脑出血患者血清神经元特异性烯醇化酶的测定及临床意义
作者：欧阳强，陈阳，韦英海，农朝赞。
【摘要】 目的 探讨血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)在脑出血患者的变化及其对预后的评估价值。方法 应用酶联免疫吸附（ELISA）法测定比较40例急性脑出血患者（观察组）和30例健康对照组血清NSE水平，并分析观察组NSE水平与出血量、神经功能缺损程度及出血部位的关系。结果 观察组血清NSE水平明显高于对照组(P0.01)。观察组出血量大者NSE水平显著高于中、小型（P均0.01）。SSS重型者NSE水平显著高于轻、中型（P均0.01）。结论 NSE是反映脑内神经元损伤或坏死的客观指标，可作为脑出血早期诊断、判断病情转归和预后的综合指标。
神经元特异性烯醇化酶(Neuron—speeific eno—lase，NSE)是一种神经系统特异性蛋白质，主要存在于神经元细胞浆中，脑组织损伤后，NSE从损伤的神经元漏出，通过血脑屏障进入脑脊液和外周血液，检测血液中NSE水平可反映神经元损伤的程度［1］。在一些脑损伤性疾病(如脑卒中、蛛网膜下腔出血、脑外伤、癫痫等)患者中，脑脊液和(或)血清NSE均有明显升高［2］。本研究对40例脑出血患者血清NSE进行了动态观察，以探讨其临床意义。
1 资料与方法。
1.1 一般资料。
选择2006年8月～2007年7月在我院神经内科住院的脑出血患者作为观察组，诊断符合1996年全国第四届脑血管病会议修订的标准，全部病例经头颅CT或MRI检查证实，排除此次病前6个月内患有恶性肿瘤、急性心肌梗塞、脑外伤及其他神经系统器质性疾病。共入选40例，其中男24例，女16例，年龄(58.22±9.41)岁。入院当天斯堪的那维亚卒中量表(SSS)神经功能缺损程度评分为(23.42±15.74)分，其中轻型(0～15分)18例、中型(16～30分)16例、重型(31～45分)6例。脑出血分为大量脑出血(30ml)、中量脑出血(15～30ml)、小量脑出血(15ml)。出血灶位于脑叶7例，基底节区13例，内囊区10例，脑干区5例，丘脑区5例。有高血压病史16例，糖尿病史5例。发病后72h内死亡2例，1周内死亡2例，死亡主要原因为脑疝2例，多脏器功能衰竭2例。对照组为30例健康体检者，其中男22例，女8例，年龄(56.21±7.52)岁。两组一般资料具有可比性。
1.2 检测方法。
观察组于发病后48h内、3～5天、6～9天、10～14天清晨分别采空腹肘静脉血1次(不抗凝)，每次3ml注入硅化玻璃试管内，即刻于4℃以1500r/min离心10min，分离血清，吸取上清液，每0.2ml分装，—70℃冰箱保存待测。对照组在体检后只采血1次，方法同前。血清NSE测定采用NSE酶联免疫分析(NSE—ELISA法)测定。试剂盒由北京信德生物医学研究所提供，批号2005051206。严格按试剂盒说明进行操作并计算结果。检测步骤：将丹麦生产的酶联板用洗涤液洗3次，去余液，在板内NSB孔内加入含NSE的标准物100μl，标准孔内分别加入含NSE 2.5、5、10、20和50μg/L的标准物100μl，取样品血清5μl，加样品稀释液50μl稀释后点入样品孔，轻摇混匀，3℃孵育30 min，洗板3次，甩干。每孔加酶标抗体100μl，3℃孵育30 min。洗板5次，甩干。依序每孔加入OPD液10μl，室温显色10～15 min，再依序每孔加入4mmol/L H2SO4液体50μl，终止反应。在BIO—RADUV—3550型酶标仪上492 nm波长处检测各孔吸光度。根据标准曲线换算成实际NSE浓度(μg/L)，并进行各组间比较［3］。
1.3 统计学处理。
统计学方法采用SPSS 11.5软件包进行统计学处理。计量数据以±s表示，两样本均数比较采用成组t检验，多样本均数比较采用单因素方差分析。检验水准a＝0.05。
2 结果。
观察组在不同时间段检测血清NSE水平与对照组比较差异均有高度显著性（P0.01），见表1。表1 两组血清NSE水平比较(略)。
2.2 观察组血清NSE水平与出血部位、出血量及SSS分型的关系。
患者在脑出血发病后3～5天NSE水平达到峰值，脑叶、基底节区、内囊、脑干、丘脑NSE峰值水平分别为(21.26±5.71)μg/L、(20.31±7.52)μg/L、(19.58±9.13)μg/L、(22.45±4.55)μg/L、(21.31±4.12)μg/L，单因素方差分析显示差异无显著性(P均0.05)。出血量为大、中、小型者血清NSE水平分别为(30.37±3.59μg/L)、(20.87±3.51)μg/L和(19.31±2.72)μg/L，出血量大者NSE水平显著高于中、小型（t分别为11.97、15.53，P均0.01）。SSS轻、中、重型者血清NSE水平分别为(20.09±5.35μg/L)、(30.14±1.09)μg/L、(31.16±2.17)μg/L，重型者显著高于轻、中型（t分别为7.79、7.18，P均0.01）。
3 讨论。
NSE是烯醇酶5种同工酶中的一种，含有两个a亚单位，为神经系统所特有，分布在脑组织和脊髓的神经元和它们的轴突及树突中，在神经内分泌细胞如松果体、垂体、甲状腺以及血小板、红细胞内也有一定的含量，但是中枢神经系统的含量是周围器官的1000倍，而脑内的含量是周围神经的10～100倍，当在缺血、缺氧、脑出血等急性脑损伤时，神经元细胞膜完整性受到破坏，使NSE从细胞内释放到细胞外，进入细胞间隙，通过血脑屏障进入血液［4］。NSE是一种细胞内蛋白质，特异地存在于神经细胞和神经内分泌细胞，其绝大部分存在于中枢神经系统中，神经系统中又以脑内最多，占全脑可溶性蛋白的1.5%。正常情况下体液中含量很低，而血细胞中的NSE比脑内至少低30倍，当脑组织缺血、中毒或损伤时，细胞膜的完整性受到破坏，NSE便从细胞内释放出来。在神经元损害的标志酶中，NSE与醛缩酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶不同，它不与细胞内的肌动蛋白结合，因而从缺血或坏死的细胞中最易释放。释放出来的NSE，首先进入脑脊液中，由于血－脑屏障的破坏，遂进入血液循环，这为脑组织损伤后检测血清中NSE的变化提供了依据［5,6］。经过多年研究已证实，多数有神经元损伤或坏死的疾病如脑炎、脑出血、脑外伤、脑梗塞、缺血缺氧性脑病，均可出现血清NSE水平升高，可作为对神经元损害和坏死程度的判定［7］。