五妙水仙膏的质量标准研究

【摘要】 　　目的建立五妙水仙膏的质量标准。方法采用薄层色谱法对处方中黄柏、五倍子、紫草3味药材进行定性鉴别；用高效液相法测定制剂中小檗碱的含量， 采用AichromBond—AQ—C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相为乙腈—0.033 mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值为3.0)—0.025 mol/L十二烷基硫酸钠（48∶30∶25），流速1.0 ml/min，柱温30℃；检测波长345 nm；进样量20μl。用高效液相法对所建立的小檗碱含量测定方法进行方法学验证，证明采用的含量测定方法适合于相应分析要求。验证内容有：线性关系考察，精密度实验，稳定性实验，专属性实验，重复性实验，以及加样回收率实验。结果薄层色谱专属性强；小檗碱的线性范围是0.07～0.28μg，r=0.999 5，平均加样回收率为98.11%，RSD为1.34%（n=6）。结论该方法简便、准确，重现性好，可作为五妙水仙膏质量控制的标准。

【关键词】 五妙水仙膏 小檗碱 五倍子 紫草 黄柏 质量标准。

Abstract：ObjectiveTo establish the quality standard for Wumiao Shuixian Cream.MethodsCortex Phellodendri chinense，Radix arnebiae and Galla chinesis in this prescription were identified by TLC.The content of the berberine was determined by HPLC: the column of AichromBondAQC18（4.6 mm×150 mm，5 μm）was used . The mobile phase was CH3CN—0.033 mol/LKH2PO4(trithylamine adjusted pH to 3.0)—0.025 mol/L SDS （48∶30∶25)，at the flow rate of 1.0 ml·min—1，the column temperature was 30℃,and detection wavelength was 345 nm.ResultsThe study on the quality control showed that the characteristic of identification by TLC was distinct and highly specific.The linear range of berberine was in the range of 0.07～0.28μg，r= 0.9995,the average recovery was 98.11%,RSD=1.34%(n=6).ConclusionThe method is simple,accurate and reproducible.It can be used effectively for the quality control of this preparation.

Key words：Wumiao Shuixian Cream ； Berberine; Cortex Phellodendri chinense； Radix arnebiae； Galla chinesis； Quality standard。

五妙水仙膏处方来源于原部版标准，具有祛腐生新、清热解毒之效。主治毛囊炎、结节性痒疹、寻常疣、神经性皮炎等。笔者按照中药新药研究规范，根据以上药的理化性质对黄柏，紫草，五倍子进行了鉴别；同时使用HPLC法测定了制剂中小檗碱的含量，建立了可靠、准确、专属性强的质量控制方法。

1 仪器与材料。

日本岛津LC—10ADVP高效液相色谱仪，岛津SPD—10AVP紫外检测器，HW色谱工作站。黄柏药材购自淮安市药材公司（由江苏某药业有限公司提供，品种：关黄柏；产地：内蒙），经南京中医药大学王春根教授进行品种鉴定。盐酸小檗碱对照品购自中国药品生物制品检定所（供含量测定用，批号：0713—200107）。3批产品由江苏某药业有限公司生产并提供（批号分别为：050801，050820，050922。甲醇、乙醇等试剂由上海久亿化学试剂有限公司生产，均为分析纯或色谱纯。

2 方法与结果。

2.1 定性鉴别。

2.1.1 黄柏TLC鉴别［1］。

对照品溶液：取盐酸小檗碱对照品，适量加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。

对照药材溶液：取黄柏对照药材1 g，加甲醇5 ml，超声处理15 min，滤过，滤液补充甲醇至5 ml，作为对照药材溶液。

供试品溶液：取本品3 g，加甲醇5ml，用与对照药材溶液相同的方法制得供试品溶液。

阴性对照液：取除黄柏以外的其它4味药材按处方比例制得的阴性样品3 g，用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。

吸取上述4种溶液各4 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－醋酸乙酯—异丙醇－甲醇—浓氨试液（18∶9∶7∶9∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个黄色荧光斑点；而阴性对照液无此斑点（见图1）。

2.1.2 紫草的TLC鉴别［2］。

对照药材溶液的制备：取紫草对照药材0.5 g，加乙醇10 ml，超声处理15 min，滤过，滤液低温浓缩至约1 ml，作为对照药材溶液。

供试品溶液的制备［3］：取本品15 g，加50 ml乙醇，用盐酸调节pH值至6，超声处理20 min，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，加石油醚（30～60℃）30 ml振摇提取1次，取石油醚层，加无水硫酸钠3 g，搅匀，静置2 h，滤过，滤液低温浓缩至约1 ml，作为供试品溶液。

阴性液的制备：取除紫草以外的其它4味药材按处方比例制得的阴性样品15 g，用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。

吸取上述3种溶液各4 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－丙酮－二氯甲烷—冰醋酸（8∶1∶0.1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照液无此斑点（见图2）。

2.1.3 五倍子TLC鉴别。

对照品溶液［4］：取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液［5］：取本品5 g，加甲醇20 ml，再加水5 ml，用盐酸调节pH值至2，超声处理20 min，滤过，滤液浓缩近干，加甲醇约1 ml，作为供试品溶液。

阴性对照液［6］：取除五倍子以外的其它4味药材按处方比例制得的阴性样品5 g，用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。

吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷－甲酸乙酯－甲酸（5∶5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁甲醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝色斑点，而阴性对照液无此斑点（见图3）。

2.2 含量测定［7］　　　　本方中黄柏中小檗碱是药用的主要成分，且其中含有的小檗碱的化学性质稳定，测定方法简便，故在含量测定时选择制剂中的小檗碱为指标。

2.2.1 色谱条件。

AichromBond—AQ—C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；柱温：30℃；流动相:乙腈—0.033 mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值为3.0)—0.025 mol/L十二烷基硫酸钠（48∶30∶25），流速1.0 ml/min；检测波长345 nm；进样量20 μl。

2.2.2 对照品溶液的制备 　　精密称得盐酸小檗碱对照品14.0 mg，置10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，从中精密吸取1ml置100 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得每毫升含0.014 mg的对照液，备用。