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作者:马力,薛永权,潘金兰,何军,吴亚芳,岑建农,温丙昭,FusionGenesAssociatedwithSpecificTranslocationsinAcuteLeukemiaPatientswithNormalKaryotypesbyUsingMultiplexRT—PCR,的MLL/ENLⅥ组:t(9;22)(q34;q11)的BCR/ABLⅦ组:t(6;9)(p23;q34)的DEK/CANⅧ组:t(11;17)(q23;q21)的PLZF/RARA ...
2021/7/5 22:11:09
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—2重组逆转录病毒,将其导入培养的正常的SD大鼠RPE细胞,然后将其显微注射入视网膜色素变性鼠的视网膜下腔,对视网膜变性性疾病基因治疗进行探索性研究,为构建并鉴定bcl—2基因重组逆转录病毒的工作报道如下,Ⅲ和StuⅠ两酶酶切位点),上游5′—ATAAAGCTTATGGCGCAAGCCGGGAGA—3′(含HindⅢ酶切位点),下游5′—TATAGGCCTTCACTTGTGGCCCAGGTA—3′(含StuⅠ酶切位点),由上海生工生物工程公司合成,逆转录病毒载体PLNCX2,用限制性内切酶HindⅢ和StuⅠ酶切后去磷酸化,pGEM—bcl—2经同样酶切后分离出0.7bpbcl—2全部编码区片段,在T4DNA连接酶的作用下与载体连接、转化,以及用快筛法筛选出基因重组子PLNCX2-bcl—2 ...
2021/8/12 10:49:54
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—2重组逆转录病毒,将其导入培养的正常的SD大鼠RPE细胞,然后将其显微注射入视网膜色素变性鼠的视网膜下腔,对视网膜变性性疾病基因治疗进行探索性研究,为构建并鉴定bcl—2基因重组逆转录病毒的工作报道如下,Ⅲ和StuⅠ两酶酶切位点),上游5′—ATAAAGCTTATGGCGCAAGCCGGGAGA—3′(含HindⅢ酶切位点),下游5′—TATAGGCCTTCACTTGTGGCCCAGGTA—3′(含StuⅠ酶切位点),由上海生工生物工程公司合成,逆转录病毒载体PLNCX2,用限制性内切酶HindⅢ和StuⅠ酶切后去磷酸化,pGEM—bcl—2经同样酶切后分离出0.7bpbcl—2全部编码区片段,在T4DNA连接酶的作用下与载体连接、转化,以及用快筛法筛选出基因重组子PLNCX2-bcl—2 ...
2021/8/12 10:49:54
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姜楠,贾昌昌,杨扬,陈规划,gene—modifiedhepatocytewithmorestrongerantioxidativecapacityisprepared.
,将肝细胞(hTrx基因修饰大鼠肝细胞、空质粒pLEGFP—N1转染病毒感染肝细胞及正常大鼠肝细胞)制成单细胞悬液,以每孔100μL,细胞数104接种于96孔培养板上,培养至细胞80%成片,加入实验浓度为200μmol/LH2O2作用12h、24h和48h,每孔加入新鲜配制的MTT(5.0g·L—1)25μL作用4h,待出现蓝色结晶后,加入二甲基亚砜(DMSO)150μL,震荡使其溶解,570nm波长下测定各组不同时间吸光度值,绘制生长曲线 ...
2021/8/13 19:44:06
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姜楠,贾昌昌,杨扬,陈规划,gene—modifiedhepatocytewithmorestrongerantioxidativecapacityisprepared.
,将肝细胞(hTrx基因修饰大鼠肝细胞、空质粒pLEGFP—N1转染病毒感染肝细胞及正常大鼠肝细胞)制成单细胞悬液,以每孔100μL,细胞数104接种于96孔培养板上,培养至细胞80%成片,加入实验浓度为200μmol/LH2O2作用12h、24h和48h,每孔加入新鲜配制的MTT(5.0g·L—1)25μL作用4h,待出现蓝色结晶后,加入二甲基亚砜(DMSO)150μL,震荡使其溶解,570nm波长下测定各组不同时间吸光度值,绘制生长曲线 ...
2021/8/13 19:44:06
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药理活性研究的深入,其主要活性成分金丝桃素在抗病毒、抗抑郁、抗肿瘤等方面的作用越来越突出,概述如下,贯叶连翘提取物中的金丝桃素和伪金丝桃素具有抗病毒的作用,本研究结果可为金丝桃素类化合物抗病毒作用机理研究提供参考 ...
2021/8/19 8:15:35
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药理活性研究的深入,其主要活性成分金丝桃素在抗病毒、抗抑郁、抗肿瘤等方面的作用越来越突出,概述如下,贯叶连翘提取物中的金丝桃素和伪金丝桃素具有抗病毒的作用,本研究结果可为金丝桃素类化合物抗病毒作用机理研究提供参考 ...
2021/8/19 8:15:35
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T细胞识别抗原的特异性主要由T细胞受体(TCR)决定的,TCR基因转导为肿瘤的过继免疫治疗提供了新途径,T细胞受体(TCR)是T细胞表面能够识别和结合蛋白质抗原的特异性受体,通过基因修饰的TCR的α,β基因与野生型的TCR的α,β基因在CD8+T细胞中的表达比较,发现前者比后者的膜表达水平显著提高 ...
2021/8/24 22:02:16
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T细胞识别抗原的特异性主要由T细胞受体(TCR)决定的,TCR基因转导为肿瘤的过继免疫治疗提供了新途径,T细胞受体(TCR)是T细胞表面能够识别和结合蛋白质抗原的特异性受体,通过基因修饰的TCR的α,β基因与野生型的TCR的α,β基因在CD8+T细胞中的表达比较,发现前者比后者的膜表达水平显著提高 ...
2021/8/24 22:02:16
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反应体积为20μL,反应条件如下:MgCl25mmol/L,10×逆转录缓冲液2μL,dNTP1mmol/L,逆转录酶15U,核酸酶抑制剂0.5U,Oligo(dT)15引物0.5μg,模板RNA1ug,加无RNase水至终体积20μL,5‘ATGGCAGAAGGAGGAGGG3’和5‘CGAAACGCTGAGGGAGGCT3‘,GAPDH的引物为:5’CTCAGACACCATGGGGAAGGTGA3’和5’ATGATCTTGAGGCTGTTGTCATA3’,反应体系包括:cDNA模板2μL,MgCl21.5mmol/L,10×Buffer2.5μL,dNTP0.2mmol/L,引物0.5umol/L,Taq酶1U ...
2021/8/12 16:16:35
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反应体积为20μL,反应条件如下:MgCl25mmol/L,10×逆转录缓冲液2μL,dNTP1mmol/L,逆转录酶15U,核酸酶抑制剂0.5U,Oligo(dT)15引物0.5μg,模板RNA1ug,加无RNase水至终体积20μL,5‘ATGGCAGAAGGAGGAGGG3’和5‘CGAAACGCTGAGGGAGGCT3‘,GAPDH的引物为:5’CTCAGACACCATGGGGAAGGTGA3’和5’ATGATCTTGAGGCTGTTGTCATA3’,反应体系包括:cDNA模板2μL,MgCl21.5mmol/L,10×Buffer2.5μL,dNTP0.2mmol/L,引物0.5umol/L,Taq酶1U ...
2021/8/12 16:16:35
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探讨尿脱落细胞端粒酶催化亚基(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)mRNA检测在膀胱癌早期诊断和监测复发中的应用价值,膀胱良性疾病患者38例,来自上述两所医院,男26例,女12例,年龄25—76岁,包括良性前列腺增生症12例,腺性膀胱炎11例,膀胱乳头状瘤8例,膀胱结石7例,采用瑞氏—姬姆萨复合染色法,以正常膀胱移行细胞形态对照 ...
2021/8/12 6:17:46
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探讨尿脱落细胞端粒酶催化亚基(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)mRNA检测在膀胱癌早期诊断和监测复发中的应用价值,膀胱良性疾病患者38例,来自上述两所医院,男26例,女12例,年龄25—76岁,包括良性前列腺增生症12例,腺性膀胱炎11例,膀胱乳头状瘤8例,膀胱结石7例,采用瑞氏—姬姆萨复合染色法,以正常膀胱移行细胞形态对照 ...
2021/8/12 6:17:46
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作者:周颖,凌斌,高婷,陈敏,冯定庆,程志祥,朱园园,赵卫东,石永云,王梅梅,祝怀平,体外合成含针对Her2特异基因序列的寡核苷酸并定向克隆入逆转录病毒载体RNAiReadypSIRENRetroQ,构建的载体通过测序、酶切鉴定后,脂质体介导下转染到包装病毒细胞株PT67中,嘌呤霉素筛选并挑选细胞克隆,收获病毒上清,将病毒上清转染SKOV3中,经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her2表达的SKOV3细胞株,并分别通过RTPCR和免疫组化方法鉴定抑制Her2表达的效果,将包装病毒细胞PT67种到6孔板中,每孔1×105,完全培养基培养12h后用RPMI1640洗涤2次,更换含25μM氯喹的DMEM培养1h,分别将Her2/siRNA1、Her2/siRNA2、Her2/siRNAnegtivecontrol各5μg转染PT67,脂质体Lipofect20005μl/孔 ...
2021/8/27 15:20:27
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作者:周颖,凌斌,高婷,陈敏,冯定庆,程志祥,朱园园,赵卫东,石永云,王梅梅,祝怀平,体外合成含针对Her2特异基因序列的寡核苷酸并定向克隆入逆转录病毒载体RNAiReadypSIRENRetroQ,构建的载体通过测序、酶切鉴定后,脂质体介导下转染到包装病毒细胞株PT67中,嘌呤霉素筛选并挑选细胞克隆,收获病毒上清,将病毒上清转染SKOV3中,经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her2表达的SKOV3细胞株,并分别通过RTPCR和免疫组化方法鉴定抑制Her2表达的效果,将包装病毒细胞PT67种到6孔板中,每孔1×105,完全培养基培养12h后用RPMI1640洗涤2次,更换含25μM氯喹的DMEM培养1h,分别将Her2/siRNA1、Her2/siRNA2、Her2/siRNAnegtivecontrol各5μg转染PT67,脂质体Lipofect20005μl/孔 ...
2021/8/27 15:20:27
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1.2.1逆转录病毒上清的制备将Mig210和MigRI空载在jetPEITM的介导下转染PhoenixAmpo细胞,36h后收集第一批病毒上清,72h后收集第二批病毒上清,用有限稀释法感染NIH3T3细胞计数绿色荧光测病毒滴度,达到1×1011~1×1012IU/L离心过滤,存于—80℃备用.代写论文,1.2.2供体鼠骨髓细胞的制备尾静脉注射雄性供体BALB/c小鼠5氟尿嘧啶(5FU),4d后处死小鼠取骨髓,用DMEM预激培养基(含胎牛血清、WEHI3B细胞上清、青霉素、链霉素、肝素、环丙沙星、L谷氨酰胺、rmIL3,rmIL6和rmSCF)培养24h后,计数有核活细胞.毕业论文,1.2.3病毒感染骨髓原代细胞使用含500mL/L逆转录病毒上清,10mmol/LHepes,2mg/L聚凝胺,pH7.4DMEM培养基,病毒和细胞在20℃,1000g离心90min共沉降,2~4h的吸附后更换培养基,48h后进行第二轮重复上述的转导和共沉降,吸附2h后收集细胞,用DHanks洗涤,计数有核活细胞. ...
2021/8/19 22:03:36
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1.2.1逆转录病毒上清的制备将Mig210和MigRI空载在jetPEITM的介导下转染PhoenixAmpo细胞,36h后收集第一批病毒上清,72h后收集第二批病毒上清,用有限稀释法感染NIH3T3细胞计数绿色荧光测病毒滴度,达到1×1011~1×1012IU/L离心过滤,存于—80℃备用.
,1.2.2供体鼠骨髓细胞的制备尾静脉注射雄性供体BALB/c小鼠5氟尿嘧啶(5FU),4d后处死小鼠取骨髓,用DMEM预激培养基(含胎牛血清、WEHI3B细胞上清、青霉素、链霉素、肝素、环丙沙星、L谷氨酰胺、rmIL3,rmIL6和rmSCF)培养24h后,计数有核活细胞.
,1.2.3病毒感染骨髓原代细胞使用含500mL/L逆转录病毒上清,10mmol/LHepes,2mg/L聚凝胺,pH7.4DMEM培养基,病毒和细胞在20℃,1000g离心90min共沉降,2~4h的吸附后更换培养基,48h后进行第二轮重复上述的转导和共沉降,吸附2h后收集细胞,用DHanks洗涤,计数有核活细胞. ...
