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丛丛皓彩如罗绮,个样诚堪示染人 ...
2022/9/16 15:00:03
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从容行乐兴无涯,地转清幽亦可佳 ...
2022/9/16 15:00:03
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Fas及FasL的检测收集的细胞1200r/min离心5min,去上清,100μLPBS重悬,使其浓度为1×107mL—1,2.1HepG2细胞凋亡检测结果双变量流式细胞术检测示HepG2细胞随时间的延长凋亡率增高,且LIGHT单独转染组优于空白对照组,LIGHT和IFN—γ联合转染组优于LIGHT单独转染组,P<0.01(图1,表1),2.2转染后Fas在HepG2细胞的表达Fas的表达率随时间延长而增高,LIGHT基因单独转染组表达率高于空白对照组,LIGHT基因和IFN—γ联合转染组高于LIGHT基因单独转染组,P<0.01(表2) ...
2021/8/11 13:52:26
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Fas及FasL的检测收集的细胞1200r/min离心5min,去上清,100μLPBS重悬,使其浓度为1×107mL—1,2.1HepG2细胞凋亡检测结果双变量流式细胞术检测示HepG2细胞随时间的延长凋亡率增高,且LIGHT单独转染组优于空白对照组,LIGHT和IFN—γ联合转染组优于LIGHT单独转染组,P<0.01(图1,表1),2.2转染后Fas在HepG2细胞的表达Fas的表达率随时间延长而增高,LIGHT基因单独转染组表达率高于空白对照组,LIGHT基因和IFN—γ联合转染组高于LIGHT基因单独转染组,P<0.01(表2) ...
2021/8/11 13:52:26
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将喻红炉火裹莲,精金百煅转光鲜 ...
2022/9/16 15:00:03
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一尺翠珉挥染罢,冰轮夜转屋山头 ...
2022/9/16 15:00:03
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老天恐被缁尘染,著在残山剩水边 ...
2022/9/16 15:00:03
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灵山付嘱人,示现威棱身, ...
2022/9/16 15:00:03
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琢玉英标不染尘,光涵月影愈清新 ...
2022/9/16 15:00:03
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巴陵三转语,大仰一瓯茶,有恩成怨恨,无事是雠家 ...
2022/9/16 15:00:03
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1.2.2质粒脂质体复合物的制备参考lipofectamine2000转染说明:将5μgpGenesil1和10μLlipofectamine2000分别稀释于OMEM中,总体积各为30μL,室温静置5min,将二者轻柔混合,孵育20min,制成质粒脂质体复合物.
,1.2.4荧光显微镜观察大鼠心肌转染效率pGenesil1质粒携带有U6启动子及增强型绿色荧光蛋白编码基因,成功转染后能在细胞内借助U6启动子转录并翻译出绿色荧光蛋白,我们可以通过荧光显微镜直接观察并评估质粒重组体的转染效率.第Ⅱ组大鼠取出心脏将心尖处局部注射部位取出,其余组将心底部主动脉流出道附近心肌取出,放入冷冻包埋剂中,低温成型后,冰冻切片机连续切片,片厚10μm,荧光显微镜下以蓝光激发EGFP绿色荧光,观察并摄片.采用HMIAS2000型全自动医学彩色图像分析系统分析各转染组和阴性对照组荧光的平均荧光强度,重复4次.
,2.1各转染组EGFP在转染心肌的表达荧光显微镜下阴性对照组心肌可见微弱的自发荧光,转染2d的大鼠心肌均表达明显增强的绿色荧光,其中冠状动脉灌注转染组荧光强度最强,荧光范围也最大,而以主动脉流出道位置荧光强度最强(图1). ...
2021/8/20 18:25:16
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1.2.2质粒脂质体复合物的制备参考lipofectamine2000转染说明:将5μgpGenesil1和10μLlipofectamine2000分别稀释于OMEM中,总体积各为30μL,室温静置5min,将二者轻柔混合,孵育20min,制成质粒脂质体复合物.
,1.2.4荧光显微镜观察大鼠心肌转染效率pGenesil1质粒携带有U6启动子及增强型绿色荧光蛋白编码基因,成功转染后能在细胞内借助U6启动子转录并翻译出绿色荧光蛋白,我们可以通过荧光显微镜直接观察并评估质粒重组体的转染效率.第Ⅱ组大鼠取出心脏将心尖处局部注射部位取出,其余组将心底部主动脉流出道附近心肌取出,放入冷冻包埋剂中,低温成型后,冰冻切片机连续切片,片厚10μm,荧光显微镜下以蓝光激发EGFP绿色荧光,观察并摄片.采用HMIAS2000型全自动医学彩色图像分析系统分析各转染组和阴性对照组荧光的平均荧光强度,重复4次.
,2.1各转染组EGFP在转染心肌的表达荧光显微镜下阴性对照组心肌可见微弱的自发荧光,转染2d的大鼠心肌均表达明显增强的绿色荧光,其中冠状动脉灌注转染组荧光强度最强,荧光范围也最大,而以主动脉流出道位置荧光强度最强(图1). ...
2021/8/20 18:25:16
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[摘要]目的:观察针对Toll样受体4的发夹结构RNA(shorthairpinRNA,shRNA)对内毒素刺激后小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞Toll样受体2表达的影响,并探讨其机制,h后予新霉素(G418)筛选获取稳定转染细胞株,未安装PDF浏览器用户请先下载安装原版全文 ...
2021/10/16 0:35:50
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转染时先按MOI值计算所需加入rAAV—2/EGFP病毒载体的体积数,在试管中将所需加入rAAV—2/EGFP病毒载体与DMEM/F12培养液混合形成转染液,将每组对应孔中加入相应的2ml转染液,MOI=0作为未转染对照组,同样操作但不转染rAAV—2/EGFP,37℃,5%CO2培养箱培养2h后,1000r/min离心5min,如此DMEM/F12清洗细胞2次,弃病毒残液,补充完全细胞培养液(DMEM/F12加2%B27,20ng/ml的EGF、bFGF)5ml,37℃,5%CO2培养箱培养,常规换液、传代,rAAV—2/EGFP体外转染对神经干细胞存活、增殖、分化的影响rAAV—2/EGFP转染NSCs后,各组分别在7、14、21天细胞传代时台盼兰拒染法检测细胞活力、细胞计数计算增殖倍数,rAAV—2对神经干细胞活力、增殖、分化的影响不同MOI的rAAV—2转染组和未转染对照组的NSCs在倒置显微镜下观察,均生长良好,细胞透光性好,形态完整,细胞碎片少,NSCs形成克隆球速度相当,细胞稳定性好,可连续传代,各组细胞在7、14、21天台盼兰拒染法检测细胞活力差异均无显著性(P>0.05)(见表1) ...
2021/8/18 23:34:54
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转染时先按MOI值计算所需加入rAAV—2/EGFP病毒载体的体积数,在试管中将所需加入rAAV—2/EGFP病毒载体与DMEM/F12培养液混合形成转染液,将每组对应孔中加入相应的2ml转染液,MOI=0作为未转染对照组,同样操作但不转染rAAV—2/EGFP,37℃,5%CO2培养箱培养2h后,1000r/min离心5min,如此DMEM/F12清洗细胞2次,弃病毒残液,补充完全细胞培养液(DMEM/F12加2%B27,20ng/ml的EGF、bFGF)5ml,37℃,5%CO2培养箱培养,常规换液、传代,rAAV—2/EGFP体外转染对神经干细胞存活、增殖、分化的影响rAAV—2/EGFP转染NSCs后,各组分别在7、14、21天细胞传代时台盼兰拒染法检测细胞活力、细胞计数计算增殖倍数,rAAV—2对神经干细胞活力、增殖、分化的影响不同MOI的rAAV—2转染组和未转染对照组的NSCs在倒置显微镜下观察,均生长良好,细胞透光性好,形态完整,细胞碎片少,NSCs形成克隆球速度相当,细胞稳定性好,可连续传代,各组细胞在7、14、21天台盼兰拒染法检测细胞活力差异均无显著性(P>0.05)(见表1) ...
2021/8/18 23:34:54
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transfectionefficiencyandcytotoxicityofselfpreparedpolyaminecationicliposome,评估制备的多聚胺阳离子脂质体转染哺乳动物细胞的转染效率及细胞毒性.方法:多聚胺阳离子脂质TCChol与中性磷脂DOPE以3∶1摩尔比,制备多聚胺阳离子脂质体,通过转染以增强型绿色荧光蛋白为报告基因的质粒PIRES2EGFP入HeLa细胞,Hep2细胞,倒置荧光显微镜下检测转染细胞的报告基因表达,通过MTT法,检测细胞存活分数,并以Lipofectamine2000为对照,评价制备阳离子脂质体转染效率及细胞毒性.结果:多聚胺阳离子脂质体转染效率略低于Lipofectamine2000,但细胞毒性较低,为一种相对高效低毒的阳离子脂质体.结论:多聚胺阳离子脂质体为一种相对高效低毒的阳离子脂质体,在基因转染和基因治疗方面具有较广阔的前景.【关键词,基因治疗能否成功最重要的影响因素是基因转染载体.阳离子脂质体能与目的基因以静电作用相结合,可携带的外源基因容量较大,且不含抗原成分,细胞毒性低,可被机体降解,能多次反复转染,因此成为一种有临床应用潜力的基因转染载体[1].多聚胺阳离子脂质体(polyaminecationicliposome,PCL)易与核酸形成静电复合物而自由通过亲脂性膜,因此,是阳离子脂质体中效果较好的核酸运载载体[2].本研究旨在以Invitrogen公司阳离子脂质体Lipofectamine2000为对照,转染带有增强型绿色荧光蛋白EGFP质粒PIRES2EGFP入HeLa细胞或Hep2细胞,通过荧光显微镜观察报告基因的表达,评价PCL的转染效率,通过MTT法检测细胞存活分数,评价自制PCL的细胞毒性. ...
2021/8/14 13:33:05
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作者:桂伶俐,刘志恒,张传汉,高峰,enhancedgreenfluorescentproteinintoimmortalizedneuralprogenitorcellsbynonviralvectors,protein;geneexpression;transfection;neuralprogenitorcell ...
2021/8/15 15:43:16
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作者:桂伶俐,刘志恒,张传汉,高峰,enhancedgreenfluorescentproteinintoimmortalizedneuralprogenitorcellsbynonviralvectors,protein;geneexpression;transfection;neuralprogenitorcell ...
2021/8/15 15:43:16
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suppressorofnonsmallcelllungcancer1,TSLC1)是一种新的肿瘤抑制基因,最早由Gomyo等〔1〕于1999年分析人类染色体11q23.2区域所发现,本实验将已构建完成的真核表达载体pReceiverM29TSLC1转染到HepG2肝癌细胞中,建立稳定转染TSLC1的HepG2肝癌细胞株,探讨TSLC1对肝癌细胞的抑制机制,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡两组细胞培养3d后,分别取约1×106个细胞,PBS洗2次,加入3倍体积70%冰乙醇过夜,50μg/ml碘化丙啶250μl,PBS240μl,RNase10μl,避光30min,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡 ...
2021/8/13 8:20:46
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suppressorofnonsmallcelllungcancer1,TSLC1)是一种新的肿瘤抑制基因,最早由Gomyo等〔1〕于1999年分析人类染色体11q23.2区域所发现,本实验将已构建完成的真核表达载体pReceiverM29TSLC1转染到HepG2肝癌细胞中,建立稳定转染TSLC1的HepG2肝癌细胞株,探讨TSLC1对肝癌细胞的抑制机制,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡两组细胞培养3d后,分别取约1×106个细胞,PBS洗2次,加入3倍体积70%冰乙醇过夜,50μg/ml碘化丙啶250μl,PBS240μl,RNase10μl,避光30min,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡 ...
2021/8/13 8:20:46
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林卫红,GABA基因转染组大鼠CX32表达在各个时程均有下降,KA对照组将大鼠麻醉固定,立体定位仪下在右侧杏仁核内注射KA0.1μg(前囟后5.5mm,中线右侧5.0mm,深度7.2mm) ...
2021/8/16 12:24:06
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林卫红,GABA基因转染组大鼠CX32表达在各个时程均有下降,KA对照组将大鼠麻醉固定,立体定位仪下在右侧杏仁核内注射KA0.1μg(前囟后5.5mm,中线右侧5.0mm,深度7.2mm) ...
2021/8/16 12:24:06
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构建转录因子Twist基因的短发卡状RNA(shRNA)质粒,转染人膀胱癌T24细胞株后检测T24细胞对羟基喜树碱(HCPT)的敏感性,Twist短发卡状RNA(shRNA)已由本实验室构建成功并证实可下调T24细胞中Twist基因mRNA和蛋白的表达〔1〕,shRNA质粒构建和筛选〔1〕TwistshRNA干扰序列:GCTGAGCAAGATTCAGACCCT ...
2021/8/9 8:59:07
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构建转录因子Twist基因的短发卡状RNA(shRNA)质粒,转染人膀胱癌T24细胞株后检测T24细胞对羟基喜树碱(HCPT)的敏感性,Twist短发卡状RNA(shRNA)已由本实验室构建成功并证实可下调T24细胞中Twist基因mRNA和蛋白的表达〔1〕,shRNA质粒构建和筛选〔1〕TwistshRNA干扰序列:GCTGAGCAAGATTCAGACCCT ...
2021/8/9 8:59:07
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研究构建的ABCE1基因SiRNA表达质粒基因沉默效果,及其对95D肺癌细胞株增殖、凋亡能力的影响,6对3种不同的ABCE1基因SiRNA表达质粒在95D肺癌细胞中进行转染,并用G418筛选,荧光显微镜观察3种质粒的转染效果,收集转染细胞,计数转染细胞总数、运用MTT法检测细胞活力,用ELISA法检测细胞凋亡,h的上述三组细胞,按细胞凋亡检测试剂盒说明书操作,尽快作比色分析(10~20min内),用底物缓冲液作空白对照,以波长405nm,参考波长492nm进行检测 ...
2021/8/15 3:02:27
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研究构建的ABCE1基因SiRNA表达质粒基因沉默效果,及其对95D肺癌细胞株增殖、凋亡能力的影响,6对3种不同的ABCE1基因SiRNA表达质粒在95D肺癌细胞中进行转染,并用G418筛选,荧光显微镜观察3种质粒的转染效果,收集转染细胞,计数转染细胞总数、运用MTT法检测细胞活力,用ELISA法检测细胞凋亡,h的上述三组细胞,按细胞凋亡检测试剂盒说明书操作,尽快作比色分析(10~20min内),用底物缓冲液作空白对照,以波长405nm,参考波长492nm进行检测 ...
