威麦宁抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长及其血管生成的实验研究
作者：吴学敏 金艳书 娄金丽 刘运芝。
【摘要】 目的：探讨威麦宁对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长及其血管生成作用的影响。方法：建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型，用药后取瘤组织称重并计算抑瘤率；瘤组织切片HE染色，光镜下进行形态学观察；免疫组化法检测瘤组织血管内皮细胞CD34的表达情况并计数微血管密度(MVD)。结果：威麦宁浓度在100mg/kg.d、250mg/kg.d时，对小鼠Lewis肺癌的抑制率分别为19.14%和51.56%；对照组癌巢间微血管丰富，用药组瘤组织及其周围微血管均减少；用药组瘤组织内MVD明显低于NS组(P0.01)。结论：威麦宁能减少肿瘤组织血管生成，从而抑制小鼠移植瘤的体内生长。
肿瘤新生血管的形成不仅是肿瘤可持续生长的基础，也为其侵袭和转移创造了十分有利的条件。因此，抑制肿瘤微小克隆对周围血管组织的诱导，防止其最初的血管形成，对原发肿瘤的治疗以及转移灶的控制具有重要意义。
金荞麦为蓼科植物天荞麦的根状茎，具有清热解毒、祛风利湿作用，是民间常用的中草药。威麦宁为金荞麦干燥根茎提取的单宁类化合物。研究发现，威麦宁具有抗肿瘤［1］及抗肿瘤转移作用［2］。本研究以Lewis肺癌的荷瘤小鼠为对象，研究威麦宁抑制肿瘤生长的作用机制。
1 材料与方法。
1.1 动物与瘤株。
C57 BL/6 雌性小鼠，体重(18±1)g，由中国医学科学院实验动物研究所提供，许可证号：SCXK11000006。瘤株：小鼠Lewis肺癌细胞株(Lewis Lung Carcinoma, 3LL)，中国医学科学院药物研究所提供。
1.2 药品与试剂。
威麦宁(北京华颐中药制药厂)，环磷酰胺(CTX，中美合资山西泰盛制药有限公司)，CD34免疫组化试剂盒(福州迈新生物技术开发公司)。
将Lewis肺癌C57 BL/6荷瘤小鼠处死，取肿瘤组织并制成小鼠Lewis肺癌单细胞悬液，调整细胞浓度为1×107/mL,活细胞数大于95%。取40只C57 BL/6小鼠，每只小鼠右侧腋部皮下接种0.2mL。接种后按体重随机分组，每组10只。生理盐水(NS)组：每只灌胃0.3mL生理盐水；威麦宁低(WML)、高(WMH)剂量组：分别按100mg/kg.d、250mg/kg.d摄入量灌胃给药，每只0.3mL；环磷酰胺(CTX)组：按60mg/kg腹腔注射给药1次。给药开始于接种后第2d，给药10d后停药，次日处死小鼠，剥离肿瘤组织称重，计算抑瘤率。 抑瘤率=(实验组的平均瘤重/对照组的平均瘤重)×100%。
1.4 瘤组织HE染色。
瘤组织用10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片(厚度为4μm)、HE染色，光镜下观察。
各组肿瘤组织切片常规脱蜡、水化，EDTA液抗原修复后，加抗鼠CD34单克隆抗体，然后按福州迈新两步法试剂盒操作步骤进行：加试剂A和B，加新配制的底物DAB溶液。苏木素复染，盐酸酒精分化，梯度酒精脱水干燥，中性树胶封片。实验设阳性与阴性对照。
结果判定标准：CD34阳性内皮细胞被染成棕黄色。由内皮细胞形成的条状、隙状等孤立或簇状结构并有管腔，且管腔小于8个红细胞大小者为一条血管；相互分离的内皮细胞但无明显管腔亦按1条血管计数。血管腔大于8个红细胞或管壁可见平滑肌者不计入内［3］。