2021/8/21 21:28:26
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作者:曾赵军,胡维新,李子博,罗赛群,探讨Tet调控下体外抗生素诱导基因治疗人乳腺癌裸鼠移植瘤的可行性,通过逆转录病毒介导Tet调控,可以在体外抗生素Dox诱导下对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型进行基因治疗,杀伤肿瘤细胞 ...
2021/8/19 4:20:06
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作者:曾赵军,胡维新,李子博,罗赛群,探讨Tet调控下体外抗生素诱导基因治疗人乳腺癌裸鼠移植瘤的可行性,通过逆转录病毒介导Tet调控,可以在体外抗生素Dox诱导下对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型进行基因治疗,杀伤肿瘤细胞 ...
2021/8/19 4:20:06
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1.2.1逆转录病毒上清的制备将Mig210和MigRI空载在jetPEITM的介导下转染PhoenixAmpo细胞,36h后收集第一批病毒上清,72h后收集第二批病毒上清,用有限稀释法感染NIH3T3细胞计数绿色荧光测病毒滴度,达到1×1011~1×1012IU/L离心过滤,存于—80℃备用.
,1.2.2供体鼠骨髓细胞的制备尾静脉注射雄性供体BALB/c小鼠5氟尿嘧啶(5FU),4d后处死小鼠取骨髓,用DMEM预激培养基(含胎牛血清、WEHI3B细胞上清、青霉素、链霉素、肝素、环丙沙星、L谷氨酰胺、rmIL3,rmIL6和rmSCF)培养24h后,计数有核活细胞.
,1.2.3病毒感染骨髓原代细胞使用含500mL/L逆转录病毒上清,10mmol/LHepes,2mg/L聚凝胺,pH7.4DMEM培养基,病毒和细胞在20℃,1000g离心90min共沉降,2~4h的吸附后更换培养基,48h后进行第二轮重复上述的转导和共沉降,吸附2h后收集细胞,用DHanks洗涤,计数有核活细胞. ...
2021/8/21 21:28:26
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1.2.1逆转录病毒上清的制备将Mig210和MigRI空载在jetPEITM的介导下转染PhoenixAmpo细胞,36h后收集第一批病毒上清,72h后收集第二批病毒上清,用有限稀释法感染NIH3T3细胞计数绿色荧光测病毒滴度,达到1×1011~1×1012IU/L离心过滤,存于—80℃备用.代写论文,1.2.2供体鼠骨髓细胞的制备尾静脉注射雄性供体BALB/c小鼠5氟尿嘧啶(5FU),4d后处死小鼠取骨髓,用DMEM预激培养基(含胎牛血清、WEHI3B细胞上清、青霉素、链霉素、肝素、环丙沙星、L谷氨酰胺、rmIL3,rmIL6和rmSCF)培养24h后,计数有核活细胞.毕业论文,1.2.3病毒感染骨髓原代细胞使用含500mL/L逆转录病毒上清,10mmol/LHepes,2mg/L聚凝胺,pH7.4DMEM培养基,病毒和细胞在20℃,1000g离心90min共沉降,2~4h的吸附后更换培养基,48h后进行第二轮重复上述的转导和共沉降,吸附2h后收集细胞,用DHanks洗涤,计数有核活细胞. ...
2021/8/19 22:03:36
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拉米夫定副作用
,:
,拉米夫定注意事项 ...
2021/11/9 14:51:50
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近年来基因转移技术在骨组织再生、骨缺损研究中的作用越来越受到重视,将相关生长因子通过体外转移或体内直接转移的方法能够新生骨组织.Nell1是一种具有较强成骨活性的生长因子,其成骨能力已得到证实[1].用逆转录病毒介导的方法可以将Nell1蛋白转入犬骨髓间充质干细胞(BMSc)中,在获得外源Nell1表达的同时,BMSc的成骨活性也得到显著提高.但含有Nell1基因的逆转录病毒液在体内是否具有诱导成骨活性、其形成骨组织并修复骨缺损的能力仍需验证.
,I酶切PBSKNell1(AmericanTisueCultureCollection)和PLNCX2逆转录病毒载体(Clontech),黏端连接后提取质粒进行酶切鉴定(SmaI酶切),筛选出正确插入的重组质粒PLNCX2Nell1.使用脂质体转染PLNCX2Nell1包装细胞PT67,使用G418筛选至阳性克隆形成,将阳性克隆细胞进行扩增,收集培养上清液,命名为PTPLNCX2—Nell1病毒液.
,聚羟基丁酸酯(PLGA)生物材料由中国科学院化学研究所制备并惠赠.材料呈多孔块状,参数基本如下:孔径为200~300nm,孔隙率大于90%,将生物材料修剪成体积为0.2cm×0.2cm×1.5cm长条状.使用750mL/L乙醇浸泡,无菌0.1mol/LPBS反复冲洗并浸泡后,紫外线下晾干,封装备用.用于骨缺损修复实验前取1mLPLNCX2—Nell1病毒液浸泡生物材料24h.单纯材料修复组用相应细胞培养基浸泡. ...
2021/8/20 3:58:15
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pLNCXSlingshot1L重组逆转录病毒载体,获得滴度为5×108CFU/L的病毒上清,感染MG63细胞,获得了过表达SSH1L基因的MG63细胞,将MG63细胞以1×105细胞/孔接种于6孔板中,从包装细胞PA317收集的病毒液,经醋酸纤维素膜滤器过滤后,将病毒液加至MG63细胞,间隔24h后可再次感染病毒,Polybrene的终浓度为8μg/ml,应用RTPCR检测SSH1L的表达情况提取转染和未转染MG63细胞的总RNA,测定纯度及含量,反转录合成cDNA(RT),PCR扩增,SSH1L反应条件为94℃2min,94℃1min、60℃30s、72℃30s33个循环,72℃7min,4℃10min,GAPDH反应条件为95℃2min、95℃30s、55℃30s、72℃30s28个循环,72℃10min,4℃10min,反应结束后,取PCR产物5μl,经琼脂糖凝胶电泳后,紫外灯下观察,照相记录结果 ...
2021/8/11 23:22:26
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近年来基因转移技术在骨组织再生、骨缺损研究中的作用越来越受到重视,将相关生长因子通过体外转移或体内直接转移的方法能够新生骨组织.Nell1是一种具有较强成骨活性的生长因子,其成骨能力已得到证实[1].用逆转录病毒介导的方法可以将Nell1蛋白转入犬骨髓间充质干细胞(BMSc)中,在获得外源Nell1表达的同时,BMSc的成骨活性也得到显著提高.但含有Nell1基因的逆转录病毒液在体内是否具有诱导成骨活性、其形成骨组织并修复骨缺损的能力仍需验证.
,I酶切PBSKNell1(AmericanTisueCultureCollection)和PLNCX2逆转录病毒载体(Clontech),黏端连接后提取质粒进行酶切鉴定(SmaI酶切),筛选出正确插入的重组质粒PLNCX2Nell1.使用脂质体转染PLNCX2Nell1包装细胞PT67,使用G418筛选至阳性克隆形成,将阳性克隆细胞进行扩增,收集培养上清液,命名为PTPLNCX2—Nell1病毒液.
,聚羟基丁酸酯(PLGA)生物材料由中国科学院化学研究所制备并惠赠.材料呈多孔块状,参数基本如下:孔径为200~300nm,孔隙率大于90%,将生物材料修剪成体积为0.2cm×0.2cm×1.5cm长条状.使用750mL/L乙醇浸泡,无菌0.1mol/LPBS反复冲洗并浸泡后,紫外线下晾干,封装备用.用于骨缺损修复实验前取1mLPLNCX2—Nell1病毒液浸泡生物材料24h.单纯材料修复组用相应细胞培养基浸泡. ...
2021/8/20 3:58:15
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pLNCXSlingshot1L重组逆转录病毒载体,获得滴度为5×108CFU/L的病毒上清,感染MG63细胞,获得了过表达SSH1L基因的MG63细胞,将MG63细胞以1×105细胞/孔接种于6孔板中,从包装细胞PA317收集的病毒液,经醋酸纤维素膜滤器过滤后,将病毒液加至MG63细胞,间隔24h后可再次感染病毒,Polybrene的终浓度为8μg/ml,应用RTPCR检测SSH1L的表达情况提取转染和未转染MG63细胞的总RNA,测定纯度及含量,反转录合成cDNA(RT),PCR扩增,SSH1L反应条件为94℃2min,94℃1min、60℃30s、72℃30s33个循环,72℃7min,4℃10min,GAPDH反应条件为95℃2min、95℃30s、55℃30s、72℃30s28个循环,72℃10min,4℃10min,反应结束后,取PCR产物5μl,经琼脂糖凝胶电泳后,紫外灯下观察,照相记录结果 ...
2021/8/11 23:22:26
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我们应用荧光定量逆转录聚合酶链式反应和免疫组化Envision二步法分别检测30例新鲜肾癌和癌旁正常组织中乙酰肝素酶mRNA的表达水平及62例石蜡包埋肾癌组织中乙酰肝素酶蛋白的表达水平,探讨肾癌乙酰肝素酶基因和蛋白的表达水平及其与肾癌发生、发展和转移的关系,2μL,下游引物0.5μL,dNTPs1μL,MMLV1μL,DEPC水3.5μL,RNA模板2μL,总体积10μL,阳性定量标准品及样本均按以下反应体系进行:5×定量PCRbuffer10μL,上游引物F1μL,下游引物R1μL,dNTPs1μL,荧光探针1μL,Taq酶2μL,cDNA5μL,ddH2O29μL ...
2021/8/11 10:36:16
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88888888 ...
2021/8/20 11:36:25
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目的研究含绿色荧光蛋白(GFP)和人胰岛素原基因的逆转录病毒表达载体在HepG2细胞中的表达,结论含GFP和调控元件的人胰岛素原基因逆转录病毒表达载体能够在HepG2细胞中成功表达,并且GFP基因的表达量反映了人胰岛素的分泌量,转染基因细胞培养遗传载体 ...
2021/8/19 19:15:25
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88888888 ...
2021/8/20 11:36:25
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论文关键词:乙型肝炎病毒;拉米夫定;耐药机制,但是,拉米夫定对细胞核内HBV的cccDNA没有作用,故难以彻底消除HBV,当停药后,核内cccDNA又继续进行复制,因而需长期用药治疗,LMV等核苷(酸)类似物的作用靶点是HBV的带有逆转录酶活性的DNA聚合酶,该酶由P基因编码,当P基因自然发生变异或在药物的压力下发生变异,引起DNA聚合酶空间结构改变时,LMV的抑制作用丧失或减弱,出现病毒耐药 ...
2021/8/13 6:45:06
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论文关键词:乙型肝炎病毒;拉米夫定;耐药机制,但是,拉米夫定对细胞核内HBV的cccDNA没有作用,故难以彻底消除HBV,当停药后,核内cccDNA又继续进行复制,因而需长期用药治疗,LMV等核苷(酸)类似物的作用靶点是HBV的带有逆转录酶活性的DNA聚合酶,该酶由P基因编码,当P基因自然发生变异或在药物的压力下发生变异,引起DNA聚合酶空间结构改变时,LMV的抑制作用丧失或减弱,出现病毒耐药 ...
2021/8/13 6:45:06
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我们应用荧光定量逆转录聚合酶链式反应和免疫组化Envision二步法分别检测30例新鲜肾癌和癌旁正常组织中乙酰肝素酶mRNA的表达水平及62例石蜡包埋肾癌组织中乙酰肝素酶蛋白的表达水平,探讨肾癌乙酰肝素酶基因和蛋白的表达水平及其与肾癌发生、发展和转移的关系,2μL,下游引物0.5μL,dNTPs1μL,MMLV1μL,DEPC水3.5μL,RNA模板2μL,总体积10μL,阳性定量标准品及样本均按以下反应体系进行:5×定量PCRbuffer10μL,上游引物F1μL,下游引物R1μL,dNTPs1μL,荧光探针1μL,Taq酶2μL,cDNA5μL,ddH2O29μL ...
2021/8/11 10:36:16
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目的研究含绿色荧光蛋白(GFP)和人胰岛素原基因的逆转录病毒表达载体在HepG2细胞中的表达,结论含GFP和调控元件的人胰岛素原基因逆转录病毒表达载体能够在HepG2细胞中成功表达,并且GFP基因的表达量反映了人胰岛素的分泌量,转染基因细胞培养遗传载体 ...
2021/8/19 19:15:25
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88888888 ...