2021/8/15 3:02:27
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窦晓兵钱颖,故本研究将含有GFP的逆转录病毒载体与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(vesecularstomatitisvirusGglyeoprotein,VSVG)共转染包装细胞系GP2293,收集培养液,经超高速离心浓缩,形成高滴度的病毒,感染Raw264.7细胞,以建立高效稳定转染的细胞系,病毒浓缩液转染Raw264.7细胞 ...
2021/8/17 1:52:26
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窦晓兵钱颖,故本研究将含有GFP的逆转录病毒载体与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(vesecularstomatitisvirusGglyeoprotein,VSVG)共转染包装细胞系GP2293,收集培养液,经超高速离心浓缩,形成高滴度的病毒,感染Raw264.7细胞,以建立高效稳定转染的细胞系,病毒浓缩液转染Raw264.7细胞 ...
2021/8/17 1:52:26
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蒋卫伟吴虹晔王曙光,探讨胆管癌细胞层黏连素受体(lamininreceptor,LNR)过表达与Fas配体(Fasligand,FasL)作用的关系,顺义组、反义组LNR细胞转染 ...
2021/8/13 16:51:56
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优化重组低氧诱导因子(HIF)1α真核表达质粒转染成骨细胞的条件,为进一步检测重组HIF1α真核表达质粒对成骨细胞功能的调控作用提供基础,采用脂质体介导的重组HIF1α真核表达质粒转染成骨细胞,其转染效率可因脂质体和质粒量的不同而有差别,碎块,加入2ml的0.1%Ⅱ型胶原酶,37℃气浴振荡消化1h,终止消化,液体移入另一离心管,1500r/min离心10min,弃去上清液,沉淀即为成骨细胞 ...
2021/8/13 12:25:47
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优化重组低氧诱导因子(HIF)1α真核表达质粒转染成骨细胞的条件,为进一步检测重组HIF1α真核表达质粒对成骨细胞功能的调控作用提供基础,采用脂质体介导的重组HIF1α真核表达质粒转染成骨细胞,其转染效率可因脂质体和质粒量的不同而有差别,碎块,加入2ml的0.1%Ⅱ型胶原酶,37℃气浴振荡消化1h,终止消化,液体移入另一离心管,1500r/min离心10min,弃去上清液,沉淀即为成骨细胞 ...
2021/8/13 12:25:47
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蒋卫伟吴虹晔王曙光,探讨胆管癌细胞层黏连素受体(lamininreceptor,LNR)过表达与Fas配体(Fasligand,FasL)作用的关系,顺义组、反义组LNR细胞转染 ...
2021/8/13 16:51:56
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recombinantCaspase3onhumanlaryngocarcinomacelllineHep2throughcoexpressionwithGFP,1.2.2检测重构型人Caspase3基因的表达取转染后48hHep2细胞约1×106个,用2.5g/L胰蛋白酶消化,1000r/min离心5min后弃去培养基,1倍PBS洗2次并收集细胞.以Trizol试剂盒提取转染细胞总RNA,逆转录反应按照反转录试剂盒操作进行,取5μL反转录产物为模板进行PCR扩增,95℃30s,50℃30s,72℃2min,30个循环,取4μLPCR产物,在含0.5mg/L溴化乙锭(EB)的琼脂糖凝胶(15g/L)中电泳分析,紫外观测仪观察结果.
,1.2.5MTT法测定转染Caspase3对Hep2细胞的抑制作用将未转染的Hep2细胞以2.5×107/L的密度接种于96孔板,每孔200μL,保留一排孔作为调零孔,待细胞贴壁后,分3组(转染组、空载体组、不转染组)进行转染,每组不同时间点平行3孔(n=3).分别于转染后的不同时间点(12,24,36,48,60,72h)吸弃培养液,加入200μL新配制的MTT(5g/L),37℃继续孵育4h,弃MTT液加入DMSO150μL,混匀,待所有样品作完上述处理后,用DG3022型酶标仪,测490nm波长吸光度,并作图将实验组与对照组进行比较. ...
2021/8/16 18:26:25
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dendriticcellstransfectedwithtotalRNAofHepG2celllineusingGFPmarkerinvitro,1.2方法参照Transfection2000说明书,pGFPC3转染HepG2,G418筛选2mon.筛选细胞命名HepG2GFP,荧光显微镜下观察.Trizol试剂提取HepG2GFP总RNA,紫外灯下观察,—80℃冻存备用.同样方法提取HepG2总RNA.取肝癌患者造血干细胞分离液,贴壁法分离单核细胞,贴壁细胞在细胞因子rhGMCSF,rhIL4作用下,诱导DCs.倒置显微镜、电子显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表型.
,d的DCs,转入6孔板,转染HepG2GFP总RNA.另设转染HepG2总RNA及空白对照组.继续培养48h.荧光显微镜下观察. ...
2021/8/18 12:59:55
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recombinantCaspase3onhumanlaryngocarcinomacelllineHep2throughcoexpressionwithGFP,1.2.2检测重构型人Caspase3基因的表达取转染后48hHep2细胞约1×106个,用2.5g/L胰蛋白酶消化,1000r/min离心5min后弃去培养基,1倍PBS洗2次并收集细胞.以Trizol试剂盒提取转染细胞总RNA,逆转录反应按照反转录试剂盒操作进行,取5μL反转录产物为模板进行PCR扩增,95℃30s,50℃30s,72℃2min,30个循环,取4μLPCR产物,在含0.5mg/L溴化乙锭(EB)的琼脂糖凝胶(15g/L)中电泳分析,紫外观测仪观察结果.
,1.2.5MTT法测定转染Caspase3对Hep2细胞的抑制作用将未转染的Hep2细胞以2.5×107/L的密度接种于96孔板,每孔200μL,保留一排孔作为调零孔,待细胞贴壁后,分3组(转染组、空载体组、不转染组)进行转染,每组不同时间点平行3孔(n=3).分别于转染后的不同时间点(12,24,36,48,60,72h)吸弃培养液,加入200μL新配制的MTT(5g/L),37℃继续孵育4h,弃MTT液加入DMSO150μL,混匀,待所有样品作完上述处理后,用DG3022型酶标仪,测490nm波长吸光度,并作图将实验组与对照组进行比较. ...
2021/8/16 18:26:25
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基于此,本文对草木染艺术进行了简单的介绍,并对其在现代服装中的运用进行了探究,二、草木染艺术在现代服装中的运用探究(一)草木染图案表现形式草木染有非常丰富的图案题材,更有成千上万中图形,经过长时间的演变,形成了清新、朴素的印染风格,跟人们对美好生活的向往更加契合,现代草木染被广泛用于睛、锦、涤、真丝、棉、天丝、毛、麻、大豆纤维等各种天然纤维或混纺、交织面料和成衣,融入了当代休闲服饰潮流 ...
2021/8/6 20:04:07
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基于此,本文对草木染艺术进行了简单的介绍,并对其在现代服装中的运用进行了探究,二、草木染艺术在现代服装中的运用探究(一)草木染图案表现形式草木染有非常丰富的图案题材,更有成千上万中图形,经过长时间的演变,形成了清新、朴素的印染风格,跟人们对美好生活的向往更加契合,现代草木染被广泛用于睛、锦、涤、真丝、棉、天丝、毛、麻、大豆纤维等各种天然纤维或混纺、交织面料和成衣,融入了当代休闲服饰潮流 ...
2021/8/6 20:04:07
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目的:通过电穿孔法将带有增强型绿色荧光蛋白基因(enhancedgreenfluorescentproteinEGFP)的真核表达载体pIRES2—EGFP(IRES2internalribosomeentrysite2内部核糖体进入位点2)质粒导入未成熟树突状细胞(ImmatureDendriticCell,imDC),探讨不同电穿孔条件对imDC电转染率和存活率的影响,mL,以淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMNC),在37℃和5%CO2饱和湿度条件下培养2h,取贴壁细胞即单核细胞(pDC),并测其纯度,调整细胞浓度为2×106/mL加入RPMI—1640液、10%胎牛血清(FCS)和细胞因子rhGM—CSF(1000U/mL),不同电压条件下转染imDC:根据北京基因公司提供参数及操作程序将pIRES2—EGFP质粒转入imDC,选择脉冲时间下400μs,细胞浓度1×106/mL、DNA剂量2μg不变,电压分别为200V、300V、400V条件下进行瞬间和稳定电转染 ...
2021/8/15 2:32:16
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目的:通过电穿孔法将带有增强型绿色荧光蛋白基因(enhancedgreenfluorescentproteinEGFP)的真核表达载体pIRES2—EGFP(IRES2internalribosomeentrysite2内部核糖体进入位点2)质粒导入未成熟树突状细胞(ImmatureDendriticCell,imDC),探讨不同电穿孔条件对imDC电转染率和存活率的影响,mL,以淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMNC),在37℃和5%CO2饱和湿度条件下培养2h,取贴壁细胞即单核细胞(pDC),并测其纯度,调整细胞浓度为2×106/mL加入RPMI—1640液、10%胎牛血清(FCS)和细胞因子rhGM—CSF(1000U/mL),不同电压条件下转染imDC:根据北京基因公司提供参数及操作程序将pIRES2—EGFP质粒转入imDC,选择脉冲时间下400μs,细胞浓度1×106/mL、DNA剂量2μg不变,电压分别为200V、300V、400V条件下进行瞬间和稳定电转染 ...
2021/8/15 2:32:16
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”沐染儿没有多余的精力去管妇人的话语,此时只觉口渴难耐,便轻轻的开口:“水......”沙哑的嗓音刺痛着声带令沐情十分难受,房门打开了,一白衣男子推门而进,对妇人微微点头道:“夫人,你先出去吧,令千金刚醒需要休息,”沐染儿没听到男子的嘀咕声,只见男子又摇头又点头的,只以为这男子脑子有病,扭头开始打量起了这间屋子 ...
2022/9/16 15:00:03
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探讨bax基因对人BcaCD885颊癌细胞凋亡的影响,bax质粒转染组BcaCD885细胞出现凋亡的形态学改变,TUNEL阳性红染凋亡细胞数量增多,凋亡小体出现,其细胞凋亡率与空白对照组及对照质粒转染组之间存在极显著差异(P0.01),细胞凋亡 ...
2021/8/14 12:07:56
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探讨bax基因对人BcaCD885颊癌细胞凋亡的影响,bax质粒转染组BcaCD885细胞出现凋亡的形态学改变,TUNEL阳性红染凋亡细胞数量增多,凋亡小体出现,其细胞凋亡率与空白对照组及对照质粒转染组之间存在极显著差异(P0.01),细胞凋亡 ...
2021/8/14 12:07:56
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春睡倦,
,自捡花枝行遍 ...
2022/9/16 15:00:03
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,老马已非筋力旧,好山重见面颜今 ...
2022/9/16 15:00:03
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学修行,如采药,
,携个清净篮儿,并无染著 ...
2022/9/16 15:00:03
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雅淡精神,铅黄未洗,犹带残妆,
,春艳一枝,鹅儿颜色,染就纤裳 ...
2022/9/16 15:00:03
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,况复秋雨霁,表里见衡山 ...
2022/9/16 15:00:03
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七载一相见,怳然如路衢, ...
2022/9/16 15:00:03
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雪里移苍斛,梢头点翠芒,只销三日暖,便圻数花房 ...
2022/9/16 15:00:03
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驱马出辽阳,万里转旂常,
,对敌六奇举,临戎八阵张 ...
2022/9/16 15:00:03
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春一点,
,透得酥温玉软 ...
2022/9/16 15:00:03
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,梨园法部兼胡部,玉辇长亭复短亭 ...
2022/9/16 15:00:03
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殿转牛衣冷不禁,著人无奈晓寒侵,由来十月清霜重,况乃荒村白露深 ...
2022/9/16 15:00:03
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,鷁飞元合退,羝乳偶成归 ...
2022/9/16 15:00:03
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露染霜干片片轻,斜阳照处转烘明,和烟飘落九秋色,随浪泛将千里情 ...
2022/9/16 15:00:03
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娇点点,
,困倚春光欲软 ...
2022/9/16 15:00:03
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低着烟花漠漠轻,正堪吟坐掩柴扃, ...
2022/9/16 15:00:03
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,漫漫芙蕖难觅路,翛翛杨柳烛知门 ...
2022/9/16 15:00:03
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条风吹转斗杓东,护日祥云一段红,圣主庆成神玺重,老亲喜动寿杯融 ...
2022/9/16 15:00:03
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春郊二月浴蚕时,傍岸溪流可染衣, ...
2022/9/16 15:00:03
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冰雪肌肤,靓妆喜作梅花面,寄情高远,雾收云卷 ...
2022/9/16 15:00:03
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霜染溪枫叶叶丹,翠鳞浮动汐波閒, ...
2022/9/16 15:00:03
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宝刀裁花碎罗縠,带腊圆红黄染粟, ...
2022/9/16 15:00:03
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一搦腰肢初见後,
,恰似娉婷,十五藏朱牖 ...
2022/9/16 15:00:03
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芳心一点,
,瘴雾难侵尘不染 ...
2022/9/16 15:00:03
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祝融峰下别,三载梦魂劳, ...
2022/9/16 15:00:03
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浅深花面染,来去柳边浮, ...
2022/9/16 15:00:03
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草断城头路,春未履屡穿, ...
2022/9/16 15:00:03
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,文章已变南山雾,羽翼应抟北海风 ...
2022/9/16 15:00:03
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醉归那忍旋分手,竹屋灯明,石鼎茶声,转自凄清 ...
2022/9/16 15:00:03
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研究DOC—1R基因转染对小鼠腹水瘤细胞体外生长的作用,DOC—1R基因转染可抑制小鼠腹水瘤细胞体外生长并诱导其凋亡的发生,本研究应用基因转染的方法将小鼠DOC—1R基因转染小鼠腹水瘤细胞中,以观察此基因对小鼠腹水瘤细胞体外生长的影响 ...
2021/8/12 10:01:34
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以脂质体Lipofectimine?2000介导,将PARP11308的siRNA表达载体转染Lewis肺癌细胞株,将其分为空白对照组、错义序列组、siRNA组,2Gy照射组、2Gy照射+错义序列组、2Gy照射+siRNA组,本文应用PARP11308的RNAi载体转染小鼠Lewis肺癌细胞株,观察PARP1的RNAi对小鼠Lewis肺癌细胞株凋亡的影响,在各组细胞转染24h后分别加入MTT20μl,培养箱中4h,弃上清加入DMSO,振荡15min,酶标仪检测吸光度(A)值 ...
