薄层色谱成像法定量分析何首乌中大黄素的含量
作者：蔡力行 戈早川 赖小辉。
【摘要】 目的研究用薄层色谱成像方法测定何首乌中大黄素的含量。方法以正己烷—醋酸乙酯—甲酸（15∶3∶0.3）为展开剂，以硅胶G为固定相展开大黄素标准样品和何首乌抽提液，用色谱成像系统处理薄层斑点，将斑点信息转换成谱峰信息进行定量。结果大黄素标准工作曲线在0.2～1.0 μg范围内呈线性，相关系数r＝0.993。何首乌样品中大黄素含量为0.184 mg/g，RSD为1.0%，回收率100.9%，RSD为3.3%。结论 薄层色谱成像法可以应用于何首乌药材的质量管理控制，配合相应的展开系统可以推广至许多应用领域。
中药材何首乌为蓼科植物何首乌的干燥块根，具有解毒、消痈、润肠通便的功能，可用于治疗瘰疬疮痈、风疹瘙痒、肠燥便秘和高脂血症。何首乌主要的化学成分为：大黄素（emodin）、大黄酚（chrysophanol）、大黄素甲醚（physcion）、大黄素—1,6—二甲醚(emodin—1,6—dimethylether)、大黄素—8—甲醚(questin)、ω—羟基大黄素(citreorosein)、ω—羟基大黄素—8—甲醚(questinol)、2—乙酰基大黄素(2—acetylemodin)、大黄素—8—O—β—D—葡萄糖苷(emodin—8—O—β—D—glucoside)、大黄素甲醚—8—O—β—D—葡萄糖苷(Physcion—8—O—β—D—glucoside)等。其中大黄素是一种羟基蒽醌的衍生物。分子式C15H10O5。橙色针状晶体，熔点256～257℃；不溶于水，能溶于乙醇，稍溶于乙醚、氯仿、苯。 常用的何首乌及其制剂含量测定方法有：薄层色谱法、高效液相色谱法、紫外—可见分光光度法、高效毛细管电泳法、荧光分光光度法、酶化学发光法和流动注射化学发光法等［1］。吴琳［2］用甲醇、水加乙醇加盐酸混合液和氯仿水浴回流提取，点于含0.3%CMC—Na硅胶G薄层板，用苯—甲醇—甲酸（3∶0.3∶0.05）展开，扫描波长430 nm，测定何首乌中大黄素含量，加样回收率96.13%。张玉华等［3］用95%乙醇索氏提取，点于同一硅胶G板，用石油醚∶正己烷∶醋酸乙酯∶甲酸（1∶3∶1.5∶0.1）展开，用甲醇洗脱，加1%醋酸镁—甲醇液显色，用分光光度计于波长512 nm处测定吸收值，测定何首乌中大黄素含量。本实验采用薄层色谱成像法定量分析何首乌中大黄素的含量。现报道如下。
1 仪器与试剂 GOODLOOK—1000型薄层色谱成像系统（上海科哲生化科技有限公司）及SnigIt 8 软件（TechSmith公司）。KQ—250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。硅胶G薄层板（青岛海洋化工有限公司）。正己烷，醋酸乙酯，甲醇，甲酸（均为分析纯）。大黄素标准对照品（购于中国药品生物制品检定所）。中药材何首乌（购于广东本草药业连锁有限公司学府路分店），药材经深圳市药品检验所熊英高级工程师鉴定确为制何首乌Polygonum multiflorum Thunb.
2 方法。
2.1 薄层条件薄层板为硅胶G；展开剂为正己烷—醋酸乙酯—甲酸（15∶3∶0.3，V/V/V）。用微量注射器吸取何首乌供试品溶液，在胶硅G薄层（点样前在烘箱中于110℃活化1 h）的下端1.0 cm的基线上点样，点间距离为0.8 cm，点样后自然晾干。取展开剂置于层析缸中，将点样后的薄层板放入层析缸中内，预先平衡15 min.后再进行上行展开7 cm，将薄层取出，吹干，待测。
2.2 样品制备。
2.2.1 何首乌供试品溶液的配制将何首乌100 g药材置于烘箱中65℃烘干3 h，再放入干燥器中冷却。随机取约80 g用手提式中药粉碎机粉碎，粉末过200目筛，入无色广口瓶保存。称取过筛后的何首乌粉末各25 g，加250 ml甲醇用超声提取器30 min，蒸发浓缩，再将浓缩液转移到10 ml容量瓶中，用甲醇定容，得何首乌供试品溶液，10℃以下保存备用。
2.2.2 大黄素对照品溶液的配制精确称取0.005 0 g的大黄素标准对照品，加入甲醇溶解，置于10 ml容量瓶中定容，配成0.50 mg/ml大黄素标准对照品溶液，放置10℃以下保存备用。