2021/8/19 1:19:45
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scFv/CD80/CD28/ζ的重组真核表达载体,转染PA317细胞株,包装制备重组非复制型逆转录病毒,为此,我们利用anti—CD20单链抗体(scFv)、CD80穿膜蛋白及T细胞活化信号CD28—CD3ζ构建表达pLNCX/anti—CD20scFv/CD80/CD28/ζ的非复制型高滴度逆转录病毒,为以后该逆转录病毒转染原代T淋巴细胞从而制备CD20靶向性嵌合锚定T细胞奠定基础,重组表达载体pLNCX/anti—CD20scFv/CD80/CD28/ζ的构建及鉴定以pBULLET质粒为模板,通过上下游引物进行PCR扩增反应,反应条件为94℃5min,94℃1min,55℃1min,72℃1min,共25个循环,最后再于72℃延伸10min,扩增产物回收纯化后与pCR—TOPO—T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,克隆筛选,挑取白斑摇菌提取质粒,行ClaⅠ单酶切及电泳鉴定,酶切阳性质粒送上海联合基因公司测序,将测序正确的pCR—TOPO/CD28/ζ载体行ClaⅠ单酶切,酶切产物回收与线性真核逆转录病毒表达载体pLNCX/anti—CD20scFv/CD80连接,转化大肠杆菌DH5α,挑取菌落送上海联合基因公司测序,与已知的序列分析进行比较 ...
2021/8/16 2:49:56
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PCR法扩增GDNF基因及IRES2EGFP基因,测序验证正确后与逆转录病毒载体pLXSN连接,构建重组逆转录病毒质粒pLXSNIRES2EGFPGDNF,正确克隆了人GDNF基因全序列并构建重组逆转录病毒pLXSNIRES2EGFPGDNF质粒,Ⅱ分别双酶切pLXSNIRES2EGFP及PMD18TGDNF,T4连接酶连接酶切后产物,构建pLXSNIRES2EGFPGDNF重组质粒,EcoRI酶切鉴定 ...
2021/8/17 9:27:26
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PCR法扩增GDNF基因及IRES2EGFP基因,测序验证正确后与逆转录病毒载体pLXSN连接,构建重组逆转录病毒质粒pLXSNIRES2EGFPGDNF,正确克隆了人GDNF基因全序列并构建重组逆转录病毒pLXSNIRES2EGFPGDNF质粒,Ⅱ分别双酶切pLXSNIRES2EGFP及PMD18TGDNF,T4连接酶连接酶切后产物,构建pLXSNIRES2EGFPGDNF重组质粒,EcoRI酶切鉴定 ...
2021/8/17 9:27:26
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艾滋病病毒/艾滋病仍是世界上最重大的公共卫生挑战之一,尤其是在低收入和中等收入国家,此外,经证明,抗逆转录病毒疗法可防止艾滋病病毒传播,然而,艾滋病病毒检测覆盖面依然十分有限,原因是估计仅有54%的艾滋病病毒携带者知晓其感染状况 ...
2021/8/4 18:10:26
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艾滋病病毒/艾滋病仍是世界上最重大的公共卫生挑战之一,尤其是在低收入和中等收入国家,此外,经证明,抗逆转录病毒疗法可防止艾滋病病毒传播,然而,艾滋病病毒检测覆盖面依然十分有限,原因是估计仅有54%的艾滋病病毒携带者知晓其感染状况 ...
2021/8/4 18:10:26
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通过逆转录—DNA聚合酶链反应(RT—PCR)技术检测豚鼠哮喘模型气管上皮内皮素—1(ET—1)mRˉNA表达,检测哮喘患者气管上皮内皮素—1(ET—1)和内皮素转换酶(ECE)mRNA表达,TRERMALCYCLER480型自动PCR仪(PERKINELMERCETUS),CSD—L型超静台(上海净化设备厂),DY—A型电泳仪(上海生化工程研究所基巴斯公司),BF—300紫外线检测仪(四星公司),ALARM—1000型高速低温离心机(计田公司),37型雾化吸入器(ARI公司),扩增引物、逆转录酶、Taq酶及有关试剂购于上海试剂厂、上海基因公司、上海基康公司,②提取气管上皮细胞RNA:脱颈椎处死豚鼠,75%乙醇颈部皮肤消毒,剪开并固定皮肤,取出气管,刮净气管外膜,用生理盐水冲洗,置消毒平皿,携入超静台,剪开气管,加Trizol[8]液1ml,用Tip头刮取气管上皮,并吹打至无团块,移入1.5mlEP管中,室温放5min,加0.3ml氯仿,用力晃摇1min,室温放3min,低温离心12000r/min×15min,将无机相移入新EP管中,加0.5ml异丙醇,室温放5min,低温离心12000r/min×20min,去上清液,加1ml75%乙醇洗管,加1ml100%乙醇,放入冰箱—70℃保存 ...
2021/8/6 21:22:46
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通过逆转录—DNA聚合酶链反应(RT—PCR)技术检测豚鼠哮喘模型气管上皮内皮素—1(ET—1)mRˉNA表达,检测哮喘患者气管上皮内皮素—1(ET—1)和内皮素转换酶(ECE)mRNA表达,TRERMALCYCLER480型自动PCR仪(PERKINELMERCETUS),CSD—L型超静台(上海净化设备厂),DY—A型电泳仪(上海生化工程研究所基巴斯公司),BF—300紫外线检测仪(四星公司),ALARM—1000型高速低温离心机(计田公司),37型雾化吸入器(ARI公司),扩增引物、逆转录酶、Taq酶及有关试剂购于上海试剂厂、上海基因公司、上海基康公司,②提取气管上皮细胞RNA:脱颈椎处死豚鼠,75%乙醇颈部皮肤消毒,剪开并固定皮肤,取出气管,刮净气管外膜,用生理盐水冲洗,置消毒平皿,携入超静台,剪开气管,加Trizol[8]液1ml,用Tip头刮取气管上皮,并吹打至无团块,移入1.5mlEP管中,室温放5min,加0.3ml氯仿,用力晃摇1min,室温放3min,低温离心12000r/min×15min,将无机相移入新EP管中,加0.5ml异丙醇,室温放5min,低温离心12000r/min×20min,去上清液,加1ml75%乙醇洗管,加1ml100%乙醇,放入冰箱—70℃保存 ...
2021/8/6 21:22:46
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PCR、酶切证实Tum5基因克隆至逆转录病毒载体pLXSN,Tum5基因测序结果和原始序列相同,包装细胞,RTPCR证实转染后的PA317细胞上清液中存在携带人Tum5基因的病毒RNA,病毒滴度为2.05×104cfu/ml,重组体pLXSNTum5的构建与鉴定将Tum5基因片段与已进行相应酶切(EcoRⅠ+BamHⅠ)的pLXSN载体以1∶5摩尔比混合,加入T4DNA连接酶16℃过夜 ...
2021/8/10 17:45:47
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PCR、酶切证实Tum5基因克隆至逆转录病毒载体pLXSN,Tum5基因测序结果和原始序列相同,包装细胞,RTPCR证实转染后的PA317细胞上清液中存在携带人Tum5基因的病毒RNA,病毒滴度为2.05×104cfu/ml,重组体pLXSNTum5的构建与鉴定将Tum5基因片段与已进行相应酶切(EcoRⅠ+BamHⅠ)的pLXSN载体以1∶5摩尔比混合,加入T4DNA连接酶16℃过夜 ...
2021/8/10 17:45:47
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对转基因动物的制作方法及应用进行了综述,对其发展趋势进行展望,以促进动物转基因研究的开展,同时,该方法生产转基因动物的效率低,后代嵌合体比例高,尤其是大动物,受体需要量大,风险大,造成大型动物制备的成本高,极大地制约着转基因动物的产业化,kb,因是随机整合,故易引起插入突变,其LTRs可能干扰哺乳动物启动子,转基因动物可能是嵌合体 ...
2021/9/7 22:31:52
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resistance,MDR)是肿瘤治疗失败的重要原因.目前对MDR的研究主要集中于肿瘤细胞在化疗药物诱导下所产生的获得性耐药,对内源性耐药机制的研究则尚欠深入.而在临床治疗中,若预先了解肿瘤细胞的内源性耐药状况,不仅可以避免因使用MDR型药物而导致的获得性多药耐药,而且可以针对肿瘤的耐药特点使用逆转剂,提高化疗效果.我们通过免疫组化方法及RTPCR法检测P糖蛋白(Pglycoprotein,Pgp)及其编码基因MDR1(multidrugresistance1)在乳腺癌原发性耐药过程中的表达.
,μL,10×缓冲液5.0μL,25mmol/LMgCl28μL,2.5mmol/LdNTP4μL,5MU/LTaq酶0.25μL,20μmol/L上下游引物各0.5μL,并设βactin为内参,加DEPC去离子水至总体积50μL.引物序列如下:MDR1:上游5′GTTGCCATTGACTGAAAGAAC3′,下游5′ACAGGAGATAGGCTGGTTTGA3′,βactin:上游5′CCAAGGCCAACCGCGAGAAGATGAC3′,下游5′AGGGTACATGGTGGTGCCGCCAGA3′.反应条件:开始94℃5min充分变性,而后变性94℃45s,退火59℃50s,延伸72℃90s,30个循环,最后72℃延伸10min.取PCR产物10μL,加入含溴酚蓝的上样缓冲液1μL,于1.5g/L琼脂糖凝胶上电泳,紫外灯下照相并保存.凝胶照相后,于GelDoc2000凝胶图像分析系统进行扫描,用QuantityoneVersion4.0软件分析.测定产物条带的积分吸光度(integralabsorbance,IA)后计算相对吸光度(relativeabsorbance,RA),RA=IA目的片段/IAβactin,代表各产物的相对含量,即各目的片段mRNA在组织内稳态水平的高低. ...
2021/8/19 3:51:35
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resistance,MDR)是肿瘤治疗失败的重要原因.目前对MDR的研究主要集中于肿瘤细胞在化疗药物诱导下所产生的获得性耐药,对内源性耐药机制的研究则尚欠深入.而在临床治疗中,若预先了解肿瘤细胞的内源性耐药状况,不仅可以避免因使用MDR型药物而导致的获得性多药耐药,而且可以针对肿瘤的耐药特点使用逆转剂,提高化疗效果.我们通过免疫组化方法及RTPCR法检测P糖蛋白(Pglycoprotein,Pgp)及其编码基因MDR1(multidrugresistance1)在乳腺癌原发性耐药过程中的表达.
,μL,10×缓冲液5.0μL,25mmol/LMgCl28μL,2.5mmol/LdNTP4μL,5MU/LTaq酶0.25μL,20μmol/L上下游引物各0.5μL,并设βactin为内参,加DEPC去离子水至总体积50μL.引物序列如下:MDR1:上游5′GTTGCCATTGACTGAAAGAAC3′,下游5′ACAGGAGATAGGCTGGTTTGA3′,βactin:上游5′CCAAGGCCAACCGCGAGAAGATGAC3′,下游5′AGGGTACATGGTGGTGCCGCCAGA3′.反应条件:开始94℃5min充分变性,而后变性94℃45s,退火59℃50s,延伸72℃90s,30个循环,最后72℃延伸10min.取PCR产物10μL,加入含溴酚蓝的上样缓冲液1μL,于1.5g/L琼脂糖凝胶上电泳,紫外灯下照相并保存.凝胶照相后,于GelDoc2000凝胶图像分析系统进行扫描,用QuantityoneVersion4.0软件分析.测定产物条带的积分吸光度(integralabsorbance,IA)后计算相对吸光度(relativeabsorbance,RA),RA=IA目的片段/IAβactin,代表各产物的相对含量,即各目的片段mRNA在组织内稳态水平的高低. ...
2021/8/19 3:51:35
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杨科芳,代群,王凤鸣,张学光毕业论文,根据GenBank中已知BTLA基因的序列,针对其编码区分别设计用于逆转录扩增的上游引物BTA:5′ATGAAGACATTGCCTGCCATGCT3′,下游引物BTB:5′TTAACTCCTCACACATATGGATGC3′;以及进一步用于酶切构建重组载体的上游引物BTEcoRI:5′CTGGAATTCACCATGAAGACATTGCCTGCCATG3′,下游引物BTBamHI:5′CTCGGATCCTTA;ACTCCTCACACATATGGATGC3′,下划线部分分别为EcoRI和BamHI的酶切位点,引物由上海博亚(英骏)生物技术有限公司合成,marker;1:RTPCRproductofhumanBTLAgene(fulllengthbeing870bp,splicevariantbeing726bp,aspecificbandapproximatelybeing250bp).B.M:DL2000DNAmarker;1:LooplockedsupercoilpEGZTerm/BTLA(9527bp);2:DigestedproductofpEGZTerm/BTLA/EcoRI+BamHI(humanBTLAgenefulllengthbeing870bp,linearpEGZTermbeing8757bp).毕业论文 ...
