苦参药材高效液相指纹图谱分析方法研究
【摘要】 目的:探讨一种评价苦参质量的高效液相指纹图谱分析方法的可行性及其应用价值。方法:采用高效液相色谱方法，Hypersil C18 (250mm×4.6mm,5μm) 色谱柱,以甲醇—乙腈—20mmol/L磷酸二氢钾溶液（加三乙胺调pH至8.0）为流动相,梯度洗脱。流速为0.8 mL·min—1,柱温：30℃；检测波长220nm,建立苦参药材HPLC指纹图谱共有模式,并对不同产地药材进行了相似度比较。结果:建立了苦参药材HPLC指纹图谱共有模式，并对不同产地药材进行相似度比较。结论:本研究建立的指纹图谱检测方法简便、快捷、可靠,可用于苦参药材的质量评价。
【ABSTRACT】 Objective:To establish a method for analyzing HPLC fingerprints of Sophora flavescens Ait.Methods:The HPLC method was used with Hypersil C18 column (250mm×4.6mm，5μm).The mobile phases were consisted of methanol— acetonitrile —20mmol/L KH2PO4 solution (adjusted pH to 8.0 with triethylamine) respectively,gradient elute.The flow rate was 0.8mL·min—1.The temperature of column was 30℃.The UV detection wavelength was 220nm.Results:The mutual mode of HPLC fingerprints was set up and the similar degrees to the crude drugs of different habitats were compared.Conclusion:The method was simple and。
reliable,and it was capable of effectively controlling the quality of Sophora flavescens Ait.
【KEY WORDS】 SOPHORA FLAVESCENS;Chromatography/Liqnid;COLLECTION OF ILLUSTRATION。
药用苦参为豆科植物苦参（Sophora flavescens Ait）的干燥根,具有清热燥湿、祛风杀虫、利尿等功效［1］。经药理实验和临床观察证明,其中主要含生物碱成分,同时还含黄酮、醌类等成分。其中苦参碱(matrine)为其有主要有效成分之一，具有抗肿瘤,平喘和抑菌作用;氧化苦参碱具有抗肿瘤,平喘等作用。黄酮类成分具有抗心律失常及抗真菌作用［2］。野生苦参在全国的分布较广,质量差异也较大,为了保证含苦参的中药制剂及临床处方药理作用，本文采用HPLC法对中药苦参进行了指纹图谱分析。
1 材料与方法。
1.1 仪器 Agilent—1100高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，二极管阵列检测器（DAD），手动进样器，BS210S电子分析天平（北京赛多利斯天平有限公司），TU—1800S紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），C5860A超声脱气仪（天津开发区色谱分析仪器有限公司），412—1离心机（上海卫生器械厂），GM—0.33H隔膜真空泵及溶剂过滤器（天津市腾达过滤器件厂）。
1.2 试药 乙腈、甲醇均为色谱纯,其他试剂为分析纯，水为重蒸馏水。氧化苦参碱对照品(110780—200405),苦参碱对照品(110805—200306),槐定碱对照品（110784—200303）由中国药品生物制品检定所提供。本实验共收集河北、山西和内蒙等地产苦参药材样品11批,经张家口市药品检验所孟燕主任中药师鉴定均为豆科植物苦参（Sophora flavescens Ait）的干燥根。
1.3 方法。
1.3.1 色谱条件。
色谱柱Hypersil BDS C18（250mm×4.6mm,5μｍ）；柱温：30℃；流动相： A：20mmol/L磷酸二氢钾溶液,加三乙胺调pH至8.0，B：甲醇—乙腈（1∶3），线性梯度洗脱（0～12min为B5%～15%； 12～30min为B15%～40%； 30～50min为B40%～55%；50～60min为B55%～70%）。流速0.8mL·min—1；检测波长：220nm；手动进样20μL。
1.3.2 溶液配制。
1.3.2.1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱对照品适量,分别加50%甲醇溶解,制成每1mL含苦参碱和槐定碱各0.05mg,氧化苦参碱0.15mg的溶液。
1.3.2.2 供试品溶液制备［3］ 以苦参对照药材为样品，选择不同溶剂，不同提取方法进行对比实验，分别以五种不同的提取方法制备供试品溶液。
①50%甲醇回流方法：精密称定苦参药材粉末(过40目筛) 0.2g，加50%甲醇50mL于圆底烧瓶中,称定质量。回流1h(沸腾开始计时),放冷，用50%甲醇补足质量。滤纸滤过,取续滤液,经0.45μm的微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
②85%乙醇回流方法：精密称定苦参药材粉末(过40目筛) 0.2g，加85%已醇50mL于圆底烧瓶中,称定质量。回流1h(沸腾开始计时),放冷，用85%乙醇补足质量。滤纸滤过,取续滤液，经0.45μm的微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
③水超声提取方法：精密称定苦参药材粉末(过40目筛) 0.2g，置具塞瓶中,加水50mL，称定质量，放置24h，超声提取45min，放冷，用水补足质量。取上清液离心（4000r/min）,微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品溶液。
④50%甲醇超声方法：精密称定苦参药材粉末(过40目筛) 0.2g，置具塞瓶中,加50%甲醇50mL，称定质量，放置24h，超声提取45min，放冷，用50%甲醇补足质量。取上清液离心（4000r/min）,微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品溶液。
⑤氯仿加浓氨溶液超声方法：取苦参药材粉末约(过40目筛)0.2g，置于锥形瓶中,加入氯仿50mL,浓氨溶液0.3mL，称定质量。超声提取45min，放冷，用氯仿补足质量。取上清液离心（4000r/min）,微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品溶液。
用5种方法制备的供试品溶液，分别在上述色谱条件下进样，记录色谱图。以氧化苦参碱、槐定碱和苦参碱为指标，结合测定结果和色谱图的分离情况，综合评价提取效果，选定50%甲醇超声方法为苦参HPLC指纹图谱供试品溶液的制备方法。