2021/8/18 19:42:28
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以脂质体Lipofectimine?2000介导,将PARP11308的siRNA表达载体转染Lewis肺癌细胞株,将其分为空白对照组、错义序列组、siRNA组,2Gy照射组、2Gy照射+错义序列组、2Gy照射+siRNA组,本文应用PARP11308的RNAi载体转染小鼠Lewis肺癌细胞株,观察PARP1的RNAi对小鼠Lewis肺癌细胞株凋亡的影响,在各组细胞转染24h后分别加入MTT20μl,培养箱中4h,弃上清加入DMSO,振荡15min,酶标仪检测吸光度(A)值 ...
2021/8/18 19:42:28
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研究DOC—1R基因转染对小鼠腹水瘤细胞体外生长的作用,DOC—1R基因转染可抑制小鼠腹水瘤细胞体外生长并诱导其凋亡的发生,本研究应用基因转染的方法将小鼠DOC—1R基因转染小鼠腹水瘤细胞中,以观察此基因对小鼠腹水瘤细胞体外生长的影响 ...
2021/8/12 10:01:34
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舒通,
,夏夜微行欲邂凉,星稀歘近渐苍苍 ...
2021/7/10 3:29:09
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探讨Na+H+交换体1(Na+H+exchanger1,NHE1)反义基因磁性纳米微粒对SGC7901胃癌细胞形态学的影响,NHE1反义基因磁性纳米微粒能使SGC7901胃癌细胞发生形态学及超微结构的变化,有促进SGC7901胃癌细胞分化的作用,本研究使用NHE1反义基因磁性纳米微粒体外转染SGC7901胃癌细胞,观察基因转染对胃癌细胞形态学的影响 ...
2021/8/19 3:43:37
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探讨Na+H+交换体1(Na+H+exchanger1,NHE1)反义基因磁性纳米微粒对SGC7901胃癌细胞形态学的影响,NHE1反义基因磁性纳米微粒能使SGC7901胃癌细胞发生形态学及超微结构的变化,有促进SGC7901胃癌细胞分化的作用,本研究使用NHE1反义基因磁性纳米微粒体外转染SGC7901胃癌细胞,观察基因转染对胃癌细胞形态学的影响 ...
2021/8/19 3:43:37
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TRAIL和DDP可通过caspase、NFκB途径抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖,同时DDP通过对survivin的调节发挥对TRAIL的协同作用.
,分别设空白对照组、空质粒转染组、单独DDP化疗组、单独TRAIL转染组、TRAIL联合DDP化疗组,1.空白对照组,2.空质粒转染组,3.单独DDP化疗组,4.pCMVTRAIL重组质粒转染组,5.联合用药组 ...
2021/8/10 6:55:47
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TRAIL和DDP可通过caspase、NFκB途径抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖,同时DDP通过对survivin的调节发挥对TRAIL的协同作用.
,分别设空白对照组、空质粒转染组、单独DDP化疗组、单独TRAIL转染组、TRAIL联合DDP化疗组,1.空白对照组,2.空质粒转染组,3.单独DDP化疗组,4.pCMVTRAIL重组质粒转染组,5.联合用药组 ...
2021/8/10 6:55:47
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以往的基因功能研究局限于与已知功能基因的比较和间接地推测,近年来发展的疟原虫基因转染技术[5]可通过改变基因后观察表型变化在活体研究基因的功能,使疟原虫基因的研究现状大为改观,在四种感染人的疟原虫中,P.f的致病性最为严重,其研究历来倍受重视,本文就疟原虫(主要是P.f)基因转染方面的研究作一综述,疟原虫转染时外源基因必须依次通过宿主红细胞膜、含虫空泡膜、疟原虫自己的细胞膜和虫体细胞核膜,因此,与其他真核细胞的基因转染相比,疟原虫的基因转染效率必然要低得多 ...
2021/8/11 9:35:06
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以往的基因功能研究局限于与已知功能基因的比较和间接地推测,近年来发展的疟原虫基因转染技术[5]可通过改变基因后观察表型变化在活体研究基因的功能,使疟原虫基因的研究现状大为改观,在四种感染人的疟原虫中,P.f的致病性最为严重,其研究历来倍受重视,本文就疟原虫(主要是P.f)基因转染方面的研究作一综述,疟原虫转染时外源基因必须依次通过宿主红细胞膜、含虫空泡膜、疟原虫自己的细胞膜和虫体细胞核膜,因此,与其他真核细胞的基因转染相比,疟原虫的基因转染效率必然要低得多 ...
2021/8/11 9:35:06
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食管癌细胞NGAL基因5′侧翼416~+84区段存在着TPA反应元件,TPA反应元件,应用转录因子数据库(中的软件AliBaba2.1,对NGAL基因5′侧翼416~+84区段潜在的TPA反应元件序列及其位点的分析预测结果见图3 ...
2021/8/19 5:59:54
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食管癌细胞NGAL基因5′侧翼416~+84区段存在着TPA反应元件,TPA反应元件代写论文,应用转录因子数据库(中的软件AliBaba2.1,对NGAL基因5′侧翼416~+84区段潜在的TPA反应元件序列及其位点的分析预测结果见图3 ...
2021/7/3 1:36:08
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wildtypeandmutantDNApolymeraseβexpressiononCHOcellsgrowth,bp缺失)DNA聚合酶β(polβ)基因对真核细胞生长特性的影响.方法:将表达人野生型和缺失型DNApolβ的中国仓鼠卵巢细胞株(CHO),用RTPCR方法鉴定野生型和缺失型DNApolβmRNA水平的表达,MTT法测生长曲线、流式细胞术测细胞周期.结果:转染野生型和突变型DNApolβ的CHO细胞株中,都有外源基因mRNA水平的表达;转染突变型(58bp缺失)polβ基因的细胞增殖速度和S期比例增高均高于未转染组细胞,差异有统计学意义(P0.05).而转染野生型polβ基因对细胞增殖速度和细胞周期无明显影响(P0.05).结论:高表达外源性野生型和突变型DNApolβ,对CHO细胞生长具有不同的影响.
,excisionrepaire,BER)是清除细胞内DNA损伤的主要途径,DNA聚合酶β(DNApolymeraseβ,DNApolβ)是BER过程中的关键酶.研究polβ基因的突变及功能异常在肿瘤发生发展中的作用,对进一步阐明肿瘤的分子发病机制,对肿瘤的基因治疗有重要意义.我们将不同类型的polβ的真核表达载体转染哺乳动物细胞,观察野生型和突变型polβ基因的表达对细胞生物学特性的影响如下. ...
2021/8/16 8:38:15
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杨明理王liming刘全胜,兔骨髓间充质干细胞能够在体外适宜的条件下进行长期培养;骨髓间充质干细胞可直接作为基因靶细胞,建立稳定表达EGFP的骨髓间充质干细胞系具有可行性,为进一步做标记的MSCs细胞的移植研究奠定基础,按脂质体转染试剂盒说明书进行操作,实验中设未转染的细胞作为对照 ...
2021/8/15 19:57:05
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wildtypeandmutantDNApolymeraseβexpressiononCHOcellsgrowth,bp缺失)DNA聚合酶β(polβ)基因对真核细胞生长特性的影响.方法:将表达人野生型和缺失型DNApolβ的中国仓鼠卵巢细胞株(CHO),用RTPCR方法鉴定野生型和缺失型DNApolβmRNA水平的表达,MTT法测生长曲线、流式细胞术测细胞周期.结果:转染野生型和突变型DNApolβ的CHO细胞株中,都有外源基因mRNA水平的表达;转染突变型(58bp缺失)polβ基因的细胞增殖速度和S期比例增高均高于未转染组细胞,差异有统计学意义(P0.05).而转染野生型polβ基因对细胞增殖速度和细胞周期无明显影响(P0.05).结论:高表达外源性野生型和突变型DNApolβ,对CHO细胞生长具有不同的影响.
,excisionrepaire,BER)是清除细胞内DNA损伤的主要途径,DNA聚合酶β(DNApolymeraseβ,DNApolβ)是BER过程中的关键酶.研究polβ基因的突变及功能异常在肿瘤发生发展中的作用,对进一步阐明肿瘤的分子发病机制,对肿瘤的基因治疗有重要意义.我们将不同类型的polβ的真核表达载体转染哺乳动物细胞,观察野生型和突变型polβ基因的表达对细胞生物学特性的影响如下. ...
2021/8/16 8:38:15
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杨明理王liming刘全胜,兔骨髓间充质干细胞能够在体外适宜的条件下进行长期培养;骨髓间充质干细胞可直接作为基因靶细胞,建立稳定表达EGFP的骨髓间充质干细胞系具有可行性,为进一步做标记的MSCs细胞的移植研究奠定基础,按脂质体转染试剂盒说明书进行操作,实验中设未转染的细胞作为对照 ...
2021/8/15 19:57:05
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人物介绍:
,赵芷婧:安沐樱的跟班,坏,杨校长:和蔼的老奶奶,对全校的每一个同学都很和善 ...
2022/9/16 15:00:03
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目的体外研究Oligofectamine介导的VEGF反义寡核苷酸转染对胆囊癌GBCSD细胞生长、增殖和凋亡的影响,OligofectamineMediatedVEGFASODNTransfectiononGBCSDCellGrowth,ProliferationandApoptosisinVitro,1.2.2寡核苷酸合成VEGF反义寡核苷酸及错义寡核苷酸序列参照文献[2],VEGF反义寡核苷酸(ASODN)序列为:5′TGGCTTGAAGATGTACTCGAT3′,VEGF错义寡核苷酸(SODN)序列为:5′TACGTAGTATGGTGTACGATC3′,全硫代修饰,保存于—70℃待用 ...
2021/8/14 9:44:35
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目的体外研究Oligofectamine介导的VEGF反义寡核苷酸转染对胆囊癌GBCSD细胞生长、增殖和凋亡的影响,OligofectamineMediatedVEGFASODNTransfectiononGBCSDCellGrowth,ProliferationandApoptosisinVitro,1.2.2寡核苷酸合成VEGF反义寡核苷酸及错义寡核苷酸序列参照文献[2],VEGF反义寡核苷酸(ASODN)序列为:5′TGGCTTGAAGATGTACTCGAT3′,VEGF错义寡核苷酸(SODN)序列为:5′TACGTAGTATGGTGTACGATC3′,全硫代修饰,保存于—70℃待用 ...
2021/8/14 9:44:35
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2型糖尿病的发病机制主要与胰岛素抵抗有关,抵抗素在啮齿类由脂肪细胞产生并可诱导其产生胰岛素抵抗,而人体内抵抗素主要由单核细胞产生,其诱导人胰岛素抵抗的作用尚无定论,min,94℃,2min;94℃,30s,55℃,45s,72℃,30s,30个循环,72℃,5min,抵抗素基因转染对HepG2细胞生长增殖作用的影响(MTT实验)分三大组:HepG2细胞组,空质粒组和抵抗素基因转染组,每组又分为:对照组,胰岛素组,每组8个样本 ...
2021/8/11 23:37:26
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2型糖尿病的发病机制主要与胰岛素抵抗有关,抵抗素在啮齿类由脂肪细胞产生并可诱导其产生胰岛素抵抗,而人体内抵抗素主要由单核细胞产生,其诱导人胰岛素抵抗的作用尚无定论,min,94℃,2min;94℃,30s,55℃,45s,72℃,30s,30个循环,72℃,5min,抵抗素基因转染对HepG2细胞生长增殖作用的影响(MTT实验)分三大组:HepG2细胞组,空质粒组和抵抗素基因转染组,每组又分为:对照组,胰岛素组,每组8个样本 ...
2021/8/11 23:37:26
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近年来文献报道肿瘤细胞RNA转染树突状细胞(DendriticCell,DC)可以诱导强烈的抗肿瘤免疫,但在用RNA电转染DC的方法尚无报道,我们研究了肝癌细胞株Bel7402总RNA电转染的DC对T细胞的体外激活效应,以探索其治疗肝癌的可行性,2008年10月单铁英等:人肝癌细胞总RNA电转染树突状细胞对T细胞的激活效应第5期2008年10月河北北方学院学报(医学版)第5期1.2.3肝癌细胞总RNA电转染imDC并培养为成熟树突状细胞(MatureDendriticCell,mDC)收集诱导7d的imDC,调整细胞浓度为1×107/mL,本试验中经Trizol提取的肝癌细胞总RNA,107个细胞可得到4~8μgRNA,经RNA电泳,可见到完整的18S和28S条带,分光光度计检测OD260/OD280=1.82>1.8 ...
2021/8/10 1:45:26
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近年来文献报道肿瘤细胞RNA转染树突状细胞(DendriticCell,DC)可以诱导强烈的抗肿瘤免疫,但在用RNA电转染DC的方法尚无报道,我们研究了肝癌细胞株Bel7402总RNA电转染的DC对T细胞的体外激活效应,以探索其治疗肝癌的可行性,2008年10月单铁英等:人肝癌细胞总RNA电转染树突状细胞对T细胞的激活效应第5期2008年10月河北北方学院学报(医学版)第5期1.2.3肝癌细胞总RNA电转染imDC并培养为成熟树突状细胞(MatureDendriticCell,mDC)收集诱导7d的imDC,调整细胞浓度为1×107/mL,本试验中经Trizol提取的肝癌细胞总RNA,107个细胞可得到4~8μgRNA,经RNA电泳,可见到完整的18S和28S条带,分光光度计检测OD260/OD280=1.82>1.8 ...
2021/8/10 1:45:26
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合成特异性干扰Survivin的小发卡RNA(shRNA)片段,并与pGenesil2载体连接,构建Survivin干扰载体(pGenesil2SurvivinshRNA),pGenesilSurvivinshRNA质粒转染人结肠癌Lovo细胞转染效率的测定将Lovo细胞铺于覆有盖玻片的6孔板内,接种密度约为5×105个/孔,SurvivinshRNA质粒后 ...
2021/8/17 16:05:53
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王莉,卫红飞,万敏,王丽颖,于永利,转染pcDNA3GFPHER2的B16细胞鉴定阳离子脂质体转染法将pcDNA3GFPHER2重组质粒转染B16细胞,通过G418压力筛选及有限稀释法进行筛选和克隆化,得到1株转染pcDNA3GFPHER2的B16细胞,命名为B16/HER21,IdentificationofB16cellstransfectedwithpcDNA3GFPHER2(B16/HER21) ...
2021/8/8 10:47:26
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合成特异性干扰Survivin的小发卡RNA(shRNA)片段,并与pGenesil2载体连接,构建Survivin干扰载体(pGenesil2SurvivinshRNA),pGenesilSurvivinshRNA质粒转染人结肠癌Lovo细胞转染效率的测定将Lovo细胞铺于覆有盖玻片的6孔板内,接种密度约为5×105个/孔,SurvivinshRNA质粒后 ...