2021/8/20 16:33:26
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杨科芳,代群,王凤鸣,张学光毕业论文,根据GenBank中已知BTLA基因的序列,针对其编码区分别设计用于逆转录扩增的上游引物BTA:5′ATGAAGACATTGCCTGCCATGCT3′,下游引物BTB:5′TTAACTCCTCACACATATGGATGC3′;以及进一步用于酶切构建重组载体的上游引物BTEcoRI:5′CTGGAATTCACCATGAAGACATTGCCTGCCATG3′,下游引物BTBamHI:5′CTCGGATCCTTA;ACTCCTCACACATATGGATGC3′,下划线部分分别为EcoRI和BamHI的酶切位点,引物由上海博亚(英骏)生物技术有限公司合成,marker;1:RTPCRproductofhumanBTLAgene(fulllengthbeing870bp,splicevariantbeing726bp,aspecificbandapproximatelybeing250bp).B.M:DL2000DNAmarker;1:LooplockedsupercoilpEGZTerm/BTLA(9527bp);2:DigestedproductofpEGZTerm/BTLA/EcoRI+BamHI(humanBTLAgenefulllengthbeing870bp,linearpEGZTermbeing8757bp).毕业论文 ...
2021/8/20 16:33:26
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通过118例临床观察,满18个月随访检测77例,75例全程检测为阴性,2例阳性,母婴阻断成功率97.4%,AIDSblockbetweenmotherandinfant,我县自2001年10月~2006年9月以来,共收治艾滋病产妇118例,年龄最小24岁,最大38岁,平均30岁 ...
2021/8/27 7:59:06
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wildtypeandmutantDNApolymeraseβexpressiononCHOcellsgrowth,bp缺失)DNA聚合酶β(polβ)基因对真核细胞生长特性的影响.方法:将表达人野生型和缺失型DNApolβ的中国仓鼠卵巢细胞株(CHO),用RTPCR方法鉴定野生型和缺失型DNApolβmRNA水平的表达,MTT法测生长曲线、流式细胞术测细胞周期.结果:转染野生型和突变型DNApolβ的CHO细胞株中,都有外源基因mRNA水平的表达;转染突变型(58bp缺失)polβ基因的细胞增殖速度和S期比例增高均高于未转染组细胞,差异有统计学意义(P0.05).而转染野生型polβ基因对细胞增殖速度和细胞周期无明显影响(P0.05).结论:高表达外源性野生型和突变型DNApolβ,对CHO细胞生长具有不同的影响.
,excisionrepaire,BER)是清除细胞内DNA损伤的主要途径,DNA聚合酶β(DNApolymeraseβ,DNApolβ)是BER过程中的关键酶.研究polβ基因的突变及功能异常在肿瘤发生发展中的作用,对进一步阐明肿瘤的分子发病机制,对肿瘤的基因治疗有重要意义.我们将不同类型的polβ的真核表达载体转染哺乳动物细胞,观察野生型和突变型polβ基因的表达对细胞生物学特性的影响如下. ...
2021/8/16 8:38:15
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赵光程,例,乳腺癌的PTEN表达与临床病理特征关系正常乳腺组织组和癌旁组织组PTEN表达阳性率明显高于乳腺癌组(P<0.05,P<0.01) ...
2021/8/8 23:45:53
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观察原发性高血压(EH)患者外周血单核细胞趋化因1(MCP1)基因表达,探讨其与EH的关系及意义,用酶联免疫吸附(ELISA)法测定62例EH患者和30例正常对照者外周血MCP1蛋白含量,用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法检测外周血单个核细胞中MCP1mRNA表达,逆转录聚合酶链反应酶联免疫吸附测定 ...
2021/8/13 1:30:36
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wildtypeandmutantDNApolymeraseβexpressiononCHOcellsgrowth,bp缺失)DNA聚合酶β(polβ)基因对真核细胞生长特性的影响.方法:将表达人野生型和缺失型DNApolβ的中国仓鼠卵巢细胞株(CHO),用RTPCR方法鉴定野生型和缺失型DNApolβmRNA水平的表达,MTT法测生长曲线、流式细胞术测细胞周期.结果:转染野生型和突变型DNApolβ的CHO细胞株中,都有外源基因mRNA水平的表达;转染突变型(58bp缺失)polβ基因的细胞增殖速度和S期比例增高均高于未转染组细胞,差异有统计学意义(P0.05).而转染野生型polβ基因对细胞增殖速度和细胞周期无明显影响(P0.05).结论:高表达外源性野生型和突变型DNApolβ,对CHO细胞生长具有不同的影响.
,excisionrepaire,BER)是清除细胞内DNA损伤的主要途径,DNA聚合酶β(DNApolymeraseβ,DNApolβ)是BER过程中的关键酶.研究polβ基因的突变及功能异常在肿瘤发生发展中的作用,对进一步阐明肿瘤的分子发病机制,对肿瘤的基因治疗有重要意义.我们将不同类型的polβ的真核表达载体转染哺乳动物细胞,观察野生型和突变型polβ基因的表达对细胞生物学特性的影响如下. ...
2021/8/16 8:38:15
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观察原发性高血压(EH)患者外周血单核细胞趋化因1(MCP1)基因表达,探讨其与EH的关系及意义,用酶联免疫吸附(ELISA)法测定62例EH患者和30例正常对照者外周血MCP1蛋白含量,用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法检测外周血单个核细胞中MCP1mRNA表达,逆转录聚合酶链反应酶联免疫吸附测定 ...
2021/8/13 1:30:36
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探讨环氧化酶—2(cyclooxygenase—2,COX—2)基因和蛋白在肾癌组织中的表达及与其分型之间的关系,在三种类型的肾癌中,混合型肾癌组织中COX—2表达最强,颗粒细胞癌的表达水平次之,肾透明细胞癌中表达最少(P0.01),而肾癌组织中其表达明显增加,且三种类型的肾癌中,混合型肾癌组织中表达最强,肾透明细胞癌中表达最少,而颗粒细胞癌的表达水平居中(结果如图1) ...
2021/8/11 2:47:17
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从人前列腺癌组织细胞中提取总RNA并逆转录成cDNA,PCR扩增cDNA片段,将cDNA克隆入载体pGEMT中构建TA克隆,对阳性克隆进行序列测定分析,的cDNA扩增反应体系:逆转录所得cDNA5μl,SOD2上、下游引物各0.5μl,10×缓冲液3μl,10mmol/L4×dNTP2μl,Taq酶0.5μl,去离子水补足30μl,将提取的质粒用双脱氧终止法PCR扩增并进行扩增产物的纯化,向反应体系中加入75%异丙醇80μl沉淀DNA,室温放置15min,12000r/min离心20min,小心移去上清,样品开口置90℃1min,加入25μlTSR95℃水浴5min,全部液体转入测序管,上机测序,使用PE377型DNA序列分析仪 ...
2021/8/17 8:22:27
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赵光程,例,乳腺癌的PTEN表达与临床病理特征关系正常乳腺组织组和癌旁组织组PTEN表达阳性率明显高于乳腺癌组(P<0.05,P<0.01) ...
2021/8/8 23:45:53
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窦晓兵钱颖,故本研究将含有GFP的逆转录病毒载体与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(vesecularstomatitisvirusGglyeoprotein,VSVG)共转染包装细胞系GP2293,收集培养液,经超高速离心浓缩,形成高滴度的病毒,感染Raw264.7细胞,以建立高效稳定转染的细胞系,病毒浓缩液转染Raw264.7细胞 ...
2021/8/17 1:52:26
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探讨环氧化酶—2(cyclooxygenase—2,COX—2)基因和蛋白在肾癌组织中的表达及与其分型之间的关系,在三种类型的肾癌中,混合型肾癌组织中COX—2表达最强,颗粒细胞癌的表达水平次之,肾透明细胞癌中表达最少(P0.01),而肾癌组织中其表达明显增加,且三种类型的肾癌中,混合型肾癌组织中表达最强,肾透明细胞癌中表达最少,而颗粒细胞癌的表达水平居中(结果如图1) ...
2021/8/11 2:47:17
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从人前列腺癌组织细胞中提取总RNA并逆转录成cDNA,PCR扩增cDNA片段,将cDNA克隆入载体pGEMT中构建TA克隆,对阳性克隆进行序列测定分析,的cDNA扩增反应体系:逆转录所得cDNA5μl,SOD2上、下游引物各0.5μl,10×缓冲液3μl,10mmol/L4×dNTP2μl,Taq酶0.5μl,去离子水补足30μl,将提取的质粒用双脱氧终止法PCR扩增并进行扩增产物的纯化,向反应体系中加入75%异丙醇80μl沉淀DNA,室温放置15min,12000r/min离心20min,小心移去上清,样品开口置90℃1min,加入25μlTSR95℃水浴5min,全部液体转入测序管,上机测序,使用PE377型DNA序列分析仪 ...
2021/8/17 8:22:27
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窦晓兵钱颖,故本研究将含有GFP的逆转录病毒载体与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(vesecularstomatitisvirusGglyeoprotein,VSVG)共转染包装细胞系GP2293,收集培养液,经超高速离心浓缩,形成高滴度的病毒,感染Raw264.7细胞,以建立高效稳定转染的细胞系,病毒浓缩液转染Raw264.7细胞 ...
2021/8/17 1:52:26
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高效抗逆转录病毒疗法毒副作用的中医治疗,骨代谢异常,可加淫羊藿、续断、补骨脂、杜仲、鹿角、山茱萸、狗脊、何首乌、威灵仙、茜草根、骨碎补、鹿衔草、五加皮、龟甲、桂枝、秦艽等补肾健骨,间断后重新启动相同的HAART仍能取得较好的病毒学和免疫学效果[3—4],同时,间断疗法有利于减轻HAART的不良反应,降低HAART用药费用,因此,虽然间断疗法目前尚有争议,但作为对HIV/AIDS患者的一种治疗策略仍然受到重视 ...
2021/8/18 11:30:25
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据报道,2015年,全球有3670万人感染HIV,110万人死于艾滋病,到目前为止,临床上除了仍然没有可以用于HIV治疗的口服纳米药物,常规的HIV儿童专用药物的效果也不明显,据世界卫生组织数据显示,一旦HIV药物耐受性增长,就会抵消抗逆转录病毒药物的效果 ...
2021/11/30 19:20:49
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RNA(+)和(或)抗—HCV(+)诊断为HCV感染(肝功能血清ALT、AST均正常),基金项目:广西医疗卫生科学研究基金(项目编号:Z2009014)作者单位:530023南宁市第四人民医院/南宁市传染病医院产科(庞俊潘莲花刘冬梅韦淑珍),感染科(黄绍标),艾滋病和丙型肝炎均为严重危害人类健康的全球性传染病,HIIV和HCV具有相同的传播途径,二者可以合并感染 ...
2021/9/6 21:30:24
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从扁桃体中提取总RNA,再进行RT—PCR,扩增MIP—3α成熟蛋白基因,并在5‘和3‘分别添加NcoI和EcoRI酶切位点,通过这两个酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli.DH5α,筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变获得MIP—3α天然蛋白表达载体pET32a(+).MIP—3α,SDS—PAGE分析其表达,Westernblot验证融合蛋白,RT(逆转录)采用Improm—ⅡRTSystem,模板为提取的总RNA,引物为Oligo(dT)15,逆转录酶为Improm—ⅡTMReveseTranscriptase,25℃退火5min,42℃逆转录1h,70℃灭活逆转录酶15min,—20℃保存备用,pET32a(+).MIP—3α在大肠杆菌中的表达以pET32a(+).MIP—3α质粒转化感受态大肠杆菌BL21trxB(DE3) ...
2021/8/10 6:31:06
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[目的]观察桃核承气汤对蓄血证大鼠血管基质金属蛋白酶2(MatrixMetalloproteinase2,MMP2)及金属蛋白酶2组织抑制剂(TissueInhibitorofMetalloproteinase2,TIMP2)基因表达的影响,探讨此方的作用机制,本文探讨桃核承气汤对蓄血证大鼠血管MMP2、TIMP2基因表达的影响,PCR检测MMP2、TIMP2的基因表达量:根据genebank上提供的MMP2,TIMP2基因的序列设计引物,引物序列见表1 ...
