、CTX与AMC距离为18mm，CAZ/CA、CTX/CA与AMC距离为25mm，且CAZ/CA、CTX/CA与其它纸片间距离24mm。
（3）双纸片协同试验结果判断:如在AMC纸片与其周围CRO、CAZ、ATM、CTX任一种纸片处出现协同抑菌视为产超广谱β—内酰胺初筛阳性。
（4）确认试验:按NCCLs纸片标准，CAZ、CAZ/CA和CTX、CTX/CA2组抗生素纸片任一组中含CA的纸片和不含CA的纸片菌抑菌圈直径相差≥5mm，即为产ESBLs菌株。
1.2.3产ESBLs+AmpC酶株的检测。
（1）表型筛选试验参阅文献 ［1，2］ 选用IPM、FEP、CAZ/CA、CAZ、CTX/CA、CTX、CTT7种抗生素进行筛选试验。若IPM敏感，而CTT、FEP、CAZ、CAZ/CA、CTX、CTX/CA耐药为产ESBLs+AmpC酶株。
（2）扩散协同试验参阅文献 ［3，4］ 经表型筛选试验为产ESBLs+AmpC酶株作扩散协同试验，每株菌取两平板，一平板将AMC纸片置Mueller—Hinton平板中央，四周依次贴上CAZ、CTX、ATM、CRO;另一平板将AMC纸片置Mueller—Hinton平板中央，在与AMC纸片距离为15mm、20mm、25mm、30mm处各贴FEP。若AMC与CAZ、CTX、ATM、CRO不协同，但与FEP协同为产ESBLs+AmpC酶株。
1.2.4药敏试验采用纸片扩散（K—B法），判断标准按NCCLs2002版标准执行。
1.2.5统计分处理采用WHONET5软件。
2结果。
2.1产ESBLs阳性率及病房分布临床分离株138株，经VITEK GNS—120卡鉴定56株产ESBLs，纸片协同法55株产ESBLs，纸片确认法57株产ESBLs占41.3%（57/138）。各科室产ESBLs株从高到低依次为:神经外科30株，其中28株为NCU病房，2株为普通病房的同一床位，且时间较近。ICU病房8株，婴儿科5株，其余8株来自外科病房，6株来自内科病房。