2021/8/17 16:05:53
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王莉,卫红飞,万敏,王丽颖,于永利,转染pcDNA3GFPHER2的B16细胞鉴定阳离子脂质体转染法将pcDNA3GFPHER2重组质粒转染B16细胞,通过G418压力筛选及有限稀释法进行筛选和克隆化,得到1株转染pcDNA3GFPHER2的B16细胞,命名为B16/HER21,IdentificationofB16cellstransfectedwithpcDNA3GFPHER2(B16/HER21) ...
2021/8/8 10:47:26
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HER2ExpressionbysiRNA,将合成的5条siRNA转录模板序列退火后,连入线性化载体pSilencerTM2.1U6hygro上,先经筛选、酶切鉴定后,再进行测序确定,构建的质粒分别命名为pSilencer1PHER2,pSilencer2PHER2,pSilencer3PHER2,pSilencer5PHER2,pSilencer6PHER2,简称p1P,p2P,p3P,p5P,p6P,转染pN的MCF7细胞;3:转染p1P的MCF7细胞;4:转染p2P的MCF7细胞;5:转染p3P的MCF7细胞;6:转染p5P的MCF7细胞;7:转染p6P的MCF7细胞;M:DNAmarkers采用间接免疫荧光法检测稳定转染的MCF7细胞中HER2蛋白的表达 ...
2021/8/23 0:16:46
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ofHER2ExpressionbysiRNA代写论文,将合成的5条siRNA转录模板序列退火后,连入线性化载体pSilencerTM2.1U6hygro上,先经筛选、酶切鉴定后,再进行测序确定,构建的质粒分别命名为pSilencer1PHER2,pSilencer2PHER2,pSilencer3PHER2,pSilencer5PHER2,pSilencer6PHER2,简称p1P,p2P,p3P,p5P,p6P,转染pN的MCF7细胞;3:转染p1P的MCF7细胞;4:转染p2P的MCF7细胞;5:转染p3P的MCF7细胞;6:转染p5P的MCF7细胞;7:转染p6P的MCF7细胞;M:DNAmarkers采用间接免疫荧光法检测稳定转染的MCF7细胞中HER2蛋白的表达 ...
2021/8/14 14:43:36
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HER2ExpressionbysiRNA,将合成的5条siRNA转录模板序列退火后,连入线性化载体pSilencerTM2.1U6hygro上,先经筛选、酶切鉴定后,再进行测序确定,构建的质粒分别命名为pSilencer1PHER2,pSilencer2PHER2,pSilencer3PHER2,pSilencer5PHER2,pSilencer6PHER2,简称p1P,p2P,p3P,p5P,p6P,转染pN的MCF7细胞;3:转染p1P的MCF7细胞;4:转染p2P的MCF7细胞;5:转染p3P的MCF7细胞;6:转染p5P的MCF7细胞;7:转染p6P的MCF7细胞;M:DNAmarkers采用间接免疫荧光法检测稳定转染的MCF7细胞中HER2蛋白的表达 ...
2021/8/23 0:16:46
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ofHER2ExpressionbysiRNA代写论文,将合成的5条siRNA转录模板序列退火后,连入线性化载体pSilencerTM2.1U6hygro上,先经筛选、酶切鉴定后,再进行测序确定,构建的质粒分别命名为pSilencer1PHER2,pSilencer2PHER2,pSilencer3PHER2,pSilencer5PHER2,pSilencer6PHER2,简称p1P,p2P,p3P,p5P,p6P,转染pN的MCF7细胞;3:转染p1P的MCF7细胞;4:转染p2P的MCF7细胞;5:转染p3P的MCF7细胞;6:转染p5P的MCF7细胞;7:转染p6P的MCF7细胞;M:DNAmarkers采用间接免疫荧光法检测稳定转染的MCF7细胞中HER2蛋白的表达 ...
2021/8/14 14:43:36
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TC3细胞中胰岛素受体基因的表达.方法:化学合成胰岛素受体(IR)基因的4对特异siRNAs(实验组:siRNA1组,siRNA2组,siRNA3组,siRNA4组)和1对非特异siRNA(NC组).通过阳离子脂质体将siRNAs分别转染βTC3细胞,24h后荧光显微镜下观察不同浓度siRNA转染细胞的效率,TCTCTGGACAG3′,扩增产物为737bp.GAPDH引物:上游引物,5′AATTCAACGGCACAGTCAAGGC3′,CCAUGCCUGAAGCUAAdTdT3′,反义链:5′UUAGCUUCAGGCAUGGUCCdGdG3′ ...
2021/8/22 13:51:46
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TC3细胞中胰岛素受体基因的表达.方法:化学合成胰岛素受体(IR)基因的4对特异siRNAs(实验组:siRNA1组,siRNA2组,siRNA3组,siRNA4组)和1对非特异siRNA(NC组).通过阳离子脂质体将siRNAs分别转染βTC3细胞,24h后荧光显微镜下观察不同浓度siRNA转染细胞的效率,TCTCTGGACAG3′,扩增产物为737bp.GAPDH引物:上游引物,5′AATTCAACGGCACAGTCAAGGC3′,CCAUGCCUGAAGCUAAdTdT3′,反义链:5′UUAGCUUCAGGCAUGGUCCdGdG3′ ...
2021/8/22 13:51:46
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本研究将针对两条靶序列AFP1和AFP2的shRNA的DNA模板双链,连接于质粒表达载体,构建质粒载体pGenesil—1—AFP1(含绿色荧光蛋白编码序列)及pGenesil—2—AFP2,用阳离子脂质体META/质粒载体pGenesil—1—AFP1对HepG2细胞进行了转染实验研究,拟筛选较理想的阳离子脂质体META/pGenesil—1—AFP质粒转染HepG2的方法,转染试剂META/质粒载体混合液配制及转染:剂量配比在其建议范围(2∶1~7∶1)内选择设计,按META/pGenesil配比分六组,分别为空白对照组,3μL∶1μg组,6μL∶1μg组,8μL∶2.5μg组,12μL∶2.5μg组,15μL∶5μg组,每组设三个复孔,EP管,作好标记:取9μL,18μL,24μL,36μL,45μL脂质体分别加入A1,A2,B1,B2,C1管中;迅速加入无抗生素无血清的DMEM培养基,使得各管中总体积为300μL,轻轻混匀 ...
2021/8/14 13:08:46
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本研究将针对两条靶序列AFP1和AFP2的shRNA的DNA模板双链,连接于质粒表达载体,构建质粒载体pGenesil—1—AFP1(含绿色荧光蛋白编码序列)及pGenesil—2—AFP2,用阳离子脂质体META/质粒载体pGenesil—1—AFP1对HepG2细胞进行了转染实验研究,拟筛选较理想的阳离子脂质体META/pGenesil—1—AFP质粒转染HepG2的方法,转染试剂META/质粒载体混合液配制及转染:剂量配比在其建议范围(2∶1~7∶1)内选择设计,按META/pGenesil配比分六组,分别为空白对照组,3μL∶1μg组,6μL∶1μg组,8μL∶2.5μg组,12μL∶2.5μg组,15μL∶5μg组,每组设三个复孔,EP管,作好标记:取9μL,18μL,24μL,36μL,45μL脂质体分别加入A1,A2,B1,B2,C1管中;迅速加入无抗生素无血清的DMEM培养基,使得各管中总体积为300μL,轻轻混匀 ...
2021/8/14 13:08:46
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作者:孙海丰,刘东方,刘永彪,以自行合成的聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)纳米凝胶为载体转染E1A基因,并观察E1A基因对肝癌细胞体外生长的抑制作用及其对化疗药物的增敏效应,初步探讨其作用机制,经PEI介导,将真核细胞高效表达E1A基因的重组质粒psv—E1A导入人肝癌H22细胞,RT—PCR证实其转染,G418筛选出阳性克隆细胞,观察EIA基因对该细胞系生长的抑制作用 ...
2021/8/9 0:17:35
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作者:孙海丰,刘东方,刘永彪,以自行合成的聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)纳米凝胶为载体转染E1A基因,并观察E1A基因对肝癌细胞体外生长的抑制作用及其对化疗药物的增敏效应,初步探讨其作用机制,经PEI介导,将真核细胞高效表达E1A基因的重组质粒psv—E1A导入人肝癌H22细胞,RT—PCR证实其转染,G418筛选出阳性克隆细胞,观察EIA基因对该细胞系生长的抑制作用 ...
2021/8/9 0:17:35
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作者:刘辉,姚咏明,丁丽华,王晓辉,袁斌,宋青,叶棋浓,黄翠芬,盛志勇,mobilitygroupbox1;nuclearfactorofactivatedTcell;interleukin2;immunity,mobilitygroupbox1protein,HMGB1)是一大类高度保守的非组蛋白DNA结合蛋白,不仅广泛存在于真核细胞的细胞核内,对DNA复制、转录、重组和修复具有重要作用,而且可作为一种新的“晚期”炎症递质由单核/巨噬细胞分泌到细胞外参与炎症反应[1,2] ...
2021/8/15 22:13:56
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作者:刘辉,姚咏明,丁丽华,王晓辉,袁斌,宋青,叶棋浓,黄翠芬,盛志勇,mobilitygroupbox1;nuclearfactorofactivatedTcell;interleukin2;immunity,mobilitygroupbox1protein,HMGB1)是一大类高度保守的非组蛋白DNA结合蛋白,不仅广泛存在于真核细胞的细胞核内,对DNA复制、转录、重组和修复具有重要作用,而且可作为一种新的“晚期”炎症递质由单核/巨噬细胞分泌到细胞外参与炎症反应[1,2] ...
2021/8/15 22:13:56
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构建血管生成抑制因子arresten的真核表达细胞克隆体系,arresten是Colorado等[1]发现的一种强效的血管生成抑制因子,它属于Ⅳ型胶原α1链的羧基末端NC1结构域多肽片段,其分子量为26ku,它能够通过抑制血管生成进而抑制裸鼠移植瘤的生长,真核表达质粒pSecTag2arresten转染CHO细胞用阳离子脂质体Lipofectamine2000介导转染CHO细胞 ...
2021/8/18 17:13:26
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构建血管生成抑制因子arresten的真核表达细胞克隆体系,arresten是Colorado等[1]发现的一种强效的血管生成抑制因子,它属于Ⅳ型胶原α1链的羧基末端NC1结构域多肽片段,其分子量为26ku,它能够通过抑制血管生成进而抑制裸鼠移植瘤的生长,真核表达质粒pSecTag2arresten转染CHO细胞用阳离子脂质体Lipofectamine2000介导转染CHO细胞 ...
2021/8/18 17:13:26
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缺血再灌注损伤引起的急性肾衰与移植肾的慢性进行性损伤及远期移植肾失功有着密切的关系[1].HGF是一种多肽的细胞因子,是肾脏的调理素,可促进组织重建,减轻组织纤维化和功能障碍[2].但该细胞因子注入体内后其活性极不稳定,不能发挥其器官保护功能,因此我们将通过肾脏直接电转染hHGF基因的方式,观察该基因对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用,从而为移植肾的缺血再灌注损伤寻找一种体外器官治疗的方法.
,1.2.5巨噬细胞及淋巴细胞的免疫组化1抗使用1∶100稀释的鼠抗鼠mAb,作用于巨噬细胞的ED1,1∶200稀释的鼠抗鼠mAb及1∶25稀释的羊抗人多克隆HGF抗体作用于T和B淋巴细胞蛋白CD45RC.使用1∶200稀释的马抗鼠IgG作为二抗和1∶200稀释的马抗羊IgG,显色剂使用DAB显色[4].
,1.2.6组织过氧化物氧化评价大鼠肾组织中性粒细胞浸润通过白细胞MPO方法进行评估.将组织中加入pH6.050mol/L的kd缓冲液中(含5g/L的溴化十六碳烷基三胺)快速液氮冷冻,然后30s解冻,重复3次,60℃孵育2h,离心后取上清检测MPO,MPO用偶氮蓝和5mg/L的氢氧化物显色,用460nm的分光光度计检测MPO浓度.采用PARP凋亡过氧化酶试剂盒进行检测.肾脏内ED1,CD4SRC及凋亡细胞的阳性染色细胞在40倍显微镜下计数20个视野计算均数. ...
2021/8/19 2:03:05
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openangleglaucoma,POAG)是主要致盲眼病之一,有研究发现POAG发病具有明显的遗传性.1997年Stone等首次克隆了POAG的致病基因:Myocilin(MYOC)基因,该基因是迄今研究最多的与POAG相关基因,已经发现有几十种突变型与POAG致病相关,如我国发现的Pro370Leu,T455KmMYOC基因等,并对其进行了初步研究[1—2].本研究选择Pro370LeumMYOC基因,构建其真核表达质粒,转染COS7细胞,研究其是否有促进细胞凋亡的作用,以阐明MYOC基因突变所致的POAG发病机制.
,1.2.3pDsRed2N1mMYOC质粒转染COS7细胞常规培养传代,在6孔板内接种COS7细胞株,每孔约(1.5~2.5)×105个细胞,37℃,50mL/LCO2培养过夜,至细胞60%~70%融合,采用脂质体转染法,分别采用pDsRed2N1mMYOC质粒和pDsRed2N1空质粒转染COS7细胞,每种质粒转染两个孔,以未转染的细胞为筛选对照,转染后5h换液,在含100mL/L小牛血清的DMEM培养基中培养,并于转染48h后用荧光显微镜观察.
,h,将pDsRed2N1mMYOC转染组,pDsRed2N1空载体转染组及空转染组COS7细胞消化成单细胞悬液,400目滤网过滤,离心,无水乙醇固定,加入1g/L核糖核酸酶I200μL,37℃孵育30min,加800μL荧光燃料染色液混匀后4℃避光染色30min ...
2021/8/15 9:19:56
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称取2.5g壳聚糖,慢慢加入到250ml0.5%乙酸溶液中,保持室温搅拌,壳聚糖被浸润成棉絮状,使用壳聚糖,对细胞汇合度约70%的3T3细胞进行转染实验,同时制备脂质体/DNA复合物作为阳性对照,裸质粒DNA作为阴性对照,共同培养36h,通过流式细胞仪检测绿色荧光蛋白的表达,定量检测转染效率,4种壳聚糖物理特征由表1可知,A壳聚糖平均粒径较小,通过细胞膜的通透性较好,分布比较集中,zeta电位也为正值,有利于与带负电荷的质粒结合,B、C壳聚糖粒径较大,且zeta电位为负,D壳聚糖虽然粒径小于A,但是多分散度差,即其中包含的有效小粒径比较少,因此,也不利于对于细胞的转染 ...