2021/8/14 19:58:15
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陈劭煜张旭韦淑萍张文成,μl反应体系内含有2μl25mmol/LMgCl2,2.2μl10×逆转录缓冲液,2μl10mmol/LdNTP混合物,0.5μlRNA酶抑制剂,15UAMV逆转录酶,0.5μgOligo(dT)引物,2.0μgRNA模板,用上述逆转录cDNA为模板扩增ZFP580,每50μl反应体系内含10×PCR缓冲液5μl,25mmol/LMgCl22μl,10mmol/LdNTP混合物2μl,TaqDNA聚合酶0.5μl(2.5U),40pmol/L引物,逆转录产物2μl,PCR反应条件如下:94℃3min;30×(94℃45s,59℃45s,72℃1min);72℃10min ...
2021/8/13 11:05:46
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MiniKit购自QIAGEN公司,FirstStrandcDNASynthesisKitforRTPCR(AMV)和ExpandTMHighFidelityPCRSystem购自Roche公司,QiaquickGelExtractionKit和PlasmidQiaprepSpinMiniprepKit购自QIAGEN公司,琼脂糖、pMD18T和限制性内切酶XbaⅠ、SmaⅠ、SphⅠ、EcoRV、HincⅡ、T4DNA连接酶购自TakaRaBiotech公司,JM109由本院林百欣医学实验中心提供,1μg、10倍逆转录反应缓冲液2μl、MgCl2100mmol、4种单核苷酸各20mmol、序列特异性引物75poml、RNA酶抑制剂50U、AMV逆转录酶20U,加无菌水使反应体积达20μl、42℃孵育1h进行逆转录反应,99℃5min使酶失活,cDNA片段,在一个50μl的反应体系中进行PCR,并对反应体系中cDNA、引物和MgCl2量、退火温度、退火时间、适伸时间以及反应的循环次数进行了优化,最终反应体系中包含10倍PCR反应缓冲液5μl、4种单核苷酸各10mmol、MgCl2100mmol、上下游引物各17poml、cDNA1μl、酶混合物2.6U,94℃孵育1min后,以94℃30s、62℃45s、72℃100s反应条件扩增30个循环 ...
2021/8/9 23:19:26
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从扁桃体中提取总RNA,再进行RT—PCR,扩增MIP—3α成熟蛋白基因,并在5‘和3‘分别添加NcoI和EcoRI酶切位点,通过这两个酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli.DH5α,筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变获得MIP—3α天然蛋白表达载体pET32a(+).MIP—3α,SDS—PAGE分析其表达,Westernblot验证融合蛋白,RT(逆转录)采用Improm—ⅡRTSystem,模板为提取的总RNA,引物为Oligo(dT)15,逆转录酶为Improm—ⅡTMReveseTranscriptase,25℃退火5min,42℃逆转录1h,70℃灭活逆转录酶15min,—20℃保存备用,pET32a(+).MIP—3α在大肠杆菌中的表达以pET32a(+).MIP—3α质粒转化感受态大肠杆菌BL21trxB(DE3) ...
2021/8/10 6:31:06
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林晓敏,本实验采用5/6肾切除法复制慢性肾功能衰竭大鼠模型,观察具有益气、化浊、活血之功的中药尿毒清胶囊及其主要拆方对模型大鼠肾功能、转化生长因子(TGFβ1)mRNA表达的影响,mRNA的表达实验主要分为RNA提取和RTPCR ...
2021/8/11 0:38:45
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mRNA在胃癌组织和胃癌前病变组织中的表达情况及及其临床意义,R735.2[文献标识码]A[文章编号]1673—9701(2015)26—0004—04ExpressionanditsclinicalsignificanceofRab27BmRNAingastriccancerandgastricpremalignantlesionsLIQier1YEGuoliang1GUOJunming21.DepartmentofGastroenterology,theAffiliatedHospitalofNingboUniversitySchoolofMedicine,Ningbo315020,China,我们应用实时定量逆转录—聚合酶链反应(quantitativereversetranscription—polymerasechainreaction,qRT—PCR)技术检测了Rab27BmRNA在胃癌组织和胃癌前病变组织中的表达量,并分析其与胃癌患者临床病理因素的关系,为Rab27BmRNA成为胃癌筛查和早期诊断的标志物提供了重要的实验室依据 ...
2021/8/4 16:56:56
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MiniKit购自QIAGEN公司,FirstStrandcDNASynthesisKitforRTPCR(AMV)和ExpandTMHighFidelityPCRSystem购自Roche公司,QiaquickGelExtractionKit和PlasmidQiaprepSpinMiniprepKit购自QIAGEN公司,琼脂糖、pMD18T和限制性内切酶XbaⅠ、SmaⅠ、SphⅠ、EcoRV、HincⅡ、T4DNA连接酶购自TakaRaBiotech公司,JM109由本院林百欣医学实验中心提供,1μg、10倍逆转录反应缓冲液2μl、MgCl2100mmol、4种单核苷酸各20mmol、序列特异性引物75poml、RNA酶抑制剂50U、AMV逆转录酶20U,加无菌水使反应体积达20μl、42℃孵育1h进行逆转录反应,99℃5min使酶失活,cDNA片段,在一个50μl的反应体系中进行PCR,并对反应体系中cDNA、引物和MgCl2量、退火温度、退火时间、适伸时间以及反应的循环次数进行了优化,最终反应体系中包含10倍PCR反应缓冲液5μl、4种单核苷酸各10mmol、MgCl2100mmol、上下游引物各17poml、cDNA1μl、酶混合物2.6U,94℃孵育1min后,以94℃30s、62℃45s、72℃100s反应条件扩增30个循环 ...
2021/8/9 23:19:26
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陈劭煜张旭韦淑萍张文成,μl反应体系内含有2μl25mmol/LMgCl2,2.2μl10×逆转录缓冲液,2μl10mmol/LdNTP混合物,0.5μlRNA酶抑制剂,15UAMV逆转录酶,0.5μgOligo(dT)引物,2.0μgRNA模板,用上述逆转录cDNA为模板扩增ZFP580,每50μl反应体系内含10×PCR缓冲液5μl,25mmol/LMgCl22μl,10mmol/LdNTP混合物2μl,TaqDNA聚合酶0.5μl(2.5U),40pmol/L引物,逆转录产物2μl,PCR反应条件如下:94℃3min;30×(94℃45s,59℃45s,72℃1min);72℃10min ...
2021/8/13 11:05:46
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近年来,随着该领域不断创新和研究,AIDS检测技术的简易、快速、灵敏性逐步提高,本文着重从免疫学、分子生物学、基因芯片、P24抗原等方面对目前检测技术发展的趋势作一综述,一、人免疫缺陷病毒基因组结构和特点AIDS病原体为免疫缺陷病毒(HIV),有HIV—1、HIV—2两类,综上所述,为提高AIDS防控效果,AIDS检测技术正朝着简洁、敏感、迅速、准确、自动化方向进展 ...
2021/8/4 22:28:37
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近年来,随着该领域不断创新和研究,AIDS检测技术的简易、快速、灵敏性逐步提高,本文着重从免疫学、分子生物学、基因芯片、P24抗原等方面对目前检测技术发展的趋势作一综述,一、人免疫缺陷病毒基因组结构和特点AIDS病原体为免疫缺陷病毒(HIV),有HIV—1、HIV—2两类,综上所述,为提高AIDS防控效果,AIDS检测技术正朝着简洁、敏感、迅速、准确、自动化方向进展 ...
2021/8/4 22:28:37
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mRNA在胃癌组织和胃癌前病变组织中的表达情况及及其临床意义,R735.2[文献标识码]A[文章编号]1673—9701(2015)26—0004—04ExpressionanditsclinicalsignificanceofRab27BmRNAingastriccancerandgastricpremalignantlesionsLIQier1YEGuoliang1GUOJunming21.DepartmentofGastroenterology,theAffiliatedHospitalofNingboUniversitySchoolofMedicine,Ningbo315020,China,我们应用实时定量逆转录—聚合酶链反应(quantitativereversetranscription—polymerasechainreaction,qRT—PCR)技术检测了Rab27BmRNA在胃癌组织和胃癌前病变组织中的表达量,并分析其与胃癌患者临床病理因素的关系,为Rab27BmRNA成为胃癌筛查和早期诊断的标志物提供了重要的实验室依据 ...
2021/8/4 16:56:56
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林晓敏,mRNA的表达;实验主要分为RNA提取和RTPCR,采用Trizol试剂盒抽提总RNA ...
2021/8/17 2:04:16
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[目的]观察桃核承气汤对蓄血证大鼠血管基质金属蛋白酶2(MatrixMetalloprotEinase2,MMP2)及金属蛋白酶2组织抑制剂(TissueInhibitorofMetalloprotEInase2,TIMP2)基因表达的影响,探讨此方的作用机制,本文探讨桃核承气汤对蓄血证大鼠血管MMP2、TIMP2基因表达的影响,PCR检测MMP2、TIMP2的基因表达量:根据genebank上提供的MMP2,TIMP2基因的序列设计引物,引物序列见表1 ...
2021/8/18 18:16:56
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林晓敏,本实验采用5/6肾切除法复制慢性肾功能衰竭大鼠模型,观察具有益气、化浊、活血之功的中药尿毒清胶囊及其主要拆方对模型大鼠肾功能、转化生长因子(TGFβ1)mRNA表达的影响,mRNA的表达实验主要分为RNA提取和RTPCR ...
2021/8/11 0:38:45
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[目的]观察桃核承气汤对蓄血证大鼠血管基质金属蛋白酶2(MatrixMetalloprotEinase2,MMP2)及金属蛋白酶2组织抑制剂(TissueInhibitorofMetalloprotEInase2,TIMP2)基因表达的影响,探讨此方的作用机制,本文探讨桃核承气汤对蓄血证大鼠血管MMP2、TIMP2基因表达的影响,PCR检测MMP2、TIMP2的基因表达量:根据genebank上提供的MMP2,TIMP2基因的序列设计引物,引物序列见表1 ...
2021/8/18 18:16:56
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林晓敏,mRNA的表达;实验主要分为RNA提取和RTPCR,采用Trizol试剂盒抽提总RNA ...
2021/8/17 2:04:16
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国内外研究绿茶提取物,特别是EGCG的抗肿瘤和逆转MDR作用,研究集中于逆转机制与MDR1或MRP1的关系,部分结果表明EGCG可通过抑止Pgp功能发挥逆转作用,而部分资料显示其逆转作用独立于Pgp和MRP2,体内实验较缺乏,逆转倍数=逆转前耐药细胞IC50/逆转后耐药细胞IC50,EGCG的培养液处理1h,换用相应含VCR培养液处理2h,PBS洗涤1遍,换为不含VCR,只含EGCG的培养液,培养至指定时间,收获细胞,同样方法检测VCR含量 ...
2021/8/13 16:24:36
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国内外研究绿茶提取物,特别是EGCG的抗肿瘤和逆转MDR作用,研究集中于逆转机制与MDR1或MRP1的关系,部分结果表明EGCG可通过抑止Pgp功能发挥逆转作用,而部分资料显示其逆转作用独立于Pgp和MRP2,体内实验较缺乏,逆转倍数=逆转前耐药细胞IC50/逆转后耐药细胞IC50,EGCG的培养液处理1h,换用相应含VCR培养液处理2h,PBS洗涤1遍,换为不含VCR,只含EGCG的培养液,培养至指定时间,收获细胞,同样方法检测VCR含量 ...
2021/8/13 16:24:36
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4.TNF—α基因转染胰腺癌细胞的5—FU治疗:TNF—α基因转染胰腺癌细胞后给予5—FU治疗的疗效分析,以未转染的胰腺癌细胞为对照,2.外源基因检测:未转染TNF—α基因的胰腺癌细胞中无明显TNF—α的mRNA,而转染后的胰腺癌克隆细胞中,电泳中有TNF—αmRNA的特异性条带波,证实外源性TNF—α经逆转录病毒载体转染,已有mRNA的表达,本研究结果显示,人胰腺癌细胞能被TNF—α基因转染,RT—PCR结果表明目的基因均有转录行为发生,且TNF—α基因转染的胰腺癌细胞增殖能力降低 ...
2021/7/10 8:59:29
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研究原发性肝细胞癌(HCC)组织CD105mRNA表达与根治术后早期复发的关系,mRNA表达水平明显高于中心处癌组织和对照组肝组织(P<0.01),中心处癌组织CD105mRNA表达水平明显高于对照组肝组织(P0.01),mRNA在组织血管内皮细胞的表达与术后早期复发的关系 ...
