深低温冷冻对鼠异体气管移植的免疫调节作用
通过大鼠冷冻气管移植术后不同时间段移植体的大体及病理改变，了解深低温冷冻对气管移植体各组织活性及免疫原性影响，为今后冷冻气管移植临床应用提供依据.
1材料和方法。
1.1材料。
SD大鼠32只，Wister大鼠64只，雄性，体质量200~250 g，购自第四军医大学动物实验中心.
1.2方法。
1.2.1同种异体移植气管段的获取按0.15 mg/kg肌肉注射速眠新将32只SD大鼠麻醉后，无菌切取颈段气管. 将切取气管体用生理盐水冲洗，并在混合抗生素溶液中（青霉素和庆大霉素）浸泡2 min，标本于10 min内降温冷冻保存. 深低温冻储2 mo后，移植前将装有气管段冷冻管从液氮中取出，置于37℃恒温水浴箱中，摇动，使气管段解冻复温.
1.2.2实验动物处理将64只Wister大鼠按所接受移植体是否在术前行深低温冷冻及术后处死时间不同分为8组（冷冻组C1~C4和未冷冻组F1~F4），每组8只. 各组均将气管移植体移植于实验动物腹腔大网膜中，分别于术后1，4，8，12 wk处死实验动物，行大体及病理学检查，组织学半定量测定上皮及软骨情况，免疫组化法判断各组的免疫排斥反应情况. 实验动物分笼饲养，全营养饲料购自第四军医大学动物实验中心.
1.2.3气管移植Wister大鼠行速眠新（0.15 mg/kg）肌肉注射全身麻醉. 仰卧位固定手术台上，剪除上腹毛发，碘酒、700 mL/L乙醇消毒，铺无菌洞巾，于上腹部旁正中行纵形切口，长约1 cm. 分离皮下，剪开肌肉筋膜组织，钝性分离肌肉组织，剪开腹膜，显露腹腔，提出部分大网膜. 打开冷冻管取出气管移植体. 用生理盐水反复冲洗干净，浸泡于混合抗生素溶液（20万U/L青霉素和200 mg/L庆大霉素）中5 min. 将气管移植体包于大网膜中，用3~0无损伤缝合线缝合大网膜，共三针将气管移植体固定于大网膜中，后将带移植体大网膜还纳腹腔，缝合腹部切口. 未冷冻组即行未冷冻气管段同种异体、异位移植组中，将新鲜取出的气管段经大量生理盐水冲洗后浸泡于混合抗生素溶液，其余步骤与冷冻组相同. 所有动物均于术后立即给予青霉素肌注，于术后给予肌肉注射青霉素1万U，每日2次，共7 d. 各组接受相同喂养. 各组实验动物在预杀期处死［1］.
统计学处理：计量数据用x±s表示，组间比较采用ANOVA，组间方差不齐时采用KruskalWalllis H检验. 采用SPSS11.5统计软件包处理数据，以P0.05为有统计学意义.
2结果。
2.1实验动物的生存状况和存活率各组实验动物均未发生麻醉及手术意外，术后生活状态良好，均未发生切口感染等并发症，观察期内存活率为100%.
2.2移植后气管的大体表现各组气管移植体外覆大网膜血管丰富，网膜组织与气管移植体粘连紧密. 各组未见软骨环有断裂或被完全吸收现象. 冷冻组各气管移植体管壁略变薄，管腔无明显狭窄，狭窄程度均未超过20%，未冷冻组各气管移植体管壁增厚，F3，F4组移植体管腔明显狭窄超过30%，其中F4组移植体管腔狭窄超过50%. 可见，冷冻组与未冷冻组相比，各气管移植体管腔无明显狭窄（P0.05）.