2021/8/15 16:40:05
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shRNA转染24h和48h后,RT—PCR结果显示,C—met的mRNA抑制率分别为56%和88%,原癌基因ki.11—5547/r.2016.05.015Inhibitingeffectbyvector—mediatedshRNAonC—metinstomachcancercellstrainMKN45HUANGZhi—sheng,HEHai—ping,LIANGRui—bin.DepartmentofGastroenterology,GuangzhouCityPanyuDistrictShawanPeople’sHosptal,Guangzhou511400,China【Abstract,shRNA,简单、易操作,而且该C—metshRNA转染高,其设计的沉默序列可保证有效、有针对性地沉默肿瘤细胞中的C—met的表达 ...
2021/8/7 22:26:57
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openangleglaucoma,POAG)是主要致盲眼病之一,有研究发现POAG发病具有明显的遗传性.1997年Stone等首次克隆了POAG的致病基因:Myocilin(MYOC)基因,该基因是迄今研究最多的与POAG相关基因,已经发现有几十种突变型与POAG致病相关,如我国发现的Pro370Leu,T455KmMYOC基因等,并对其进行了初步研究[1—2].本研究选择Pro370LeumMYOC基因,构建其真核表达质粒,转染COS7细胞,研究其是否有促进细胞凋亡的作用,以阐明MYOC基因突变所致的POAG发病机制.
,1.2.3pDsRed2N1mMYOC质粒转染COS7细胞常规培养传代,在6孔板内接种COS7细胞株,每孔约(1.5~2.5)×105个细胞,37℃,50mL/LCO2培养过夜,至细胞60%~70%融合,采用脂质体转染法,分别采用pDsRed2N1mMYOC质粒和pDsRed2N1空质粒转染COS7细胞,每种质粒转染两个孔,以未转染的细胞为筛选对照,转染后5h换液,在含100mL/L小牛血清的DMEM培养基中培养,并于转染48h后用荧光显微镜观察.论文代写,h,将pDsRed2N1mMYOC转染组,pDsRed2N1空载体转染组及空转染组COS7细胞消化成单细胞悬液,400目滤网过滤,离心,无水乙醇固定,加入1g/L核糖核酸酶I200μL,37℃孵育30min,加800μL荧光燃料染色液混匀后4℃避光染色30min ...
2021/8/20 22:46:56
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shRNA转染24h和48h后,RT—PCR结果显示,C—met的mRNA抑制率分别为56%和88%,原癌基因ki.11—5547/r.2016.05.015Inhibitingeffectbyvector—mediatedshRNAonC—metinstomachcancercellstrainMKN45HUANGZhi—sheng,HEHai—ping,LIANGRui—bin.DepartmentofGastroenterology,GuangzhouCityPanyuDistrictShawanPeople’sHosptal,Guangzhou511400,China【Abstract,shRNA,简单、易操作,而且该C—metshRNA转染高,其设计的沉默序列可保证有效、有针对性地沉默肿瘤细胞中的C—met的表达 ...
2021/8/7 22:26:57
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openangleglaucoma,POAG)是主要致盲眼病之一,有研究发现POAG发病具有明显的遗传性.1997年Stone等首次克隆了POAG的致病基因:Myocilin(MYOC)基因,该基因是迄今研究最多的与POAG相关基因,已经发现有几十种突变型与POAG致病相关,如我国发现的Pro370Leu,T455KmMYOC基因等,并对其进行了初步研究[1—2].本研究选择Pro370LeumMYOC基因,构建其真核表达质粒,转染COS7细胞,研究其是否有促进细胞凋亡的作用,以阐明MYOC基因突变所致的POAG发病机制.
,1.2.3pDsRed2N1mMYOC质粒转染COS7细胞常规培养传代,在6孔板内接种COS7细胞株,每孔约(1.5~2.5)×105个细胞,37℃,50mL/LCO2培养过夜,至细胞60%~70%融合,采用脂质体转染法,分别采用pDsRed2N1mMYOC质粒和pDsRed2N1空质粒转染COS7细胞,每种质粒转染两个孔,以未转染的细胞为筛选对照,转染后5h换液,在含100mL/L小牛血清的DMEM培养基中培养,并于转染48h后用荧光显微镜观察.
,h,将pDsRed2N1mMYOC转染组,pDsRed2N1空载体转染组及空转染组COS7细胞消化成单细胞悬液,400目滤网过滤,离心,无水乙醇固定,加入1g/L核糖核酸酶I200μL,37℃孵育30min,加800μL荧光燃料染色液混匀后4℃避光染色30min ...
2021/8/15 9:19:56
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称取2.5g壳聚糖,慢慢加入到250ml0.5%乙酸溶液中,保持室温搅拌,壳聚糖被浸润成棉絮状,使用壳聚糖,对细胞汇合度约70%的3T3细胞进行转染实验,同时制备脂质体/DNA复合物作为阳性对照,裸质粒DNA作为阴性对照,共同培养36h,通过流式细胞仪检测绿色荧光蛋白的表达,定量检测转染效率,4种壳聚糖物理特征由表1可知,A壳聚糖平均粒径较小,通过细胞膜的通透性较好,分布比较集中,zeta电位也为正值,有利于与带负电荷的质粒结合,B、C壳聚糖粒径较大,且zeta电位为负,D壳聚糖虽然粒径小于A,但是多分散度差,即其中包含的有效小粒径比较少,因此,也不利于对于细胞的转染 ...
2021/8/15 16:40:05
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缺血再灌注损伤引起的急性肾衰与移植肾的慢性进行性损伤及远期移植肾失功有着密切的关系[1].HGF是一种多肽的细胞因子,是肾脏的调理素,可促进组织重建,减轻组织纤维化和功能障碍[2].但该细胞因子注入体内后其活性极不稳定,不能发挥其器官保护功能,因此我们将通过肾脏直接电转染hHGF基因的方式,观察该基因对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用,从而为移植肾的缺血再灌注损伤寻找一种体外器官治疗的方法.
,1.2.5巨噬细胞及淋巴细胞的免疫组化1抗使用1∶100稀释的鼠抗鼠mAb,作用于巨噬细胞的ED1,1∶200稀释的鼠抗鼠mAb及1∶25稀释的羊抗人多克隆HGF抗体作用于T和B淋巴细胞蛋白CD45RC.使用1∶200稀释的马抗鼠IgG作为二抗和1∶200稀释的马抗羊IgG,显色剂使用DAB显色[4].
,1.2.6组织过氧化物氧化评价大鼠肾组织中性粒细胞浸润通过白细胞MPO方法进行评估.将组织中加入pH6.050mol/L的kd缓冲液中(含5g/L的溴化十六碳烷基三胺)快速液氮冷冻,然后30s解冻,重复3次,60℃孵育2h,离心后取上清检测MPO,MPO用偶氮蓝和5mg/L的氢氧化物显色,用460nm的分光光度计检测MPO浓度.采用PARP凋亡过氧化酶试剂盒进行检测.肾脏内ED1,CD4SRC及凋亡细胞的阳性染色细胞在40倍显微镜下计数20个视野计算均数. ...
2021/8/19 2:03:05
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openangleglaucoma,POAG)是主要致盲眼病之一,有研究发现POAG发病具有明显的遗传性.1997年Stone等首次克隆了POAG的致病基因:Myocilin(MYOC)基因,该基因是迄今研究最多的与POAG相关基因,已经发现有几十种突变型与POAG致病相关,如我国发现的Pro370Leu,T455KmMYOC基因等,并对其进行了初步研究[1—2].本研究选择Pro370LeumMYOC基因,构建其真核表达质粒,转染COS7细胞,研究其是否有促进细胞凋亡的作用,以阐明MYOC基因突变所致的POAG发病机制.
,1.2.3pDsRed2N1mMYOC质粒转染COS7细胞常规培养传代,在6孔板内接种COS7细胞株,每孔约(1.5~2.5)×105个细胞,37℃,50mL/LCO2培养过夜,至细胞60%~70%融合,采用脂质体转染法,分别采用pDsRed2N1mMYOC质粒和pDsRed2N1空质粒转染COS7细胞,每种质粒转染两个孔,以未转染的细胞为筛选对照,转染后5h换液,在含100mL/L小牛血清的DMEM培养基中培养,并于转染48h后用荧光显微镜观察.论文代写,h,将pDsRed2N1mMYOC转染组,pDsRed2N1空载体转染组及空转染组COS7细胞消化成单细胞悬液,400目滤网过滤,离心,无水乙醇固定,加入1g/L核糖核酸酶I200μL,37℃孵育30min,加800μL荧光燃料染色液混匀后4℃避光染色30min ...
2021/8/20 22:46:56
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杨淞然,杨艳旗,熊利华,张华,expressionofadenovirustransfectedvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)inratmesenchymalstemcellsinvitroandtheeffectoftransfectiononMSCsproliferation.【Methods,technologymediatedbyadenoviralvectorcantransfectVEGFgeneintoMSCswithhighefficiency.MSCstransfectedbyVEGFgenecouldexpressVEGF. ...
2021/8/10 1:12:06
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杨淞然,杨艳旗,熊利华,张华,expressionofadenovirustransfectedvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)inratmesenchymalstemcellsinvitroandtheeffectoftransfectiononMSCsproliferation.【Methods,technologymediatedbyadenoviralvectorcantransfectVEGFgeneintoMSCswithhighefficiency.MSCstransfectedbyVEGFgenecouldexpressVEGF. ...
2021/8/10 1:12:06
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细胞计数法绘制细胞生长曲线结果显示bcl2基因转染6d后细胞生长速度明显超过对照组,MTT法结果显示bcl2基因转染第24,48,72h,A490nm值分别为4.15±0.31,5.98±0.56,8.94±0.79,对照组分别为3.01±0.20,4.76±0.52,7.69±0.84,两组相比较具有显著性差异(P0.05).结论:bcl2基因转染使GES1细胞稳定且高表达Bcl2蛋白,并促进了细胞增殖.
,1.2方法细胞稳定转染参照Lipofectamine[4]转染说明书进行,基因转染48h后,换用含300mg/LG418的完全培养基筛选.取待染细胞爬片,固定,滴加30mL/LH2O2,室温孵育15min,滴加1∶100稀释的小鼠抗Bcl2mAb,4℃湿盒中过夜,PBS洗,滴加山羊抗小鼠IgGHRP结合物,37℃,孵育30min,PBS洗涤,DAB溶液显色5min,PBS终止反应,自来水充分冲洗,系列乙醇脱水,二甲苯使其透明,中性树胶封片,检测转染细胞中Bcl2蛋白的表达.转染bcl2的GES1细胞经HE染色进行形态学观察并照相.另接种细胞于24孔培养板中,每孔接种3×106/L.每天取3个孔计数,测出每孔中的细胞总数,求出每组平均值,持续计数10d,绘制生长曲线.细胞接种于96孔培养板中,培养24,48,72h后每孔加入MTT溶液(5g/L)20μL,37℃,继续孵育4h,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液.每孔加入DMSO150μL,振荡10min,使结晶物充分溶解.选择490nm波长,在酶联免疫检测仪上测定各A值,记录结果.空载体质粒pcDNA3转染GES1细胞及正常GES1细胞为对照. ...
2021/8/13 5:04:55
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细胞计数法绘制细胞生长曲线结果显示bcl2基因转染6d后细胞生长速度明显超过对照组,MTT法结果显示bcl2基因转染第24,48,72h,A490nm值分别为4.15±0.31,5.98±0.56,8.94±0.79,对照组分别为3.01±0.20,4.76±0.52,7.69±0.84,两组相比较具有显著性差异(P0.05).结论:bcl2基因转染使GES1细胞稳定且高表达Bcl2蛋白,并促进了细胞增殖.
,1.2方法细胞稳定转染参照Lipofectamine[4]转染说明书进行,基因转染48h后,换用含300mg/LG418的完全培养基筛选.取待染细胞爬片,固定,滴加30mL/LH2O2,室温孵育15min,滴加1∶100稀释的小鼠抗Bcl2mAb,4℃湿盒中过夜,PBS洗,滴加山羊抗小鼠IgGHRP结合物,37℃,孵育30min,PBS洗涤,DAB溶液显色5min,PBS终止反应,自来水充分冲洗,系列乙醇脱水,二甲苯使其透明,中性树胶封片,检测转染细胞中Bcl2蛋白的表达.转染bcl2的GES1细胞经HE染色进行形态学观察并照相.另接种细胞于24孔培养板中,每孔接种3×106/L.每天取3个孔计数,测出每孔中的细胞总数,求出每组平均值,持续计数10d,绘制生长曲线.细胞接种于96孔培养板中,培养24,48,72h后每孔加入MTT溶液(5g/L)20μL,37℃,继续孵育4h,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液.每孔加入DMSO150μL,振荡10min,使结晶物充分溶解.选择490nm波长,在酶联免疫检测仪上测定各A值,记录结果.空载体质粒pcDNA3转染GES1细胞及正常GES1细胞为对照. ...
2021/8/13 5:04:55
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Livin基因是凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisprotein,IAP)家族的新成员,它在肿瘤组织中特异性表达并具有强大的抗凋亡作用,已成为肿瘤基因治疗新的靶点[1].近年的研究[2]认为,凋亡是化疗药物诱导肿瘤细胞死亡的主要模式,IAP家族在调节肿瘤细胞对凋亡敏感性方面起着核心作用.而特异性阻断肿瘤细胞内高表达的Livin基因,可以抑制细胞增殖并增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性[3],但其化疗增敏作用的发生机制尚不明确.我们通过构建靶向Livin的siRNA真核表达载体,转染乳腺癌细胞MDAMB231,观察Livin表达下调对细胞阿霉素化疗敏感性的影响,并探讨其发生的可能机制.
,βactin,上游:5′TCACCCACACTGTGCCCATCTATGA3′,下游:5′GTAGCCACGCTCGGTCAGGATCTTC3′.以Livin基因与βactin相对浓度的比值反映Livin表达量.检测Caspase3时,实验分为未转染组,siHK组和干扰Livin效果最强的siLivin2组.引物Caspase3,上游:5′AGAACTGGACTGTGGCATTGAG3′,下游:5′GCTTGTCGGCATACTGTTTCAG3′.检测方法同前.
,2:siHK;3:siLivin1SalI酶切;4:siLivin1;5:siLivin2SalI酶切;6:siLivin2;7:siLivin3SalI酶切;8:siLivin3;M:marker. ...
2021/8/25 1:17:16
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Livin基因是凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisprotein,IAP)家族的新成员,它在肿瘤组织中特异性表达并具有强大的抗凋亡作用,已成为肿瘤基因治疗新的靶点[1].近年的研究[2]认为,凋亡是化疗药物诱导肿瘤细胞死亡的主要模式,IAP家族在调节肿瘤细胞对凋亡敏感性方面起着核心作用.而特异性阻断肿瘤细胞内高表达的Livin基因,可以抑制细胞增殖并增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性[3],但其化疗增敏作用的发生机制尚不明确.我们通过构建靶向Livin的siRNA真核表达载体,转染乳腺癌细胞MDAMB231,观察Livin表达下调对细胞阿霉素化疗敏感性的影响,并探讨其发生的可能机制.
