高效液相色谱法测定姜连止泻片中盐酸小檗碱的含量
作者：孟蕾，沈圣民，张海鸣，李宝林，杜树山。
【摘要】 目的建立姜连止泻片中盐酸小檗碱的高效液相色谱（HPLC）含量测定方法。方法采用HPLC法，色谱柱:Waters Symmetry ShieldTM RP18 柱（150 mm×3.9 mm，5 μm），流动相:乙腈—0.05mol·L—1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至2.0）（22∶78），检测波长:270 nm，流速:1.0 ml·min—1，柱温：30℃。结果盐酸小檗碱在0.12～0.59 μg范围内呈现良好的线性关系（r=0.999 7），加样回收率为98.30％，RSD为1.19％（n=6）。结论该方法快速、简便、准确、重复性较好，结果可靠，可用于控制姜连止泻片制剂的质量。
Abstract：ObjectiveTo establish an accurate method for the determination of berberine hydrochloride in Jianglianzhixie Tablets.MethodsWaters Symmetry ShieldTM RP18 column (150 mm×3.9 mm，5 μm) in an oven at 30℃ was need，with a mobile phase consisting of acetonitrile—0.05mol·L—1 potassium dihydrogen phosphate(phosphate regulation pH value to 2.0) (22:78) and a UV detector at 270 nm, the flow rate was 1.0 ml·min—1. ResultsThe linear range of berberine hydrochloride was within 0.12～0.59 μg. The average recovery was 98.30% and RSD was 1.19%(n=6).ConclusionThe method is simple and accurate, and can be used for the quality control of Jianglianzhixie tablets.
Key words：Jianglianzhixie Tablets; Berberine hydrochloride; HPLC。
姜连止泻片是由炮姜、黄连、益智仁、诃子（肉）、麦芽（炒）、白术（炒）、补骨脂（盐）等组成的纯中药制剂，具有补肾健脾，清肠止泻之功效，用于治疗慢性腹泻或五更泄泻，肠鸣，腹胀、腹冷隐隐作痛，口淡、纳食减少，伴形寒肢冷，腰膝酸软等。姜连止泻片是北京中医药大学附属东直门医院姜良铎教授多年临床经验方。黄连为本品方中的君药，盐酸小檗碱是该药的主要有效成分，故以盐酸小檗碱为指标进行含量测定，控制成品的质量。参照《中国药典》2005年版Ⅰ部［1］，我们建立了姜连止泻片中盐酸小檗碱的HPLC含量测定方法，该方法快速、简便、准确、重现性较好，结果可靠，可用于姜连止泻片制剂的质量控制。
1 仪器与试药。
LC—2010C高效液相色谱仪（日本岛津公司）；KQ250型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），Mettler Toledo AG135十万分之一电子分析天平(瑞士Mettler公司）。
盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110713—200208，供含量测定用)；姜连止泻片（自制，批号：20070311、20070313、20070315）；乙腈为色谱纯，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果。
2.1 色谱条件色谱柱: Waters Symmetry ShieldTM RP18 柱（150 mm×3.9 mm，5 μm），流动相：乙腈∶0.05 mol·L—1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至2）（22∶78），检测波长:270 nm，流速:1.0 ml·min—1，柱温：30℃，进样体积：10 μl。
精密称取盐酸小檗碱对照品3.96 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，精密吸取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得(每1 ml含盐酸小檗碱39.6 μg)。
取本品适量，粉碎成细粉，称取细粉约0.15 g，置50 ml的容量瓶中，加入盐酸甲醇（1→100）45 ml，超声处理 (功率250 W，频率40 kHz) 30 min，取出，放冷至室温，用盐酸甲醇（1→100）定容至刻度，摇匀，滤过，即得。
2.2.3 阴性供试品溶液的制备按姜连止泻片制备工艺制得缺黄连的阴性样品制剂，再按供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液。