结肠肿瘤组织中MMP—2和MMP—7表达的临床研究
【摘要】 目的：观察正常结肠黏膜、结肠腺瘤和结肠癌组织中MMP—2和MMP—7的表达，探讨两种蛋白表达在结肠肿瘤发生、侵袭及转移中的意义。方法：采用RT—PCR方法检测40例结肠腺瘤、60例结肠癌肿瘤组织和周围正常黏膜组织中MMP—2、MMP—7的表达，进行半定量分析。结果：结肠腺瘤组织中的MMP—2表达水平高于正常黏膜（P0.05），结肠癌组织中MMP—2和MMP—7的表达水平均高于结肠腺瘤和正常黏膜（P均0.05），Ⅲ、Ⅳ期结肠癌组织MMP—2、MMP—7的表达水平高于Ⅰ、Ⅱ期（P0.05），Ⅳ期结肠癌组织MMP—2、MMP—7的表达水平高于Ⅲ期（P0.05）。结论：MMP—2和MMP—7的高表达可能与结肠肿瘤的侵袭和转移有关，但其高表达的机制尚需进一步探讨。MMP—7水平的检测可用于结肠癌的早期诊断。
[ABSTRACT] Objective: To investigate the expression of matrix metalloproteinase—2 （MMP—2） and matrix metalloproteinase—7（MMP—7） in colon adenoma and colon cancer. Methods: Forty tissue samples of colon adenoma and 60 of colon cancer were collected .Normal colonic tissues were also collected from the same subjects. The mRNA expression levels of MMP—2 and MMP—7 were quantitated using semiquantitative reverse transcription polymerase chain reactions. Results: The expression level of MMP—2 in the colon adenoma was higher than that in the normal colonic tissues （P0.05）. The expression level of MMP—2 and MMP—7 in the colon cancer was higher than that in the colon adenoma and normal colonic tissues（P0.05）. In colon cancer tissues, the expression level of MMP—2 and MMP—7 in stage Ⅲ and Ⅳ was higher than that in stage Ⅰ and Ⅱ（P0.05）. The ex。
pression level of MMP—2 and MMP—7 in stage Ⅳ was higher than that in stage Ⅲ（P0.05）. Conclusions: The expression level of MMP—2 and MMP—7 is related with the formation， invasion and translation of colon neoplasm. The mechanism of higher expression need more exploration.
[KEY WORDS] Colon neoplasms·Matrix metalloproteinases。
肿瘤细胞降解细胞外基质（extracellular matrix，ECM）是肿瘤生长和转移过程中的重要步骤，基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）通过降解ECM参与肿瘤的生长和转移。本研究通过观察正常结肠黏膜、结肠腺瘤和结肠癌组织中MMP—2和MMP—7的表达，探讨两种蛋白的表达与结肠肿瘤形成、侵袭和转移的关系。
1 资料与方法。
1.1 一般资料 收集2004年5月—2007年10月我院结肠腺瘤标本40例，年龄25~68岁，平均年龄40岁；结肠癌标本60例，年龄28~75岁，平均年龄48岁，其中TNM分期Ⅰ期10例、Ⅱ期18例、Ⅲ期22例、Ⅳ期10例。术中或纤维结肠镜活组织检查时留取肿瘤组织和距肿瘤边缘10 cm以上的正常组织，在20～30 min内置于—80 ℃冰箱内冻存。所有标本均经病理组织学明确诊断并且进行病理分期。
1.2 主要试剂和方法 Trizol、MMLV、Taq酶等主要试剂及E1AF和内参β—actin的引物均购自上海生工生物工程有限公司。按Trizol试剂盒说明提取mRNA，经逆转录得到cDNA，PCR扩增，琼脂糖电泳照像。MMP—2引物为正义链5’—ACCTGGATGCCGTCGTGGAC—3’，反义链5’—TGTGGCAGCACC AGGGCAGC—3’，扩增片段的长度为447 bp； MMP—7引物为正义链5’—AGATGTGGAGTGCCAGAT—3’，反义链5’—TAGACTGCTACC ATCCGTCC—3’，扩增片段的长度为365 bp；β—actin的引物为正义链5’—GTG GGGCGCCCCAGGCACCA—3’，反义链5’—CTCCTTAATGTCACGGACGAT TT— 3’，扩增片段的长度为500 bp。PCR条件：94 ℃ 1 min，58 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，循环35次，末次延长7 min。对PCR产物行凝胶电泳。
1.3 MMP—2和MMP—7的表达水平检测 将PCR产物电泳凝胶图像扫入计算机，用数字凝胶成像分析系统测出阳性检测指标和β—actin的吸光度，以检测指标与β—actin的吸光度比值表示不同组织MMP—2和MMP—7表达的水平。
1.4 统计学处理 利用SPSS 10.0软件进行分析，各组数据以x±s表示，均数间的比较使用方差分析，总体率的比较用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。