,βactin,上游:5′TCACCCACACTGTGCCCATCTATGA3′,下游:5′GTAGCCACGCTCGGTCAGGATCTTC3′.以Livin基因与βactin相对浓度的比值反映Livin表达量.检测Caspase3时,实验分为未转染组,siHK组和干扰Livin效果最强的siLivin2组.引物Caspase3,上游:5′AGAACTGGACTGTGGCATTGAG3′,下游:5′GCTTGTCGGCATACTGTTTCAG3′.检测方法同前.
,2:siHK;3:siLivin1SalI酶切;4:siLivin1;5:siLivin2SalI酶切;6:siLivin2;7:siLivin3SalI酶切;8:siLivin3;M:marker. ...
2021/8/25 1:17:16
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肺泡上皮细胞是覆盖于肺泡表面的一层上皮细胞,分为Ⅰ型和Ⅱ型.其中肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolartypeⅡcell,ATⅡ细胞)具有重要的功能,当受到各种刺激时,ATⅡ细胞可增生并修复已损伤的上皮细胞,起着肺泡上皮干细胞的作用[1].肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)是一多功能生长因子,在生理状态下可促进肺上皮细胞的发生、管腔形成及肺支气管上皮细胞的增生,HGF也可促进急性肺损伤的肺上皮组织增生和修复[2].我们在前期构建的携带人HGF基因的重组腺病毒(AdHGF)[3]基础上,观察AdHGF对ATⅡ细胞的转染表达及增殖效应,为AdHGF治疗肺损伤提供依据.
,1.2.4HGF表达产物对ATⅡ细胞的作用采用MTT法测定细胞增殖活性.将原代培养ATⅡ细胞接种于96孔细胞培养板中,每孔细胞数为5×103个.12h后吸弃原培养液,每孔加入100μL无血清DMEM,HGF表达上清所加的量分别占培养总体积的5%(80pg),10%(160pg),15%(240pg),20%(320pg),25%(400pg),40%(640pg)和50%(800pg).72h后每孔加入20μLMTT,37℃孵育4h后,弃上清用DMSO溶解沉淀,测其波长在560nm处A值.
,2.2重组腺病毒可有效转染ATⅡ细胞以不同MOI的AdGFP(50,100,200pfu/细胞)感染ATⅡ细胞,随着病毒剂量的加大,其转染率提高(图2).当MOI为100pfu/细胞时,转染率已近90%,表明ATⅡ细胞对重组腺病毒高度敏感 ...
2021/8/10 2:08:36
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肺泡上皮细胞是覆盖于肺泡表面的一层上皮细胞,分为Ⅰ型和Ⅱ型.其中肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolartypeⅡcell,ATⅡ细胞)具有重要的功能,当受到各种刺激时,ATⅡ细胞可增生并修复已损伤的上皮细胞,起着肺泡上皮干细胞的作用[1].肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)是一多功能生长因子,在生理状态下可促进肺上皮细胞的发生、管腔形成及肺支气管上皮细胞的增生,HGF也可促进急性肺损伤的肺上皮组织增生和修复[2].我们在前期构建的携带人HGF基因的重组腺病毒(AdHGF)[3]基础上,观察AdHGF对ATⅡ细胞的转染表达及增殖效应,为AdHGF治疗肺损伤提供依据.
,1.2.4HGF表达产物对ATⅡ细胞的作用采用MTT法测定细胞增殖活性.将原代培养ATⅡ细胞接种于96孔细胞培养板中,每孔细胞数为5×103个.12h后吸弃原培养液,每孔加入100μL无血清DMEM,HGF表达上清所加的量分别占培养总体积的5%(80pg),10%(160pg),15%(240pg),20%(320pg),25%(400pg),40%(640pg)和50%(800pg).72h后每孔加入20μLMTT,37℃孵育4h后,弃上清用DMSO溶解沉淀,测其波长在560nm处A值.
,2.2重组腺病毒可有效转染ATⅡ细胞以不同MOI的AdGFP(50,100,200pfu/细胞)感染ATⅡ细胞,随着病毒剂量的加大,其转染率提高(图2).当MOI为100pfu/细胞时,转染率已近90%,表明ATⅡ细胞对重组腺病毒高度敏感 ...
2021/8/10 2:08:36
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ofTGF—β1genetransfectionontheproliferationofhumanlensepithelialcell,本研究的目的是通过应用基因转染技术将外源性TGF—β1基因转染至体外培养的人晶状体上皮细胞(humanlensepithelialcell,HLEC),观察TGF—β1基因在人晶状体上皮细胞的表达及其对细胞增殖、凋亡的影响,以期为临床研究白内障的发生机制和防治方法提供实验依据,双酶切pSNAV—TGF—β1,回收插入片断(1.8kb),EcoR和Sal双酶切pEGFP—C2,回收线性载体(4.7kb),连接上述二种回收的DNA,转化,筛选克隆,构建后的质粒命名为pEGFP—TGF—β1 ...
2021/8/16 17:53:14
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利用脂质体介导大鼠HCN4基因pTracer—CMV—GFP穿梭载体,转染HEK293细胞进行扩增,用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)检测HCN4mRNA表达,采用全细胞膜片钳技术记录HEK293细胞上HCN4电流,hyperpolarizationactivatedcyclicnucleotidegatedcationchannel,电流记录的电极外液(mmol/L):MgCl25.0,KCl130,Na2ATP45.0,EGTA11.0,HEPES10.0,Glucose5.6,pH值用KOH调至7.2 ...
2021/8/12 21:36:05
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ofTGF—β1genetransfectionontheproliferationofhumanlensepithelialcell,本研究的目的是通过应用基因转染技术将外源性TGF—β1基因转染至体外培养的人晶状体上皮细胞(humanlensepithelialcell,HLEC),观察TGF—β1基因在人晶状体上皮细胞的表达及其对细胞增殖、凋亡的影响,以期为临床研究白内障的发生机制和防治方法提供实验依据,双酶切pSNAV—TGF—β1,回收插入片断(1.8kb),EcoR和Sal双酶切pEGFP—C2,回收线性载体(4.7kb),连接上述二种回收的DNA,转化,筛选克隆,构建后的质粒命名为pEGFP—TGF—β1 ...
2021/8/16 17:53:14
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利用脂质体介导大鼠HCN4基因pTracer—CMV—GFP穿梭载体,转染HEK293细胞进行扩增,用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)检测HCN4mRNA表达,采用全细胞膜片钳技术记录HEK293细胞上HCN4电流,hyperpolarizationactivatedcyclicnucleotidegatedcationchannel,电流记录的电极外液(mmol/L):MgCl25.0,KCl130,Na2ATP45.0,EGTA11.0,HEPES10.0,Glucose5.6,pH值用KOH调至7.2 ...
2021/8/12 21:36:05
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88888888 ...
2021/5/3 6:12:25
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鉴水稽山尘不染,
,归来贺老身强健 ...
2022/9/16 15:00:03
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一灵真性,又因何、漾入凡胎尘域,
,迤染浮华贪爱恋,展转昏迷真迹 ...
2022/9/16 15:00:03
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御火传香殿,华光及侍臣,
,星流中使马,烛耀九衢人 ...
2022/9/16 15:00:03
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小溪清浅照孤芳,
,蕊珠娘 ...
2022/9/16 15:00:03
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朱帘旦初卷,
,绮机朝未织 ...
2022/9/16 15:00:03
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漠漠飞来双属玉,
,一片秋光,染就潇湘绿 ...
2022/9/16 15:00:03
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作者:刘琰,杨婉华,马湘一,陈睿,汪蕊,卢运萍,马丁,王世宣,研究血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)在人宫颈癌细胞凋亡过程中的作用,VascularEndothelialGrowthFactorReceptor3ontheApoptosisofCervicalCancer ...
2021/8/17 1:13:14
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,孙各琴,周有利,朱名安,邓守明,ASODN具有促进化疗药物诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及增强化疗药物敏感性作用,carcinoma;Antisenseoligodexynucleotide;HIF1α ...
2021/8/12 0:23:26
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作者:刘琰,杨婉华,马湘一,陈睿,汪蕊,卢运萍,马丁,王世宣代写论文,血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)在人宫颈癌细胞凋亡过程中的作用,VascularEndothelialGrowthFactorReceptor3ontheApoptosisofCervicalCancer论文代写 ...
2021/8/11 0:36:56
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,孙各琴,周有利,朱名安,邓守明,ASODN具有促进化疗药物诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及增强化疗药物敏感性作用,carcinoma;Antisenseoligodexynucleotide;HIF1α ...
2021/8/12 0:23:26
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,孙各琴,周有利,朱名安,邓守明,ASODN具有促进化疗药物诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及增强化疗药物敏感性作用,carcinoma;Antisenseoligodexynucleotide;HIF1α ...
2021/8/14 6:23:36
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,孙各琴,周有利,朱名安,邓守明,ASODN具有促进化疗药物诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及增强化疗药物敏感性作用,carcinoma;Antisenseoligodexynucleotide;HIF1α ...
2021/8/14 6:23:36
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作者:刘琰,杨婉华,马湘一,陈睿,汪蕊,卢运萍,马丁,王世宣代写论文,血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)在人宫颈癌细胞凋亡过程中的作用,VascularEndothelialGrowthFactorReceptor3ontheApoptosisofCervicalCancer论文代写 ...
2021/8/11 0:36:56
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influenceofproteasomesubunitβ5(PSMB5)geneoverexpressioninhumanlensepithelialcellsundertheoxidativecondition.【Methods,theproteasomeβ5catalyticsubunitcanplayprotectiveroletohumanlensepithelialcellsunderthelowoxidativeenvironment.
,稳定转染的晶状体上皮细胞,用冷PBS洗3次,加入100μL细胞裂解液(50mmol/LTris—HCl,150mmol/LNaCl,1%NP—40,0.1%SDS,1mmol/L苯甲基磺酰氟),冰上放置30min,用刮器刮取,4℃、12000r/min(r=8.3cm)离心20min(Eppendorf5415R),收集上清,测定提取的总蛋白浓度,—20℃保存 ...
2021/8/17 21:45:26
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influenceofproteasomesubunitβ5(PSMB5)geneoverexpressioninhumanlensepithelialcellsundertheoxidativecondition.【Methods,theproteasomeβ5catalyticsubunitcanplayprotectiveroletohumanlensepithelialcellsunderthelowoxidativeenvironment.
,稳定转染的晶状体上皮细胞,用冷PBS洗3次,加入100μL细胞裂解液(50mmol/LTris—HCl,150mmol/LNaCl,1%NP—40,0.1%SDS,1mmol/L苯甲基磺酰氟),冰上放置30min,用刮器刮取,4℃、12000r/min(r=8.3cm)离心20min(Eppendorf5415R),收集上清,测定提取的总蛋白浓度,—20℃保存 ...
2021/8/17 21:45:26
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induciblefactor—1alpha,HIF—1α)在体外对人外周血内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPC)向血管内皮细胞(endothelialcells,EC)分化的影响,用密度梯度离心法分离人外周血EPC,电穿孔技术转染HIF—1α质粒至EPC,计算转染效率,RT—PCR方法测定HIF—1α、HIF—1β及HIF—1α下游靶基因血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)mRNA在质粒转染前后含量变化,免疫细胞化学方法检测在常氧下HIF—1α蛋白在HIF—1α质粒转染前后不同时点蛋白表达情况,细胞膜表面抗原决定簇流式细胞术测定FITC—CD31+EPCs/EC在未转染组、pEGFP空质粒或HIF—1α质粒转染组转染3—10天后的组间差异,光镜下观察转染前后细胞形态及分化程度,HypoxiaInducibleFactor—1alpha(HIF—1α)PromotestheDifferentiationofEndothelialProgenitorCellExVivo,induciblefactor—1,HIF—1)是氧依赖性的转录调控基因,近年来的基础研究显示HIF基因在缺血部位表达水平上调[1],HIF—1活性主要由HIF1α亚基调节,在低氧、细胞因子、激素调节及遗传改变时HIF—1α由胞浆转移至胞核,与HIF—1β亚基二聚化,再与相应基因如VEGF、VEGFR2的启动子结合而促进其表达[2] ...
2021/4/23 19:04:01
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4.TNF—α基因转染胰腺癌细胞的5—FU治疗:TNF—α基因转染胰腺癌细胞后给予5—FU治疗的疗效分析,以未转染的胰腺癌细胞为对照,2.外源基因检测:未转染TNF—α基因的胰腺癌细胞中无明显TNF—α的mRNA,而转染后的胰腺癌克隆细胞中,电泳中有TNF—αmRNA的特异性条带波,证实外源性TNF—α经逆转录病毒载体转染,已有mRNA的表达,本研究结果显示,人胰腺癌细胞能被TNF—α基因转染,RT—PCR结果表明目的基因均有转录行为发生,且TNF—α基因转染的胰腺癌细胞增殖能力降低 ...
2021/7/10 8:59:29
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卢振霞,TRAIL和DDP联用可抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖,具有协调作用,流式细胞技术检测细胞凋亡率同上,对数生长期细胞接种于6孔培养板中,分组进行转染、加药 ...
2021/8/18 17:59:07
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卢振霞,TRAIL和DDP联用可抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖,具有协调作用,流式细胞技术检测细胞凋亡率同上,对数生长期细胞接种于6孔培养板中,分组进行转染、加药 ...
2021/8/18 17:59:07
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基因治疗开展以来,基因治疗载体就被认为是其核心问题,但是,非病毒载体转染效率不高,是我们不能通过体外转染的途径进行临床实验的一个难题,为了将该载体系统更好地应用到遗传病的基因治疗中去,有必要摸索并优化该载体转染人正常细胞的条件 ...
2021/10/13 7:35:59
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“我是国师苏倾城,这人太“恐怖”、“危险”了,必须要“消灭”掉,“阁主,发现目标,用不用立即斩杀 ...
2022/9/16 15:00:03
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T细胞识别抗原的特异性主要由T细胞受体(TCR)决定的,TCR基因转导为肿瘤的过继免疫治疗提供了新途径,T细胞受体(TCR)是T细胞表面能够识别和结合蛋白质抗原的特异性受体,通过基因修饰的TCR的α,β基因与野生型的TCR的α,β基因在CD8+T细胞中的表达比较,发现前者比后者的膜表达水平显著提高 ...
2021/8/24 22:02:16
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T细胞识别抗原的特异性主要由T细胞受体(TCR)决定的,TCR基因转导为肿瘤的过继免疫治疗提供了新途径,T细胞受体(TCR)是T细胞表面能够识别和结合蛋白质抗原的特异性受体,通过基因修饰的TCR的α,β基因与野生型的TCR的α,β基因在CD8+T细胞中的表达比较,发现前者比后者的膜表达水平显著提高 ...