2021/7/6 14:22:48
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作者:郭晓兰,袁国华,周京国,唐中,刘宁涛,杨明辉,青玉凤,吴凤霞,朱道银,目的:构建端粒保护蛋白TPP1短发夹RNA表达载体,探讨抑制TPP1表达后对端粒DNA损伤及细胞增殖的影响.方法:体外构建端粒保护蛋白TPP1shRNA逆转录病毒表达载体shTPP101,shTPP102,与表达外源性TPP1的TPP1HA质粒共同转染293T细胞,WesternBlot检测shTPP1抑制外源性TPP1蛋白表达,而在shTPP1作用后的ATM—/—细胞中,端粒γH2AX和53BP1形成的TIF数量显著减少,出现5个TIF的细胞数量不足5%,与对照组细胞相比无显著性差异.结论:抑制TPP1表达后诱发端粒ATM依赖的DNA损伤反应,进而抑制细胞增殖,促进细胞衰老.论文网 ...
2021/8/27 10:32:07
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据估计,目前全球现存活4000万HIV/AIDS患者,而全球存活的HCV感染者有170万\[1—3\],在存活的HIV/AIDS患者中有约25%~33%的病例合并感染了HCV\[4,5\],而在美国估计约有100万的居民合并感染HIV与HCV两种病毒\[6\],2.1HCV感染对HIV感染自然病程的影响HCV感染对于HIV感染自然病程的影响情况目前尚不明确,早期的研究发现\[15,16\]HCV对于HIV的发展过程没有影响或者仅有极轻微的影响,尽管合并感染的病例死于肝脏相关疾病的比例较高,但是并未发现合并感染的病例进展为AIDS患者的几率较单纯HIV感染病例的几率高,王长双等\[42\]将有偿献血人群分为HIV/HCV合并感染组、HCV单纯感染组和HIV单纯感染组三组开展HIV感染对有偿献血人群HCV感染者预后的影响研究发现,HCV单纯感染组感染时间较合并感染组长,但合并感染组预后却相对较差,HIV感染不仅可促进肝功能异常,甚至可能加速进展到肝硬化阶段 ...
2021/8/9 10:16:57
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据估计,目前全球现存活4000万HIV/AIDS患者,而全球存活的HCV感染者有170万\[1—3\],在存活的HIV/AIDS患者中有约25%~33%的病例合并感染了HCV\[4,5\],而在美国估计约有100万的居民合并感染HIV与HCV两种病毒\[6\],2.1HCV感染对HIV感染自然病程的影响HCV感染对于HIV感染自然病程的影响情况目前尚不明确,早期的研究发现\[15,16\]HCV对于HIV的发展过程没有影响或者仅有极轻微的影响,尽管合并感染的病例死于肝脏相关疾病的比例较高,但是并未发现合并感染的病例进展为AIDS患者的几率较单纯HIV感染病例的几率高,王长双等\[42\]将有偿献血人群分为HIV/HCV合并感染组、HCV单纯感染组和HIV单纯感染组三组开展HIV感染对有偿献血人群HCV感染者预后的影响研究发现,HCV单纯感染组感染时间较合并感染组长,但合并感染组预后却相对较差,HIV感染不仅可促进肝功能异常,甚至可能加速进展到肝硬化阶段 ...
2021/8/9 10:16:57
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作者:鲍文,陈宝安,高峰,丁家华,许文林1,沈惠玲1,高冲,孙耘玉,程坚,王骏,赵刚,马燕代写论文,CyclosporineA,RaloxifeneandTheirCombinationontheReversionofMultidrugResistaceofK562/A02Line论文代写,rateofDNRonproliferationofK562/A02cellstreatedwithDNR,CsAandraloxifenefor48hours(略)论文网 ...
2021/7/8 10:54:19
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作者:鲍文,陈宝安,高峰,丁家华,许文林1,沈惠玲1,高冲,孙耘玉,程坚,王骏,赵刚,马燕,CyclosporineA,RaloxifeneandTheirCombinationontheReversionofMultidrugResistaceofK562/A02Line毕业论文,wordscyclosporineA;estrogen—receptorinhibitorraloxifeneK562/A02drugresistance毕业论文 ...
2021/8/25 0:43:47
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interferingRNA;stathmingene;pSUPEREGFPvector;Eca109cells,本研究应用含H1启动子的逆转录载体pSUPEREGFP构建了stathmin基因的siRNA表达载体pSUPERS,稳定转染Eca109细胞,以特异性沉默目的基因的表达,观察小干扰RNA(siRNA)对靶基因表达的抑制作用,探讨肿瘤基因治疗的新模式,1.2.3寡核苷酸与pSUPEREGFP载体的连接将合成的64nt正义和反义链分别溶于三蒸水中,终浓度为3μg/μl;各取1μl,加入48μl退火缓冲液,依次94℃4min,80℃4min,70℃10min,37℃20min,最终缓慢冷却至室温进行退火反应 ...
2021/8/22 16:06:46
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interferingRNA;stathmingene;pSUPEREGFPvector;Eca109cells,本研究应用含H1启动子的逆转录载体pSUPEREGFP构建了stathmin基因的siRNA表达载体pSUPERS,稳定转染Eca109细胞,以特异性沉默目的基因的表达,观察小干扰RNA(siRNA)对靶基因表达的抑制作用,探讨肿瘤基因治疗的新模式,1.2.3寡核苷酸与pSUPEREGFP载体的连接将合成的64nt正义和反义链分别溶于三蒸水中,终浓度为3μg/μl;各取1μl,加入48μl退火缓冲液,依次94℃4min,80℃4min,70℃10min,37℃20min,最终缓慢冷却至室温进行退火反应 ...
2021/8/22 16:06:46
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PNS,MCF—7/ADM+PNS,MCF—7/S+Ver,MCF—7/ADM+Ver组,取对数生长的MCF—7/S,MCF—7/ADM细胞悬液100μl分别接种于96孔培养板中,每孔细胞数均为105/孔,然后加入不同浓度的PNS溶液(先用DMSO溶解,然后用生理盐水配成10mmol/L的工作母液,使用时用DMEM培养液配成相应浓度应用液),使PNS浓度分别为0,10,100,500,1000μg/ml,加入Ver并使之浓度分别为0,0.1,1,5,10μg/ml,实验均设3个复孔,置于37℃,5%CO2培养箱中孵育48h后加入MTT20μl,作用4h后平板离心机1000r/min离心,弃去上清液,加入DMSO100μl,微量振荡10min,酶标仪检测波长570nm时OD值(吸光度),MCF—7/ADM耐药细胞的逆转作用实验分MCF—7/ADM+DOX,MCF—7/ADM+PNS(3个浓度)+DOX、MCF—7/ADM+Ver+DOX组,PNS取第一步筛选的无细胞毒性浓度分别为50,100,200μg/ml,每个浓度设3个复孔,Ver取1μg/ml(无细胞毒性,细胞存活率98%以上),设3个复孔,取数生长期的MCF—7/S和MCF—7/ADM细胞接种于六孔板中,其中1孔为阴性对照MCF—7/S,1孔为MCF—7/ADM阳性对照,1孔为MCF—7/ADM+Ver(5μg/ml),其余3孔待贴壁后分别加入终浓度为50,100,200μg/ml的PNS+MCF—7/ADM培养48h后,取灭菌后无Rnase的小离心管,采用Trlzol试剂提取各组总RNA,经AMV逆转录酶系统合成cDNA ...
2021/8/20 5:04:16
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shockresponse;endotoxins;interferoninducedprotein—10,小鼠自身免疫与炎症疾病相关基因微阵列结果显示,有多种炎症相关基因在两种小鼠中有差异性表达,其中包括干扰素诱导蛋白10(interferon—inducibleprotein10,IP—10),提示IP—10的表达可能受到HSR、HSF1的影响,RAW264.7巨噬细胞株,购自上海细胞中心;细胞培养箱由美国SHELLLAB生产;新生小牛血清购自杭州四季青生物工程有限公司;RPMI—1640培养基购自Gibco公司;大肠杆菌内毒素(O111B4,脂多糖,LPS)购自Sigma公司;Trizol试剂购自美国GIBCO公司;TaqDNAPolymerase、AMV逆转录酶(Takara)购自宝生物工程(大连)有限公司;PCR仪由英国Techgene生产;PCR引物甘油醛—3—磷酸脱氢酶(glyceraldehyde—3—phosphatedehydrogenase,GAPDH)和待测基因IP—10由上海博亚生物公司合成,见表1 ...
2021/8/17 6:42:26
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刘真,李武卫,目的探讨原发性高血压(EH)证型与外周血淋巴细胞过氧化物酶体增殖物激活受体信使核糖核酸(Peroxisomeproliferator—activatedreceptorγ,PPARγ)mRNA表达及颈动脉血管重构的关系,分离各组外周血淋巴细胞,采用逆转录—聚合酶链反应法(reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT—PCR)检测各组PPARγmRNA表达,应用彩色多普勒超声诊断仪测量颈总动脉内膜—中膜厚度 ...
2021/8/21 20:18:59
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探讨髓系细胞触发受体1(TREM1)在氧化型低密度脂蛋白胆固醇(oxLDL)诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞中的表达情况,呈对数生长的U937细胞(细胞密度1.0×109/L),加入终浓为100nmol/LPMA,孵育72h,使其由单核细胞分化为巨噬细胞样U937细胞,RTPCR法检测培养细胞中TREM1mRNA的表达按Trizol说明书提取培养细胞总RNA,按逆转录酶提供的说明书进行逆转录反应 ...
2021/8/17 18:25:46
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观察白黎芦醇对动脉粥样硬化(AS)模型大鼠主动脉粥样硬化段COX2mRNA表达的影响,mRNA,分离主动脉硬化段,留待RTPCR检测COX2mRNA表达 ...
2021/8/13 14:09:08
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方法:根据报道的小鼠resistin基因的全长mRNA序列为目的基因,即提取小鼠脂肪组织中的RNA,以RNA为模板,在逆转录酶的作用下,逆转录(RT)合成resistinDNA,再在TaqDNA聚合酶的作用下聚合酶链反应(PCR)扩增resistincDNA,将扩增PCR产物(resistincDNA)经纯化后与AT连接于pGEMT载体,重组质粒转化JM109感受态菌,蓝白斑筛选阳性菌落,摇菌、提取质粒,cDNA基因,为构建resistin基因打下基础,鉴定和保存重组质粒pGEMTreisitin重组质粒pGEMTreisitin:双酶切鉴定(内切酶购自NEB公司),反应体系如下:pGEMTreisitin(0.35μg/μl)5μl、EcoRI1μl、XbaⅠ1μl、10×NEBuffer2μl、10×BSA0.2μl加三蒸水至20μl,37℃水浴2hr紫外灯下观察结果 ...
2021/8/8 18:26:05
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定量检测Wnt1诱导分泌蛋白1(Wnt1inducedsecretedprotein1,WISP1)基因在人直肠癌及远端正常直肠组织中的表达,为进一步研究该基因功能提供线索,Wnt1inducedsecretedprotein1inrectalcanceranditsclinicalsignificance,Pennica等[2]研究表明Wnt1诱导分泌蛋白1(Wnt1inducedsecretedprotein1,WISP1)是Wnt1信号通路的下游靶基因之一 ...
2021/8/16 14:35:16
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Ⅰ组DO前CD+4T淋巴细胞、CD+4T淋巴细胞百分率指标最低,经12个月治疗后CD+4T淋巴细胞、CD+4T淋巴细胞百分率指标增加最为明显,CD+4T淋巴细胞强效抗逆转录病毒治疗流式细胞技术,AIDSCD4+TlymphocyteHighlyactiveanti—retro—virustreatmentFCM ...
2021/8/13 19:33:45
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shockresponse;endotoxins;interferoninducedprotein—10,小鼠自身免疫与炎症疾病相关基因微阵列结果显示,有多种炎症相关基因在两种小鼠中有差异性表达,其中包括干扰素诱导蛋白10(interferon—inducibleprotein10,IP—10),提示IP—10的表达可能受到HSR、HSF1的影响,RAW264.7巨噬细胞株,购自上海细胞中心;细胞培养箱由美国SHELLLAB生产;新生小牛血清购自杭州四季青生物工程有限公司;RPMI—1640培养基购自Gibco公司;大肠杆菌内毒素(O111B4,脂多糖,LPS)购自Sigma公司;Trizol试剂购自美国GIBCO公司;TaqDNAPolymerase、AMV逆转录酶(Takara)购自宝生物工程(大连)有限公司;PCR仪由英国Techgene生产;PCR引物甘油醛—3—磷酸脱氢酶(glyceraldehyde—3—phosphatedehydrogenase,GAPDH)和待测基因IP—10由上海博亚生物公司合成,见表1 ...
2021/8/17 6:42:26
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Ⅰ组DO前CD+4T淋巴细胞、CD+4T淋巴细胞百分率指标最低,经12个月治疗后CD+4T淋巴细胞、CD+4T淋巴细胞百分率指标增加最为明显,CD+4T淋巴细胞强效抗逆转录病毒治疗流式细胞技术,AIDSCD4+TlymphocyteHighlyactiveanti—retro—virustreatmentFCM ...
