黑果枸杞叶片甲醇提取物清除自由基活性的研究
作者：白红进，周忠波杜红梅，徐卿棚。
【摘要】 目的测定黑果枸杞叶片甲醇提取物对DPPH自由基、羟自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O·— 2）的清除能力。方法采用DPPH法、水杨酸法、邻苯三酚自氧化法分别测定黑果枸杞叶片甲醇提取物清除DPPH自由基、羟自由基和超氧自由基的能力。结果在实验条件下，黑果枸杞叶片甲醇提取物对超氧阴离子，羟自由基，DPPH自由基均有不同程度的抑制作用, 最高清除活性分别达72.72%，54.90%，92.08%。结论黑果枸杞叶片甲醇提取物对DPPH· ，·OH和O·— 2自由基均具有较好的清除作用。
Abstract:ObjectiveTo study the scavenging activiy of the extract from the leaf of Lycium ruthenium Merr. on DPPH free radical, hydroxyl free radical(·OH) and superoxide free radical(O·— 2) ．MethodsThe methods of DPPH·，Salicylic Acid and pyrograllol auto—oxidation were used to assay the scavenging the extract from the leaf of L. rethenicum Murr. on the three free radicals.ResultsThe extract showed good scavenging effect on DPPH·,·OH and O·— 2 under the condition of experiment，and the highest free radical scavenging rate of different free radical were 72.72%，54.90%，92.08% orespecrively.ConclusionThe methanol extract of the leaf of L. rethenicum Murr shows good scavenging effect on DPPH·,·OH and ·O·— 2.
Key words:Leaf of Lycium ruthenicum Murr； Free radical； Antioxidation。
黑果枸杞Lycium ruthenicum Murr.系茄科(Solanaceae)枸杞属(Lycium)植物 ，是我国西北地区常见的野生盐生植物，其浆果果实成熟后为圆形，呈深黑色可用于治疗心热病、心脏病、月经不调、停经等病症［1］。其营养成分与宁夏枸杞相似［2］。《维吾尔药志》记载，维吾尔医常用黑果枸杞果实及根皮治疗尿道结石、癣疥、齿龈出血等症，民间作滋补强壮以及降压药［3］。近年来对黑果枸杞的研究主要集中在果实色素方面，对黑果枸杞其它部分的研究较少，关于叶片中的化学成分和生物活性研究未见文献报道。本实验通过体外实验，对黑果枸杞叶片甲醇提取物抗氧化活性进行了初步检测，为黑果枸杞的综合开发利用提供依据。
1 器材与方法。
1.1 材料。
黑果枸杞叶片于200607采自新疆塔里木盆地，经阴干、粉碎、密封保存。
1.2 仪器与试剂。
1.2.1 仪器。
SartoriusBS210S 电子天平（北京塞多利斯天平有限公司）；旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司）；DHG－9101－2SA型电热恒温鼓风干燥箱；ZP－200振荡器（江苏太仓市实验设备厂）；超纯水仪（美国Millipore公司）；T6—紫外可见分光光度计（北京普析通用有限公司）；centrifuge5415D型离心机（德国艾本德股份公司 （Eppendorf AG））。
1.2.2 试剂二苯代苦昧酰基自由基(DPPH·)（Sigma公司）；维生素C、维生素E；0.1 mol/L Tris—HCl 缓冲液（pH8.2，内含2 mmol/L EDTA）、邻苯三酚（60 mmol/L）、甲醇、乙醇、盐酸、H2O2、FeSO4、水杨酸等均为国产分析纯。
1.3 样品的制备。
称取干燥黑果枸杞叶片100 g，加甲醇2 000 ml，在常温下置于振荡器上（50 r/min）提取2次，24 h/次，过滤，合并滤液，减压浓缩，浓缩液置于50℃电热恒温鼓风干燥箱中干燥，得供试样品。
1.4 抗氧化性实验。
1.4.1 样品对DPPH自由基的清除实验DPPH溶液的配制：准确称取7.88 mg DPPH，用无水乙醇溶解并定容于100 ml容量瓶中，DPPH浓度为2×10—4 mo1/l，避光保存(0～4℃)。 将样品粉末用甲醇配成10 mg/ml溶液，倍比稀释为5，2.5，1.25，0.625 mg/ml溶液。分别取样品溶液2 ml与2×10－4 mol/L DPPH溶液2 ml均匀混合，在黑暗中放置30 min，以甲醇为空白在525 nm处测定其吸光度A，并以下式计算其清除率：
清除率（%）=［1－（Ai－Aj）/Ac］×100%。
式中：Ac：2 ml甲醇加2 ml DPPH溶液的吸光度；。
1.4.2 样品对羟自由基的清除实验参照陈留勇等［4］改动的Smirnoff（1989）的水杨酸法，并略作改动。利用H2O2与Fe2＋混合产生羟自由基，即：H2O2＋Fe2＋→·OH＋H2O＋Fe3＋。再在体系中加入水杨酸捕捉羟自由基并产生有色物质，该物质在510nm处有最大吸收。用该吸光度值来表示羟自由基的含量。反应体系中含有8.8 mmol/L H2O2 1 ml，9 mmol/l FeSO4 1 ml，9 mmol/L 水杨酸－乙醇 1 ml，待测溶液1 ml，其中H2O2是最后加入并启动整个反应。37℃反应30 min后，12 000 r/min离心6 min，然后以甲醇作参比，在510 nm下测定吸光度。考虑待测溶液本身吸光度的不同，以9 mmol/L FeSO4 1 ml，9 mmol/L 水杨酸－乙醇 1 ml，待测溶液1 ml和甲醇1 ml作为待测溶液的本底吸收值。清除率计算公式为： 清除率（%）＝〔A0－（AX－AX0）〕/A0×100% 其中A0为空白对照液的吸光度，AX为加入待测溶液后的吸光度，AX0为待测溶液的本底吸收值。