2021/8/24 22:02:16
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染罗衣,秋蓝难着色,
,不是无心人,为作台邛客 ...
2022/9/16 15:00:03
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人DeltaNp73α基因重组腺病毒转染提高了DCCD83,HLADR的表达,并能显著抑制其凋亡水平.结论:人DeltaNp73α基因重组腺病毒转染DC,促进DC的成熟并抑制其凋亡,将有效地提高DC疫苗的抗原呈递能力.
,1.1材料真核表达质粒pcDNA3DeltaNp73αHA由意大利罗马大学GerryMelino教授和VincenzoDelaurenzi博士惠赠,含DeltaNp73α基因cDNA全长约1700bp.PAdTrackCMV,293T细胞,E.coliBJ5183,DH5α大肠杆菌由第三军医大学西南医院烧伤研究所提供.KpnI,XbaI,PmeI,PacI限制性内切酶以及T4DNA连接酶(NEB公司),1.2.4转染后DC中DeltaNp73α的表达收集DC,腺病毒转染48h的DC/AdDeltaNp73α以及对照组的DC/Adctrl.RTPCR分析DeltaNp73αmRNA水平 ...
2021/8/15 22:44:45
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bonemorphogeneticprotein7,hBMP7)基因真核表达载体,评价其转染兔骨髓基质干细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)的诱导成骨能力,[结论]成功构建了pcDNA3.1hBMP7真核表达载体;外源的hBMP7基因可在兔BMSCs中充分、高效的表达,并且这种外源性hBMP7基因具备了促进兔骨髓基质干细胞向成骨细胞转化的能力,这为hBMP7的基因治疗提供了坚实的理论基础,重组pcDNA3.1hBMP7真核表达载体的构建 ...
2021/8/6 4:54:25
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bonemorphogeneticprotein7,hBMP7)基因真核表达载体,评价其转染兔骨髓基质干细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)的诱导成骨能力,[结论]成功构建了pcDNA3.1hBMP7真核表达载体;外源的hBMP7基因可在兔BMSCs中充分、高效的表达,并且这种外源性hBMP7基因具备了促进兔骨髓基质干细胞向成骨细胞转化的能力,这为hBMP7的基因治疗提供了坚实的理论基础,重组pcDNA3.1hBMP7真核表达载体的构建 ...
2021/8/6 4:54:25
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CytotoxicitybyRNAiERCC1GeneExpressioninOvarianCancerCelILine,withcisplatinincreasesthesensitivitytochemotherapy.Conclusion:ERCC1—siRNAcouldreducetheexpressionofERCC1geneandincreasethesensitivitytocisplatininCOC1/DDPcell.
,本研究根据ERCC1基因高表达于卵巢癌耐药细胞以及RNAi高效特异抑制目的基因的特点,针对ERCC1基因设计合成小干扰RNA(siRNA),在脂质体的介导下转染人卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP,以RT—PCR及Westernblot方法检测RNA干扰前后细胞内ERCC1基因mRNA及蛋白表达水平的改变 ...
2021/8/12 3:36:05
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CytotoxicitybyRNAiERCC1GeneExpressioninOvarianCancerCelILine,withcisplatinincreasesthesensitivitytochemotherapy.Conclusion:ERCC1—siRNAcouldreducetheexpressionofERCC1geneandincreasethesensitivitytocisplatininCOC1/DDPcell.
,本研究根据ERCC1基因高表达于卵巢癌耐药细胞以及RNAi高效特异抑制目的基因的特点,针对ERCC1基因设计合成小干扰RNA(siRNA),在脂质体的介导下转染人卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP,以RT—PCR及Westernblot方法检测RNA干扰前后细胞内ERCC1基因mRNA及蛋白表达水平的改变 ...
2021/8/12 3:36:05
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PCR引物序列如下:HIF1α上游5′CCTGCACTCAATCAAGAAGTTGC3′,下游5′TTCCTGCTCTGTTTGGTGAGGCT3′(618bp),缺氧对HIF1α、VEGF蛋白表达的影响论文网,siRNA转染细胞后,HIF1α蛋白表达明显降低,HIF1α表达抑制率为90%,而未转染组及转染阴性对照组HIF1α蛋白没有明显改变,见图4 ...
2021/8/12 21:03:36
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PCR引物序列如下:HIF1α上游5′CCTGCACTCAATCAAGAAGTTGC3′,下游5′TTCCTGCTCTGTTTGGTGAGGCT3′(618bp),缺氧对HIF1α、VEGF蛋白表达的影响,siRNA转染细胞后,HIF1α蛋白表达明显降低,HIF1α表达抑制率为90%,而未转染组及转染阴性对照组HIF1α蛋白没有明显改变,见图4 ...
2021/8/21 17:53:26
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PCR引物序列如下:HIF1α上游5′CCTGCACTCAATCAAGAAGTTGC3′,下游5′TTCCTGCTCTGTTTGGTGAGGCT3′(618bp),缺氧对HIF1α、VEGF蛋白表达的影响论文网,siRNA转染细胞后,HIF1α蛋白表达明显降低,HIF1α表达抑制率为90%,而未转染组及转染阴性对照组HIF1α蛋白没有明显改变,见图4 ...
2021/8/12 21:03:36
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PCR引物序列如下:HIF1α上游5′CCTGCACTCAATCAAGAAGTTGC3′,下游5′TTCCTGCTCTGTTTGGTGAGGCT3′(618bp),缺氧对HIF1α、VEGF蛋白表达的影响,siRNA转染细胞后,HIF1α蛋白表达明显降低,HIF1α表达抑制率为90%,而未转染组及转染阴性对照组HIF1α蛋白没有明显改变,见图4 ...
2021/8/21 17:53:26
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成功构建的含人SCL基因的重组腺病毒对Cajal间质细胞有很强的转染能力,可介导SCL基因在Cajal间质细胞中表达,重组腺病毒AdGFP/SCL对培养的Cajal间质细胞的转染效率,重组腺病毒AdGFP/SCL介导的SCL基因在Cajal间质细胞中的表达 ...
2021/8/15 2:46:57
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成功构建的含人SCL基因的重组腺病毒对Cajal间质细胞有很强的转染能力,可介导SCL基因在Cajal间质细胞中表达,重组腺病毒AdGFP/SCL对培养的Cajal间质细胞的转染效率,重组腺病毒AdGFP/SCL介导的SCL基因在Cajal间质细胞中的表达 ...
2021/8/15 2:46:57
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acaucggccuuaa—3',反义链5'—gauggauguagccggaauu—3',uguguaccaaaua—3',反义链5'—aauggcacacaugguuuau—3',gaacgugucacgu—3’,反义链5’—acgugacacguucggagaa—3’ ...
2021/8/10 9:32:06
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acaucggccuuaa—3',反义链5'—gauggauguagccggaauu—3',uguguaccaaaua—3',反义链5'—aauggcacacaugguuuau—3',gaacgugucacgu—3’,反义链5’—acgugacacguucggagaa—3’ ...
2021/8/10 9:32:06
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通过脂质体介导法,将空白载体PXCN2及丙型肝炎病毒NS4B重组质粒PCXN2NS4B引入Chang肝细胞内,并G418筛选作稳定传代,RTPCR法鉴定质粒成功转染入肝细胞内,免疫细胞化学方法观察细胞内cmyc和ras表达情况,NS4BonExpressionsofcmycProteinandrasProteininHepaticCells.
,words:HepatitisCvirus;Nonstructuralprotein4B;cmyc;ras;G418 ...
2021/8/22 0:23:14
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丙型肝炎病毒非结构蛋白4B(NS4B)对肝细胞内癌基因cmyc和ras蛋白表达的影响,从而探讨其在肝癌发生机制中的可能作用,通过脂质体介导法,将空白载体PXCN2及丙型肝炎病毒NS4B重组质粒PCXN2NS4B引入Chang肝细胞内,并G418筛选作稳定传代,RTPCR法鉴定质粒成功转染入肝细胞内,免疫细胞化学方法观察细胞内cmyc和ras表达情况,HCVNS4BonExpressionsofcmycProtEinandrasProtEIninHepaticCells. ...
2021/8/19 22:11:56
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通过脂质体介导法,将空白载体PXCN2及丙型肝炎病毒NS4B重组质粒PCXN2NS4B引入Chang肝细胞内,并G418筛选作稳定传代,RTPCR法鉴定质粒成功转染入肝细胞内,免疫细胞化学方法观察细胞内cmyc和ras表达情况,NS4BonExpressionsofcmycProteinandrasProteininHepaticCells.
,words:HepatitisCvirus;Nonstructuralprotein4B;cmyc;ras;G418 ...
2021/8/22 0:23:14
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丙型肝炎病毒非结构蛋白4B(NS4B)对肝细胞内癌基因cmyc和ras蛋白表达的影响,从而探讨其在肝癌发生机制中的可能作用,通过脂质体介导法,将空白载体PXCN2及丙型肝炎病毒NS4B重组质粒PCXN2NS4B引入Chang肝细胞内,并G418筛选作稳定传代,RTPCR法鉴定质粒成功转染入肝细胞内,免疫细胞化学方法观察细胞内cmyc和ras表达情况,HCVNS4BonExpressionsofcmycProtEinandrasProtEIninHepaticCells. ...
2021/8/19 22:11:56
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商正玲,张会东,张英,ofLipL32amplifiedfromLeptospirastrain017genomicDNA,ProductforLipL32. ...
2021/8/12 3:32:26
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商正玲,张会东,张英,ofLipL32amplifiedfromLeptospirastrain017genomicDNA,ProductforLipL32. ...
2021/8/12 3:32:26
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1.2.5流式细胞仪检测细胞凋亡收集细胞,调整细胞密度为1×109/L,取1mL细胞悬液,离心,PBS洗涤3次,加10μLAnnexinVFITC,轻轻混匀,加入5μLPI避光室温反应15min,上流式细胞仪(EPLCSELITECOULTERCORPORATION公司)检测.论文网,2.1顺铂对SKOV3细胞的生长抑制作用对照组SKOV3细胞体外生长良好,10,20,40,80,160μmol/L顺铂对SKOV3细胞均有明显的抑制效应(P0.05),10μmol/L顺铂作用SKOV3细胞24,48,72h后的抑制率分别为29.1%,18.2%,50.4%,160μmol/L顺铂作用SKOV3细胞24,48,72h后的抑制率分别为78.9%,78.5%,88.4%.随着时间延长和浓度增加,其抑制作用越来越明显(图1).DDP作用24h的IC50值为37.2μmol/L.论文网,2.2chk2反义寡核苷酸转染SKOV3细胞的效率用FITC标记的寡核苷酸转染SKOV3细胞,24h后用荧光倒置显微镜观察转染效率,发现DNA/Lipofectamine2000脂质体比率为0.6μg∶2μL,0.8μg∶2μL和1.0μg∶2μL时的转染效率分别为98.2%,98.9%和99.3%,其中DNA/Lipofectamine2000脂质体比率为1.0μg∶2μL时转染效率最高(图2). ...
2021/8/19 10:52:07
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1.2.5流式细胞仪检测细胞凋亡收集细胞,调整细胞密度为1×109/L,取1mL细胞悬液,离心,PBS洗涤3次,加10μLAnnexinVFITC,轻轻混匀,加入5μLPI避光室温反应15min,上流式细胞仪(EPLCSELITECOULTERCORPORATION公司)检测.论文网,2.1顺铂对SKOV3细胞的生长抑制作用对照组SKOV3细胞体外生长良好,10,20,40,80,160μmol/L顺铂对SKOV3细胞均有明显的抑制效应(P0.05),10μmol/L顺铂作用SKOV3细胞24,48,72h后的抑制率分别为29.1%,18.2%,50.4%,160μmol/L顺铂作用SKOV3细胞24,48,72h后的抑制率分别为78.9%,78.5%,88.4%.随着时间延长和浓度增加,其抑制作用越来越明显(图1).DDP作用24h的IC50值为37.2μmol/L.论文网,2.2chk2反义寡核苷酸转染SKOV3细胞的效率用FITC标记的寡核苷酸转染SKOV3细胞,24h后用荧光倒置显微镜观察转染效率,发现DNA/Lipofectamine2000脂质体比率为0.6μg∶2μL,0.8μg∶2μL和1.0μg∶2μL时的转染效率分别为98.2%,98.9%和99.3%,其中DNA/Lipofectamine2000脂质体比率为1.0μg∶2μL时转染效率最高(图2). ...
2021/8/19 10:52:07
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pMD—DHBV为本实验室构建的含有湖北麻鸭(DQ276978)DHBVDNA全长基因组的质粒,重组质粒PCR2?1—DHBV1?5的酶切鉴定;未酶切的重组质粒PCR2?1—DHBV1?5为8?4kb,重组质粒PCR2?1—DHBV1?5的PCR鉴定(略)毕业论文;M1:1KbMarker;1:PCR2.1—DHBV1.5 ...
2021/8/17 5:45:46
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目的:研究缺氧诱导因子1α(HIF1α)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响,探讨以HIF1α为靶点进行反义寡核苷酸转染治疗胶质瘤的有效性,ODN的合成与修饰:HIF1αAsODN5‘GCCGGCGCCCTCCAT3‘,并设置了HIF1αSODN作为对照,5‘ATGGAGGGCGCCGGC—3‘,AO/EB双染法检测胶质瘤细胞凋亡:各组细胞转染后24h分别消化离心收集弃上清,加入500μl培养液,配成细胞悬液,再加入实验用AO/EB溶液20μl,混匀,置1滴于载玻片上,荧光显微镜下观察200个细胞,分别计数早期凋亡细胞(VA)、晚期凋亡(NVA)、活细胞(VN)及非凋亡的死亡细胞(NVN),计算凋亡率 ...
2021/8/15 7:57:16
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目的:研究缺氧诱导因子1α(HIF1α)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响,探讨以HIF1α为靶点进行反义寡核苷酸转染治疗胶质瘤的有效性,ODN的合成与修饰:HIF1αAsODN5‘GCCGGCGCCCTCCAT3‘,并设置了HIF1αSODN作为对照,5‘ATGGAGGGCGCCGGC—3‘,AO/EB双染法检测胶质瘤细胞凋亡:各组细胞转染后24h分别消化离心收集弃上清,加入500μl培养液,配成细胞悬液,再加入实验用AO/EB溶液20μl,混匀,置1滴于载玻片上,荧光显微镜下观察200个细胞,分别计数早期凋亡细胞(VA)、晚期凋亡(NVA)、活细胞(VN)及非凋亡的死亡细胞(NVN),计算凋亡率 ...