2021/8/13 19:33:45
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expressioninpulmonaryadenocarcinoma,为探讨HO—1在人肺癌组织中的表达状况,我们采用RT—PCR方法检测27例肺腺癌及正常组织中HO—1mRNA的表达情况,结果报告如下,β—actin内参照引物,由北京奥科生物技术有限责任公司合成,上游引物:5’—TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA—3’,下游引物:5’—TCAGGAGGAGCAATGATCTTG—3’,扩增的目的片段长度为302bp ...
2021/8/8 12:49:26
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方法:根据报道的小鼠resistin基因的全长mRNA序列为目的基因,即提取小鼠脂肪组织中的RNA,以RNA为模板,在逆转录酶的作用下,逆转录(RT)合成resistinDNA,再在TaqDNA聚合酶的作用下聚合酶链反应(PCR)扩增resistincDNA,将扩增PCR产物(resistincDNA)经纯化后与AT连接于pGEMT载体,重组质粒转化JM109感受态菌,蓝白斑筛选阳性菌落,摇菌、提取质粒,cDNA基因,为构建resistin基因打下基础,鉴定和保存重组质粒pGEMTreisitin重组质粒pGEMTreisitin:双酶切鉴定(内切酶购自NEB公司),反应体系如下:pGEMTreisitin(0.35μg/μl)5μl、EcoRI1μl、XbaⅠ1μl、10×NEBuffer2μl、10×BSA0.2μl加三蒸水至20μl,37℃水浴2hr紫外灯下观察结果 ...
2021/8/8 18:26:05
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观察白黎芦醇对动脉粥样硬化(AS)模型大鼠主动脉粥样硬化段COX2mRNA表达的影响,mRNA,分离主动脉硬化段,留待RTPCR检测COX2mRNA表达 ...
2021/8/13 14:09:08
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探讨髓系细胞触发受体1(TREM1)在氧化型低密度脂蛋白胆固醇(oxLDL)诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞中的表达情况,呈对数生长的U937细胞(细胞密度1.0×109/L),加入终浓为100nmol/LPMA,孵育72h,使其由单核细胞分化为巨噬细胞样U937细胞,RTPCR法检测培养细胞中TREM1mRNA的表达按Trizol说明书提取培养细胞总RNA,按逆转录酶提供的说明书进行逆转录反应 ...
2021/8/17 18:25:46
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定量检测Wnt1诱导分泌蛋白1(Wnt1inducedsecretedprotein1,WISP1)基因在人直肠癌及远端正常直肠组织中的表达,为进一步研究该基因功能提供线索,Wnt1inducedsecretedprotein1inrectalcanceranditsclinicalsignificance,Pennica等[2]研究表明Wnt1诱导分泌蛋白1(Wnt1inducedsecretedprotein1,WISP1)是Wnt1信号通路的下游靶基因之一 ...
2021/8/16 14:35:16
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作者:曹飞麟,朱敏,谢伯剑,甘梅富,潘印,徐东,周申康,毕铁男,mRNA分别在87.50%和83.33%乳腺癌组织中表达,而仅在16.67%和31.25%癌旁组织中表达,癌组织与癌旁组织COX—2mRNA和VEGFmRNA的表达差异有显著意义,Cyclooxygenase—2andVEGFinBreastCancerandItsSignificance ...
2021/8/7 20:51:06
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expressioninpulmonaryadenocarcinoma,为探讨HO—1在人肺癌组织中的表达状况,我们采用RT—PCR方法检测27例肺腺癌及正常组织中HO—1mRNA的表达情况,结果报告如下,β—actin内参照引物,由北京奥科生物技术有限责任公司合成,上游引物:5’—TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA—3’,下游引物:5’—TCAGGAGGAGCAATGATCTTG—3’,扩增的目的片段长度为302bp ...
2021/8/8 12:49:26
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作者:曹飞麟,朱敏,谢伯剑,甘梅富,潘印,徐东,周申康,毕铁男,mRNA分别在87.50%和83.33%乳腺癌组织中表达,而仅在16.67%和31.25%癌旁组织中表达,癌组织与癌旁组织COX—2mRNA和VEGFmRNA的表达差异有显著意义,Cyclooxygenase—2andVEGFinBreastCancerandItsSignificance ...
2021/8/7 20:51:06
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receptor,MCR)基因家族有5个成员,MC1R、MC2R、MC3R、MC4R和MC5R,采用双标准曲线和Taqman实时荧光定量PCR对黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊和南江黄羊5个山羊品种的心脏、肝脏、肺脏、肾脏、背最长肌、半膜肌和皮下脂肪中MC3R基因转录水平进行检测,并分析MC3R基因在不同品种及组织间的表达差异,为深入研究山羊MC3R的作用部位、特点及功能提供理论参考,L,EnzymeMix1.0L,RTPrimer1.0L,混匀,42℃逆转录18min,然后98℃灭活5min,—20℃保存备用 ...
2021/9/1 2:44:45
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摘要目的:探讨DNA错配修复基因hMLH1在胃癌组织中的表达水平及其临床意义,
,结果:胃癌组织、癌旁胃炎组织、慢性胃炎组织中hMLH1mRNA的相对含量分别是7.23+11.91,3 ...
2021/12/31 15:02:10
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探讨盐酸戊乙奎醚(长托宁)对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的防治作用和可能机制,结论长托宁可能通过抑制炎性细胞因子的释放及氧自由基的生成减轻大鼠肝脏缺血,再灌注损伤,本文为全文原貌未安装PDF浏览器用户请先下载安装原版全文 ...
2022/1/12 3:48:50
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遗传信息指生物为复制与自己相同的东西、由亲代传递给子代、或各细胞每次分裂时由细胞传递给细胞的信息,那么你对遗传信息了解多少呢?以下是由小编整理关于什么是遗传信息的内容,希望大家喜欢,生物体遗传信息的传递类型
,看过遗传信息传递类型的人还看了: ...
2021/12/24 21:00:19
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慢性乙型肝炎是因乙肝病毒持续感染并复制而导致的疾病,可发展成肝硬化甚至肝癌,严重危害人类生命健康,恩替卡韦和替比夫定是目前抗病毒疗效最强的两种核苷类似物,本文将探讨替比夫定和恩替卡韦对慢性乙肝患者的疗效差异 ...
2021/12/24 4:55:59
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[摘要]目的探讨CD151对大鼠心肌梗死模型血流动力学的影响及其分子学机制,结论CD151基因的导入能够改善心室功能,其分子机制与PI3K/Akt信号通路的激活有关,未安装PDF浏览器用户请先下载安装原版全文 ...
2021/12/26 9:39:20
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将第2代的hMSCs接种于6孔板,从包装细胞PA317收集的病毒液,过滤后,将病毒液加至hMSCs,间隔24h后再次感染病毒,Polybrene的终浓度为8μg/ml,tag抗体对转染后的细胞进行免疫荧光测定转染和未转染的hMSCs细胞铺细胞爬片,4%多聚甲醛固定,血清封闭,加一抗(抗人cmyctag抗体),4℃孵育过夜,加FITC标记的二抗,避光孵育30min,PI染核,应用RTPCR检测SSH1L的表达情况提取转染和未转染hMSCs细胞的总RNA,测定纯度及含量,反转录合成cDNA,应用SSH1L和GAPDH引物进行PCR扩增 ...
2021/8/15 2:57:26
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转基因技术作为生命的前沿技术之一,已经逐渐走入了人们的生活,通过对转基因技术的介绍,阐述了该技术的利弊关系,指出只有通过正确的引导和规范管理,才能很好地利用该技术,使它为人类服务,因此,转基因技术是对传统技术的发展和补充 ...
2021/8/14 21:54:25
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观察灵芝多糖(GLB)对前列腺素E2(PGE2)抑制小鼠脾细胞增殖及IL1α、IL2mRNA表达的拮抗作用,灵芝多糖可部分拮抗前列腺素E2对小鼠脾细胞增殖及IL1α和IL2mRNA表达的抑制作用,观察了灵芝多糖对PGE2抑制小鼠脾细胞增殖及IL1α和IL2mRNA表达的影响,探讨灵芝多糖的抗肿瘤免疫学机理 ...
2021/8/28 17:12:05
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ProteinExpressionsbetweenNormalGastricMucousMembraneandGastricCarcinomaTissue,obviously(P0.01).Thepositiveexpressionrateofskp2proteinwas33.33%ingastriccarcinoma,whilethatwas10.71%innormalgastrictissue(P0.05).Thepositiveexpressionrateofskp2increasedwithlowerdifferentiation(P0.05).Therewasanegativecorrelationbetweentheexpressionsofskp2andp27kip1ingastriccarcinoma(P0.01).[Conclusions]Theexaminationofp27kip1andskp2proteinishelpfultoclinicaldiagnosisandprognosticevaluationingastriccancer.
,mRNA在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达 ...
2021/8/16 7:11:06
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将第2代的hMSCs接种于6孔板,从包装细胞PA317收集的病毒液,过滤后,将病毒液加至hMSCs,间隔24h后再次感染病毒,Polybrene的终浓度为8μg/ml,tag抗体对转染后的细胞进行免疫荧光测定转染和未转染的hMSCs细胞铺细胞爬片,4%多聚甲醛固定,血清封闭,加一抗(抗人cmyctag抗体),4℃孵育过夜,加FITC标记的二抗,避光孵育30min,PI染核,应用RTPCR检测SSH1L的表达情况提取转染和未转染hMSCs细胞的总RNA,测定纯度及含量,反转录合成cDNA,应用SSH1L和GAPDH引物进行PCR扩增 ...
2021/8/15 2:57:26
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ProteinExpressionsbetweenNormalGastricMucousMembraneandGastricCarcinomaTissue,obviously(P0.01).Thepositiveexpressionrateofskp2proteinwas33.33%ingastriccarcinoma,whilethatwas10.71%innormalgastrictissue(P0.05).Thepositiveexpressionrateofskp2increasedwithlowerdifferentiation(P0.05).Therewasanegativecorrelationbetweentheexpressionsofskp2andp27kip1ingastriccarcinoma(P0.01).[Conclusions]Theexaminationofp27kip1andskp2proteinishelpfultoclinicaldiagnosisandprognosticevaluationingastriccancer.
,mRNA在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达 ...
2021/8/16 7:11:06
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—80℃超低温冰箱为日本Sanyo公司产品,TGL-16B型台式高速离心机为上海安亭科学仪器厂制造,RT—PCR试剂盒(购自Progoma公司)由下列成分组成:GIT变性液(10ml),2mol/LNaOAc(pH4.0)(1ml),MMLV逆转录酶200U/μl(20μl),逆转录反应体系,TaqDNA聚合酶1U/μl(40μl),PCR反应体系,去RNase水,逆转录反应(RT)在经DEPC处理过的0.5mlEppendorf管中加入逆转录反应体系:细胞总RNA1μg,MMLV—RT(Moloneymurineleukemiavirusreversetranscriptase,MMLVRT)1μl,dNTP1μl,DTT2μl,buffer4μl,下游引物1μl,去RNase水10μl,μlRT产物的0.5mlEppendorf管中加入PCR反应体系:dNTP1μl,buffer10μl,MgCl28μl,Taq酶2μl,上游引物P11μl,超纯水58μl ...
2021/8/20 0:54:55
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X射线照射可诱导鼻咽癌细胞hMSH2的表达,有助于放射损伤后肿瘤细胞DNA修复,这可能是肿瘤放疗敏感性降低的原因之一,从基因bank查出hMSH2和βactin的引物序列,hMSH2:5′GTCGGCTTCGTGCGCTTCTTT3’,5′TCTCTGGCCATCAACTGCGGA3’,扩增产物429bp,免疫细胞化学检测hMSH2蛋白的表达取两组细胞涂片,参照试剂盒(Zymed公司)说明书,进行链酶亲和素过氧化物酶(streptavidinperoxidase,SP)法免疫细胞化学染色 ...
2021/8/20 23:39:54
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xylostellaL)属鳞翅目(Lepidoptera)菜蛾科(Plutellidae),其分布范围广,繁殖能力强,主要取食十字花科植物,严重危害蔬菜生产[1,2],本研究克隆了小菜蛾的Pxp38基因,根据其基因序列推导出蛋白质一级结构,分析预测了该蛋白质的结构域,并研究了该基因与家蚕Bmp38基因、酿酒酵母ScHOG1基因、人类Homosapiensp38基因之间的同源性,为下一步深入研究Pxp38基因的功能奠定了基础,小菜蛾基因组数据库DBM—DB的网址是开题报告/html/lunwenzhidao/kaitibaogao/2结果与分析2.1Pxp38基因ORF的获得利用引物Pxp38—F和Pxp38—R克隆Pxp38基因的ORF片段,结果如图1所示,实验组得到了大小约1kb的单一DNA条带,对照组只得到了非特异性杂带,说明成功获得了Pxp38基因的ORF片段 ...
