高效液相色谱法测定余甘子药材中槲皮素的含量
【摘要】 目的建立余甘子药材中槲皮素含量测定的方法。方法HPLC法测定槲皮素含量。色谱柱为SHIMADZU VP—ODS (5 μm ，250 mm×4.6 mm)，保护柱为大连中汇达C18，流动相：甲醇—0.4％磷酸溶液(含2.4 g·L—1庚烷磺酸钠)(50∶50)，流速1.0 ml·min—1，检测波长373 nm。结果进样量在0.02～0.20 μg范围内与色谱峰的峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 7)，余甘子药材平均加样回收率为97.3% ，RSD为0.99%(n= 6)。结论该方法操作简便、快速，有良好的精密度和准确性，可用于余甘子药材的质量控制。
AbstractObjectiveTo establish a method for determination of the content of quercetin in Phyllanthus emblica L..Methods Quercetin was quantitatively determined by high performance liquid chromagraphy(HPLC)．With SHIMADZU VP—ODS (5μm,4.6 mm×250 mm) column,a mixture of methanol and 0.4％ H3PO4（with 2.4 g·L—1 C7H15SO3Na）(50∶50) was used as mobile phase,the flow rate was 1 ml·min—1 and UV detection wavelength was at 373 nm． ResultsThe linear relationship was good within the range of 0.02～0.20 μg(r =0.9997)．The average recovery of Chinese medicinal plant Phyllanthus was 97.3% and the relative standard deviation was below 0.99% (n = 6)．ConclusionThe method is fast，simple，accurate and reproducible and can be used for the quality control of Phyllanthus emblica L.
Key wordsPhyllanthus emblica L.； Quercetin； HPLC。
余甘子为大戟科叶下珠属(Phyllanthus)植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果实。《云南省药品标准》《藏药标准》《中国药典》均收载。别称滇橄榄、橄榄、油甘子、望果；藏药称“久如拉”，傣药称“麻项帮”；古印度梵语称“庵摩勒”。在云南地区常作橄榄使用，还是藏族习用药材。味酸、甘、涩，主要用于治疗胃痛、肠炎、黄疸型肝炎、淋巴结核、高血压病等。研究表明余甘子具有抗氧化、抗癌、抗病毒、降血脂等作用［1］。余甘子主要含没食子酸(Gallic acid)；鞣花酸(Ellagic acid)；1—O—没食子酰基—β—D葡萄糖；3，6—二—O—没食子酰基—D—葡萄糖；诃子酸(Chebulinic acid)；槲皮素(Quercetin)；诃黎勒酸(Chcbtllagic acid)；鞣料云实精(Corilagin)；3—乙基没食子酸(3—ethoxy—4，5—dihydroxy—benzoic acid)等，其中槲皮素主要以槲皮苷的形式存在。余甘子还含有大量维生素C(1.0%～1.8%)，且含量稳定［2］。本实验采用高效液相色谱法测定余甘子药材中槲皮素的含量。
1 仪器与试药。
岛津LC—20AT高效液相色谱仪、SPD—20A紫外检测器、CBM—102色谱数据处理机；槲皮素对照品由中国药品生物制品检定所提供，甲醇、庚烷磺酸钠为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为纯净水。 余甘子药材产地为云南省新平县平甸乡，春季采收干燥。经作者鉴定为大戟科叶下珠属植物余甘子Phyllanthus emblica L.的果实。
2 方法与结果。
2.1 色谱条件。
SHIMADZU VP—ODS (5 μm ，250 mm×4.6 mm)色谱柱，大连中汇达C18保护柱，甲醇—0.4％磷酸溶液(含2.4g·L—1庚烷磺酸钠)(50∶50)，流速1.0 ml·min—1；柱箱温度35℃，紫外检测波长373 nm，在上述条件下，样品中槲皮素与其它峰分离度大于2.0，理论塔板数达10 000以上，槲皮素峰拖尾因子在1.05～1.18之间，且样品中其它组分色谱峰无干扰，见图1。
取槲皮素对照品适量，精密称定，用甲醇溶解，制成含槲皮素0.010 mg·ml—1的对照品溶液。
取余甘子粉末(过40目筛)约5 g，精密称定，加入250 ml甲醇，加热回流1.5 h，回收甲醇，残渣精密加入甲醇—5%盐酸溶液(4∶1)的混合液25 ml，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45 μm滤膜［3,4］，即得。
2.4 标准曲线与线性范围。
精密吸取槲皮素对照品溶液2，4，6，10，14，20 μl进样测定，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样质量数(μg)为横坐标，进行线性回归计算，得回归方程：Y = 53 819X — 45 028 (r=0.999 7)，在0.02～0.20 μg范围内槲皮素有良好的线性关系。
2.5 精密度实验。
精密吸取槲皮素对照品溶液10 μl，连续进样6 次，记录色谱图，槲皮素保留时间tR=15.512，其峰面积相对标准偏差RSD值为0.97%（n=6）。
2.6 重复性实验。
分别取同一批余甘子药材按“2.3”项下方法制备供试品溶液5份，进样，记录色谱图，计算结果，药材中槲皮素含量的平均值为0.563 g，RSD值为0.89％。
取同一份余甘子药材供试品溶液，室温下，分别于0，2，6，10，14，18，24 h，进样7次，记录色谱图，其峰面积相对标准偏差RSD值为1.07%（n=7）。实验结果表明供试品溶液在24 h内稳定。