曲克芦丁对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用
作者：齐贵胜， 裴素霞， 任家胜。
摘要：目的探讨曲克芦丁对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响及其机理。方法将Wistar大鼠40只随机分为假手术对照组、缺血再灌注组(I/R 组)和I/R 加曲克芦丁预处理组。I/R 加曲克芦丁预处理组动物术前腹腔内注射曲克芦丁20 mg/kg, 1次/d, 连续3 d。 然后制作大鼠肝缺血再灌注损伤模型，检测大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量及肝组织中脂质过氧化反应产物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量, 并通过光镜观察肝组织结构的形态学改变。结果用曲克芦丁处理组大鼠血清中ALT 和AST及肝组织中MDA含量明显低于缺血再灌注组(P 0.01) , 而肝组织中SOD含量则高于缺血再灌注组(P 0.01) , 与假手术组差异较小(P 0.05), 肝细胞形态学异常改变较I/R 组也明显减轻。结论曲克芦丁对肝脏I/R损伤具有保护作用，其机理与抑制氧自由基的生成,增强氧自由基的清除, 减轻肝细胞脂质过氧化作用有关。
Preventive Effect of Troxerutin Injection on the Damage of IschemiaReperfusion in Rat Liver。
Abstract：ObjectiveTo study the preventive effect on damage of ischemia—reperfusion in rat liver by applying Troxerutin Injection.Methods30 rats were put randomly into sham operated control(SOC)group ,ischemia reperfusion ( I/ R) group and ischemia reperfusion + Troxerutin ( I/ R + Troxerutin)group.The animal model of hepatic ischemia—reperfusion was made by temporarily blocking the hepatic portal blood vessels and releasing 30 minutes later. The malondialdehyde (MDA) ,superoxide dismutase (SOD) in liver tissue and ALT, AST levels in the blood were determined after the liver had been reperfused for 120 minutes ,the hepatic tissue was examined under light microscope. ResultsMDA, ALT, AST decreased and SOD increased significantly in I/ R + Troxerutin group when compared those in the I/ R group （P 0.01) . The histologic changes of the liver tissue under light microscope in the I/ R + Troxerutin group was more easer than in the I/ R group.ConclusionTroxerutin has the ability to scavenge oxygen free radical (OFR) and to protect from the damage of ischemia—reperfusion in rat liver.
Key words：Troxerutin; Liver; Ischemia—reperfusion; Oxygen free radical 在复杂的肝胆手术、严重肝创伤的处理及肝移植时均不可避免地会导致肝缺血再灌注损伤(Ischemia/Reperfusion，I/R) ,甚至引发肝功能衰竭,而药物预适应是减轻I/ R 损伤的有效方法之一。芦丁( rutin) 又名芸香苷, 为一来源很广的黄酮类化合物。芦丁及其衍生物具有广泛的药理活性, 具有降低毛细血管通透性、抗炎、抗病毒、镇痛、抗氧化及抑制醛糖还原酶等多方面作用［1，2］。 临床上主要用于防治脑出血、高血压、视网膜出血、紫癜和急性出血性肾炎等。文献上对芦丁在心脑血管疾病方面的作用机制研究和探讨较多,但其是否对肝脏的缺血再灌注损伤具有保护作用目前尚未见文献报道。本实验复制大鼠肝缺血再灌注损伤模型，并应用芦丁的可溶性羟乙基衍生物曲克芦丁(Troxerutin)对动物进行术前预处理。测定各组大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量及肝组织中脂质过氧化反应产物丙二醛(MDA) 和超氧化物歧化酶(SOD)的含量,光镜检查肝细胞结构的形态学改变，观察曲克芦丁对大鼠肝脏I/R 损伤的保护作用并探讨其作用机理。
1 材料与方法。
1.1 材料实验动物与分组：成年健康Wistar大鼠30 只, 由山东大学医学院动物中心提供, 体重（250±30）g, 雌雄不限, 随机分为3 组, 每组10 只大鼠。①假手术对照组:（sham operated control , SOC） 常规手术和术后处理; ②肝缺血再灌注组:（ischemia— reperfusion , I/ R，模型组）, 夹闭肝固有动脉和门静脉30 min 后, 再灌注120 min; ③曲克芦丁预处理组:（I/R +Troxerutin）术前腹腔内注射曲克芦丁20 mg/kg, 1次/d, 连续3 d, 然后制作肝缺血再灌注损伤模型。
1.2 药品与试剂曲克芦丁注射液由山东华鲁制药有限公司生产（批号：A0507121；规格：60 mg/支）。试剂：血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA )、超氧化物歧化酶(SOD) 测定试剂盒, 均购于南京建成生物工程研究所。
1.3 方法。
1.3.1 模型制作各组动物均手术前12 h禁食,不禁饮水。用1% 戊巴比妥钠麻醉后固定于手术台上, 常规脱毛、消毒、铺巾后, 上腹正中切口,打开腹腔，分离出肝蒂, 游离开肝固有动脉、门静脉和肝总管， 用小血管夹同时夹闭肝固有动脉和门静脉,造成肝脏缺血。30 min后取下血管夹恢复肝脏血供, 再灌注120 min后采集标本进行指标测定。
1.3.2 血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST) 的活性测定分别以标准试剂盒（按照试剂盒说明书）测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST) 的活性。
1.3.3 肝组织丙二醛(MDA )、超氧化物歧化酶(SOD)含量测定颈椎脱臼法处死大鼠后, 置于冰环境中, 迅速切取肝组织, 分析天平称取组织湿重, 用蒸馏水混后制成匀浆, 按MDA 和SOD 试剂盒操作程序进行测定MDA、SOD 的含量。
1.3.4 肝组织病理形态学检查将大鼠以颈椎脱臼法处死后, 快速取其肝组织，置于4%甲醛溶液中。将肝组织固定、脱水后，做石蜡切片，HE（苏木素－伊红）染色，用光学显微镜观察。
1.4 主要观察指标各组动物血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST) 的活性及肝组织丙二醛(MDA )、超氧化物歧化酶(SOD)含量测定结果；各组大鼠肝组织病理形态学变化。
1.5 统计学分析实验数据以 ±s表示，各组间差别的显著性用t检验判定。