2021/8/15 7:57:16
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体外设计、合成针对survivin基因的小分子干扰RNA(survivin—siRNA),应用脂质体介导survivin—siRNA转染Panc—1细胞后,MTT试验测定转染细胞的增殖抑制率,RT—PCR检测细胞survivinmRNA表达,琼脂糖凝胶电泳分析其对Panc—1细胞凋亡诱导作用,稀释上、下游模板,终浓度均为100μmol/L,分别与T7启动子序列连接,70℃5min,室温5min,37℃延伸30min,体外转录,37℃2h,siRNA的正、反义RNA结合,37℃过夜,去除前导序列和DNA模板,37℃2h,用层析方法纯化siRNA,采用常规方法培养Panc—1细胞,取对数期生长的细胞用于实验 ...
2021/8/24 8:50:25
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建立恶性疟原虫顶端膜抗原1(AMA1)基因转染伯氏疟原虫的模型.方法:将含有恶性疟原虫AMA1基因的重组转染质粒pDB.DTm.DB./AB.AF.DB.用BglI酶切线性化.伯氏疟原虫经体外培养和分离后进行电转化,转化的原虫经药物筛选后进行PCR检测.结果:PCR检测显示转染伯氏疟原虫存在恶性疟原虫AMA1基因.结论:成功建立了恶性疟原虫AMA1基因转染伯氏疟原虫的模型,为进一步研究提供了基础.
,疟疾是世界上对人类危害最严重的传染病之一.目前药物和疫苗对疟疾,尤其是恶性疟的防治效果均不理想.对疟原虫生物学特性的深入研究可能为疟疾防治提供新的思路.疟原虫转染技术的应用,为进一步研究疟原虫的生物学特性,特别是蛋白质结构与功能提供了有效的实验手段[1].顶端膜抗原1(AMA1)是疟疾红内期疫苗的重要候选抗原.在鼠疟模型和猴疟模型中,鼠和猴疟原虫AMA1可诱导保护性免疫的产生[2—3].我们建立了恶性疟原虫AMA1基因转染伯氏疟原虫的模型,为更深入研究恶性疟原虫AMA1的功能及评价恶性疟原虫AMA1特异性抗体在体内的保护性作用提供了新的工具.
,1.1材料水平式离心机(北京医疗仪器厂产品,型号LXJ6401),电穿孔仪NucleofectorDevice(Amaxa).伯氏疟原虫ANKA株由我室保存.清洁级Wistar大鼠(200g)和昆明小鼠(18~20g)由第四军医大学实验动物中心提供.转染质粒pDB.DTm.DB./AB.AF.DB.[4]含有伯氏疟原虫的二氢叶酸还原酶/胸腺嘧啶合成酶突变体基因(DHFR/TS),提供乙胺嘧啶抗性,由德国海德堡大学Bujard教授惠赠.核酸内切酶BglI(大连TaKaRa),凝胶回收试剂盒(上海华舜生物工程公司),胎牛血清(Gibco),Nycodenz(AxisShield),乙胺嘧啶(Sigma),HumanTCellNucleofectorKit(Amaxa). ...
2021/8/19 21:53:05
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建立恶性疟原虫顶端膜抗原1(AMA1)基因转染伯氏疟原虫的模型.方法:将含有恶性疟原虫AMA1基因的重组转染质粒pDB.DTm.DB./AB.AF.DB.用BglI酶切线性化.伯氏疟原虫经体外培养和分离后进行电转化,转化的原虫经药物筛选后进行PCR检测.结果:PCR检测显示转染伯氏疟原虫存在恶性疟原虫AMA1基因.结论:成功建立了恶性疟原虫AMA1基因转染伯氏疟原虫的模型,为进一步研究提供了基础.
,疟疾是世界上对人类危害最严重的传染病之一.目前药物和疫苗对疟疾,尤其是恶性疟的防治效果均不理想.对疟原虫生物学特性的深入研究可能为疟疾防治提供新的思路.疟原虫转染技术的应用,为进一步研究疟原虫的生物学特性,特别是蛋白质结构与功能提供了有效的实验手段[1].顶端膜抗原1(AMA1)是疟疾红内期疫苗的重要候选抗原.在鼠疟模型和猴疟模型中,鼠和猴疟原虫AMA1可诱导保护性免疫的产生[2—3].我们建立了恶性疟原虫AMA1基因转染伯氏疟原虫的模型,为更深入研究恶性疟原虫AMA1的功能及评价恶性疟原虫AMA1特异性抗体在体内的保护性作用提供了新的工具.
,1.1材料水平式离心机(北京医疗仪器厂产品,型号LXJ6401),电穿孔仪NucleofectorDevice(Amaxa).伯氏疟原虫ANKA株由我室保存.清洁级Wistar大鼠(200g)和昆明小鼠(18~20g)由第四军医大学实验动物中心提供.转染质粒pDB.DTm.DB./AB.AF.DB.[4]含有伯氏疟原虫的二氢叶酸还原酶/胸腺嘧啶合成酶突变体基因(DHFR/TS),提供乙胺嘧啶抗性,由德国海德堡大学Bujard教授惠赠.核酸内切酶BglI(大连TaKaRa),凝胶回收试剂盒(上海华舜生物工程公司),胎牛血清(Gibco),Nycodenz(AxisShield),乙胺嘧啶(Sigma),HumanTCellNucleofectorKit(Amaxa). ...
2021/8/19 21:53:05
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姚丽杨静慈尚银涛潘崚,探讨外源性野生型PTEN基因对人多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI8226增殖、凋亡、侵袭活性的影响以及PTEN/FAK信号传导通路在细胞侵袭活性中的作用,因此,我们将重组腺病毒介导的野生型PTEN基因导入人MM细胞株RPMI8226,使PTEN基因在RPMI8226细胞中高表达,观察其对RPMI8226细胞增殖、凋亡和侵袭活性的影响,研究PTEN/FAK的表达水平,以进一步了解MM发生发展中可能存在的分子机制,为探索MM基因治疗提供新思路 ...
2021/8/15 15:20:46
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体外设计、合成针对survivin基因的小分子干扰RNA(survivin—siRNA),应用脂质体介导survivin—siRNA转染Panc—1细胞后,MTT试验测定转染细胞的增殖抑制率,RT—PCR检测细胞survivinmRNA表达,琼脂糖凝胶电泳分析其对Panc—1细胞凋亡诱导作用,稀释上、下游模板,终浓度均为100μmol/L,分别与T7启动子序列连接,70℃5min,室温5min,37℃延伸30min,体外转录,37℃2h,siRNA的正、反义RNA结合,37℃过夜,去除前导序列和DNA模板,37℃2h,用层析方法纯化siRNA,采用常规方法培养Panc—1细胞,取对数期生长的细胞用于实验 ...
2021/8/24 8:50:25
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姚丽杨静慈尚银涛潘崚,探讨外源性野生型PTEN基因对人多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI8226增殖、凋亡、侵袭活性的影响以及PTEN/FAK信号传导通路在细胞侵袭活性中的作用,因此,我们将重组腺病毒介导的野生型PTEN基因导入人MM细胞株RPMI8226,使PTEN基因在RPMI8226细胞中高表达,观察其对RPMI8226细胞增殖、凋亡和侵袭活性的影响,研究PTEN/FAK的表达水平,以进一步了解MM发生发展中可能存在的分子机制,为探索MM基因治疗提供新思路 ...
2021/8/15 15:20:46
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应用RNAi技术沉默胰腺癌细胞株中survivin基因对肿瘤细胞凋亡、细胞周期和增殖的变化,靶向survivin的RNAi载体转染胰腺癌细胞,Western印迹检测基因沉默效果,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡及细胞周期,survivin基因沉默可引起胰腺癌细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖 ...
2021/8/11 19:57:26
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应用RNAi技术沉默胰腺癌细胞株中survivin基因对肿瘤细胞凋亡、细胞周期和增殖的变化,靶向survivin的RNAi载体转染胰腺癌细胞,Western印迹检测基因沉默效果,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡及细胞周期,survivin基因沉默可引起胰腺癌细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖 ...
2021/8/11 19:57:26
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2021/8/23 13:39:45
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2021/8/23 13:39:45
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IL12genetransfectiononthegrowthofovariancancerSkov3cellsandtheexpressionofrelatedfactors,目的:观察含小鼠IL12全长基因的质粒转染到Skov3人卵巢癌细胞中,在脾细胞存在的情况下对肿瘤细胞的影响及相关细胞因子的表达.方法:脂质体转染技术将基因转染至Skov3人卵巢癌细胞中,ELISA方法检测IL12及INFγ的表达,MTT方法检测对Skov3卵巢癌细胞增殖的影响.结果:转染后48h检测到IL12的高表达,约(473±38)ng/L,ng/L,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).在脾细胞作用下产生INFγ,以作用后24h表达量高,约(173±18)ng/L,较未转染组高,比较有统计学意义(P<0.05).转染后癌细胞免疫组化可见IL12表达,在脾细胞的作用下,IL12对Skov3卵巢癌细胞有抑制其增殖的作用(P<0.05).结论:可以将IL12基因转染至Skov3人卵巢癌细胞中并表达IL12,脾细胞检测其活性并有相应的细胞因子产生,对Skov3细胞有抑制其增殖作用,从而杀伤卵巢癌细胞,具有抗肿瘤作用. ...
2021/8/15 12:38:15
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杀伤性T细胞的杀伤机制在器官移植排斥反应发挥重要作用[1],本研究将Wee1GFP基因导入胰岛瘤细胞株NIT1细胞,以研究该融合蛋白在胞毒T细胞介导细胞毒效应机制中的作用,blot检测蛋白的表达收集培养的NITwg细胞和NITg细胞,弃去培养液,细胞用预冷的PBS洗涤2遍,按照KEYGENNuclearCytosolExtraction试剂盒提取细胞核蛋白质,blot检测融合蛋白的表达将pWee1GFP和空载体分别导入NIT1细胞,并通过G418筛选获得稳定表达细胞后,采用Westernblot分析融合蛋白Wee1GFP的表达情况 ...
2021/8/13 12:52:26
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pLNCXSlingshot1L重组逆转录病毒载体,获得滴度为5×108CFU/L的病毒上清,感染MG63细胞,获得了过表达SSH1L基因的MG63细胞,将MG63细胞以1×105细胞/孔接种于6孔板中,从包装细胞PA317收集的病毒液,经醋酸纤维素膜滤器过滤后,将病毒液加至MG63细胞,间隔24h后可再次感染病毒,Polybrene的终浓度为8μg/ml,应用RTPCR检测SSH1L的表达情况提取转染和未转染MG63细胞的总RNA,测定纯度及含量,反转录合成cDNA(RT),PCR扩增,SSH1L反应条件为94℃2min,94℃1min、60℃30s、72℃30s33个循环,72℃7min,4℃10min,GAPDH反应条件为95℃2min、95℃30s、55℃30s、72℃30s28个循环,72℃10min,4℃10min,反应结束后,取PCR产物5μl,经琼脂糖凝胶电泳后,紫外灯下观察,照相记录结果 ...
2021/8/11 23:22:26
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pLNCXSlingshot1L重组逆转录病毒载体,获得滴度为5×108CFU/L的病毒上清,感染MG63细胞,获得了过表达SSH1L基因的MG63细胞,将MG63细胞以1×105细胞/孔接种于6孔板中,从包装细胞PA317收集的病毒液,经醋酸纤维素膜滤器过滤后,将病毒液加至MG63细胞,间隔24h后可再次感染病毒,Polybrene的终浓度为8μg/ml,应用RTPCR检测SSH1L的表达情况提取转染和未转染MG63细胞的总RNA,测定纯度及含量,反转录合成cDNA(RT),PCR扩增,SSH1L反应条件为94℃2min,94℃1min、60℃30s、72℃30s33个循环,72℃7min,4℃10min,GAPDH反应条件为95℃2min、95℃30s、55℃30s、72℃30s28个循环,72℃10min,4℃10min,反应结束后,取PCR产物5μl,经琼脂糖凝胶电泳后,紫外灯下观察,照相记录结果 ...
2021/8/11 23:22:26
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杀伤性T细胞的杀伤机制在器官移植排斥反应发挥重要作用[1],本研究将Wee1GFP基因导入胰岛瘤细胞株NIT1细胞,以研究该融合蛋白在胞毒T细胞介导细胞毒效应机制中的作用,blot检测蛋白的表达收集培养的NITwg细胞和NITg细胞,弃去培养液,细胞用预冷的PBS洗涤2遍,按照KEYGENNuclearCytosolExtraction试剂盒提取细胞核蛋白质,blot检测融合蛋白的表达将pWee1GFP和空载体分别导入NIT1细胞,并通过G418筛选获得稳定表达细胞后,采用Westernblot分析融合蛋白Wee1GFP的表达情况 ...
2021/8/13 12:52:26
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吴祁生,徐岚,闫石,杨世蕊,吴士良,研究反义caveolin1对实质肿瘤细胞中β3半乳糖基转移酶7(β3GalT7)表达的调节,以期阐明caveolin1与β3GalT7的相关性,用反义caveolin1致使caveolin1表达下调,并使NIH3T3细胞发生转化,caveolin1表达显著降低[1] ...
2021/7/10 20:09:29
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vascularendothelialgrowthfactor;RNAinterference;K562/A02cells;multidrugresistance多药耐药(MDR)目前仍是急性白血病(AL)治疗的主要障碍,尽管新的化疗药物和化疗方案不断涌现,但仍有部分患者因化疗耐药而导致治疗失败,h后收获细胞,PBS洗涤3次,按胞核/胞质蛋白提取试剂盒说明书提取胞质蛋白,行BCA蛋白制作标准曲线后定量,取50μg总蛋白加适量上样缓冲液100℃煮沸5min变性,12%SDSPAGE电泳,1mA/cm2恒流半干转膜,5%的脱脂奶粉室温摇床封闭1h,以GAPDH(1∶3000)作内参照,鼠抗人VEGF抗体(1∶500),4℃过夜,洗涤液洗膜3次,10min/次,山羊抗鼠二抗(1∶2000)室温孵育1h,洗膜同上,DAB显色,拍照,h后的上述5组细胞各以105/ml接种于96孔板上,2×104/孔,各取4个复孔,加入不同浓度的多柔比星,培养48h后加MTT20μl/孔,37℃,5%CO2培养箱继续孵育4~6h,弃去上清液,加DMSO200μl/孔,振荡20min,使紫色结晶溶解,在490nm波长的酶标免疫测定仪上检测各组的光密度值,然后采用IC50值计算软件分别计算各组细胞的IC50值,相对逆转率=(对照组IC50—处理组IC50)/对照组IC50 ...
2021/8/8 17:07:26