2021/8/16 3:06:15
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immunodeficiencysyndrome);HIV(humanimmunodeficiencyvirus;therapy;pathogenesis,属逆转录病毒科,由核心和包膜两部分组成,2~4周后,由于病毒大量复制导致CD4细胞急剧下降,可出现急性病毒感染症状,表现为发热、淋巴腺炎、咽喉痛、关节痛、腹泻等,持续1~2周后自行缓解 ...
2021/8/16 5:53:56
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对人胃癌AGS细胞侵袭性的影响,CXCL12在体外可增加人胃癌AGS细胞的体外侵袭性,buffer4μl,dNTP10mmol,RNase20U,MMLV100U,OligodT20pmol,RNA1μg ...
2021/8/12 14:32:17
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MDM2geneinchildhoodacuteleukemia,Li—zhen,WUXiang—qin,etal.DepartmentofPediatrics,TheFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China,5min,冰浴冷却,离心混匀,加下列反应物:5×缓冲液4.0μl,dNTPs(10mmol/L)2.0μl,RNasin1.0μl,混匀,37℃5min,然后加入M—MuLV逆转录酶(200u/μl)1.0μl,42℃60min,70℃10min,冰浴冷却终止反应 ...
2021/8/13 15:23:56
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急性病序列分析DNA福州,30s→52℃40s→72℃40s,扩增40个循环,3,4:人类偏肺病毒(HMPV). ...
2021/8/18 16:31:46
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结果:MMP—2在宫颈癌组织、正常宫颈组织及宫颈良性病变组织中的表达率分别为64.58%、37.50%、31.25%,宫颈癌与正常宫颈组织(P=0.012)、宫颈癌与宫颈良性病变组织(P=0.031)间的MMP—2表达率差异有统计学意义,而正常宫颈组织与宫颈良性病变组织之间的MMP—2表达率差异无统计学意义(P=0.091),结论:MMP—2在宫颈癌中的表达率明显高于正常宫颈组织及宫颈良性病变组织MMP—2与宫颈癌临床分期密切相关,临床分期越晚,其肿瘤组织中MMP—2的表达率越高,2.1MMP—2在宫颈癌、正常宫颈组织及宫颈良性病变组织中的表达MMP—2在宫颈癌组织中的表达率为64.58%,而在正常宫颈组织和宫颈良性病变组织中的表达率分别为37.50%、31.25% ...
2021/8/14 11:05:16
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WeisuGranule;Curativeeffect;PS2;ITF消化性溃疡是临床常见病、多发病,其病因与发病机制目前尚未完全阐明,目前较公认的是由于致溃疡攻击因子与胃黏膜保护因子失去平衡,攻击因子过强或保护因子减弱而形成[1],对照组中Hp阳性者加用阿莫西林胶囊,0.5g/次,4次/d,甲硝唑片,0.2g/次,4次/d,用药7d,联用胃苏颗粒治疗组在常规疗法的基础上给予胃苏颗粒,9g/次口服,3次/d,维持治疗时常规疗法组用雷尼替丁,治疗组用健胃愈疡颗粒,共维持治疗8周 ...
2021/8/9 15:12:15
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—80℃超低温冰箱为日本Sanyo公司产品,TGL-16B型台式高速离心机为上海安亭科学仪器厂制造,RT—PCR试剂盒(购自Progoma公司)由下列成分组成:GIT变性液(10ml),2mol/LNaOAc(pH4.0)(1ml),MMLV逆转录酶200U/μl(20μl),逆转录反应体系,TaqDNA聚合酶1U/μl(40μl),PCR反应体系,去RNase水,逆转录反应(RT)在经DEPC处理过的0.5mlEppendorf管中加入逆转录反应体系:细胞总RNA1μg,MMLV—RT(Moloneymurineleukemiavirusreversetranscriptase,MMLVRT)1μl,dNTP1μl,DTT2μl,buffer4μl,下游引物1μl,去RNase水10μl,μlRT产物的0.5mlEppendorf管中加入PCR反应体系:dNTP1μl,buffer10μl,MgCl28μl,Taq酶2μl,上游引物P11μl,超纯水58μl ...
2021/8/20 0:54:55
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X射线照射可诱导鼻咽癌细胞hMSH2的表达,有助于放射损伤后肿瘤细胞DNA修复,这可能是肿瘤放疗敏感性降低的原因之一,从基因bank查出hMSH2和βactin的引物序列,hMSH2:5′GTCGGCTTCGTGCGCTTCTTT3’,5′TCTCTGGCCATCAACTGCGGA3’,扩增产物429bp,免疫细胞化学检测hMSH2蛋白的表达取两组细胞涂片,参照试剂盒(Zymed公司)说明书,进行链酶亲和素过氧化物酶(streptavidinperoxidase,SP)法免疫细胞化学染色 ...
2021/8/20 23:39:54
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mRNA联合检测诊断前列腺癌(PCa)的临床应用及意义,mRNA与临床分期、内分泌治疗有关(P<005),而与年龄、Gleason评分无关(P<005),mRNA联合检测是一种早期发现PCa微转移,判断其临床变化过程、分期、预计复发和评价疗效的方法 ...
2021/8/14 3:22:37
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WeisuGranule;Curativeeffect;PS2;ITF消化性溃疡是临床常见病、多发病,其病因与发病机制目前尚未完全阐明,目前较公认的是由于致溃疡攻击因子与胃黏膜保护因子失去平衡,攻击因子过强或保护因子减弱而形成[1],对照组中Hp阳性者加用阿莫西林胶囊,0.5g/次,4次/d,甲硝唑片,0.2g/次,4次/d,用药7d,联用胃苏颗粒治疗组在常规疗法的基础上给予胃苏颗粒,9g/次口服,3次/d,维持治疗时常规疗法组用雷尼替丁,治疗组用健胃愈疡颗粒,共维持治疗8周 ...
2021/8/9 15:12:15
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结果:MMP—2在宫颈癌组织、正常宫颈组织及宫颈良性病变组织中的表达率分别为64.58%、37.50%、31.25%,宫颈癌与正常宫颈组织(P=0.012)、宫颈癌与宫颈良性病变组织(P=0.031)间的MMP—2表达率差异有统计学意义,而正常宫颈组织与宫颈良性病变组织之间的MMP—2表达率差异无统计学意义(P=0.091),结论:MMP—2在宫颈癌中的表达率明显高于正常宫颈组织及宫颈良性病变组织MMP—2与宫颈癌临床分期密切相关,临床分期越晚,其肿瘤组织中MMP—2的表达率越高,2.1MMP—2在宫颈癌、正常宫颈组织及宫颈良性病变组织中的表达MMP—2在宫颈癌组织中的表达率为64.58%,而在正常宫颈组织和宫颈良性病变组织中的表达率分别为37.50%、31.25% ...
2021/8/14 11:05:16
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immunodeficiencysyndrome);HIV(humanimmunodeficiencyvirus;therapy;pathogenesis,属逆转录病毒科,由核心和包膜两部分组成,2~4周后,由于病毒大量复制导致CD4细胞急剧下降,可出现急性病毒感染症状,表现为发热、淋巴腺炎、咽喉痛、关节痛、腹泻等,持续1~2周后自行缓解 ...
2021/8/16 5:53:56
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对人胃癌AGS细胞侵袭性的影响,CXCL12在体外可增加人胃癌AGS细胞的体外侵袭性,buffer4μl,dNTP10mmol,RNase20U,MMLV100U,OligodT20pmol,RNA1μg ...
2021/8/12 14:32:17
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急性病序列分析DNA福州,30s→52℃40s→72℃40s,扩增40个循环,3,4:人类偏肺病毒(HMPV). ...
2021/8/18 16:31:46
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MDM2geneinchildhoodacuteleukemia,Li—zhen,WUXiang—qin,etal.DepartmentofPediatrics,TheFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China,5min,冰浴冷却,离心混匀,加下列反应物:5×缓冲液4.0μl,dNTPs(10mmol/L)2.0μl,RNasin1.0μl,混匀,37℃5min,然后加入M—MuLV逆转录酶(200u/μl)1.0μl,42℃60min,70℃10min,冰浴冷却终止反应 ...
2021/8/13 15:23:56
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20;逆转录聚合酶链式反应ExpressionandSignificanceofEGFRandCK—20inOvarianCarcinomaZOUZhong—xiang,XUJie,SHAXiu—min,etal.DepartmentofObstetricsandGynecology,YantaiCityLaiyangCentralHospital,Laiyang265200,China【Abstract,反应体系:dNTPMixture1ul,TemplateRNA1μg,RNaseFreedH2O至10ul,65℃孵育5min后置于冰上,加入5×PrimeScriptBuffer4μl,RNaseInhibitor0.5μl,PrimeScriptRTase0.5ul,RNaseFreedH2O5ul,30℃10min,42℃20min,95℃5min后置于冰上,mRNA在不同卵巢组织中表达的电泳结果M:DNAMarker;1~5:正常卵巢、卵巢良性肿瘤和癌中GAPDHmRNA的表达;6~7:EGFRmRNA在卵巢癌中的表达;8~9:EGFRmRNA在卵巢良性肿瘤中的表达;10:正常卵巢组织中EGFRmRNA的表达;11:阴性对照(262bp处为EGFRmRNA,146bp处为GAPDHmRNA)图2CK20mRNA在组织中表达的电泳结果M:DNAMarker;1~3:卵巢癌组织中CK20及GAPDHmRNA的表达;4~5:卵巢良性肿瘤组织中CK20及GAPDHmRNA的表达;6:正常卵巢组织中CK20及GAPDHmRNA的表达;7:阴性对照(370bp处为CK20mRNA,146bp处为GAPDHmRNA) ...
2021/8/9 0:31:26
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20;逆转录聚合酶链式反应ExpressionandSignificanceofEGFRandCK—20inOvarianCarcinomaZOUZhong—xiang,XUJie,SHAXiu—min,etal.DepartmentofObstetricsandGynecology,YantaiCityLaiyangCentralHospital,Laiyang265200,China【Abstract,反应体系:dNTPMixture1ul,TemplateRNA1μg,RNaseFreedH2O至10ul,65℃孵育5min后置于冰上,加入5×PrimeScriptBuffer4μl,RNaseInhibitor0.5μl,PrimeScriptRTase0.5ul,RNaseFreedH2O5ul,30℃10min,42℃20min,95℃5min后置于冰上,mRNA在不同卵巢组织中表达的电泳结果M:DNAMarker;1~5:正常卵巢、卵巢良性肿瘤和癌中GAPDHmRNA的表达;6~7:EGFRmRNA在卵巢癌中的表达;8~9:EGFRmRNA在卵巢良性肿瘤中的表达;10:正常卵巢组织中EGFRmRNA的表达;11:阴性对照(262bp处为EGFRmRNA,146bp处为GAPDHmRNA)图2CK20mRNA在组织中表达的电泳结果M:DNAMarker;1~3:卵巢癌组织中CK20及GAPDHmRNA的表达;4~5:卵巢良性肿瘤组织中CK20及GAPDHmRNA的表达;6:正常卵巢组织中CK20及GAPDHmRNA的表达;7:阴性对照(370bp处为CK20mRNA,146bp处为GAPDHmRNA) ...
2021/8/9 0:31:26
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37例原发性肺癌中10例DMBT1表达正常(27.03%,10/37),有27例DMBT1表达低下或完全无表达(72.97%,27/37);DMBT1的表达与原发性肺癌的病理类型、TNM分期、吸烟史等均无明显相关(P>0.05),但与肺癌组织分化程度及有无淋巴结和(或)远处转移有相关性(P<0.01),DMBT1GeneinPrimaryLungCancer,lungcancer;DMBT1geneexpression;RTPCR ...
2021/8/16 13:49:54
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结果:34例肝细胞性肝癌患者与15例单纯肝硬化患者相比,肝癌组织中IFNγ(Th1)的表达强度、阳性表达频度较对照组明显降低,分别为0.92±0.36(18/34,53.9%)和1.63±0.64(12/15,80.0%)(P<0.01),betweenimmunoregulatorycytokinesandintrahepaticmetastasisandrecurrenceinprimaryhepatocellularcarcinoma,buffer),TaqDNA聚合酶1U/μl(40μl),PCR反应体系(PCRreactionbuffer),去Rnase水 ...
2021/8/20 6:18:36
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mRNA联合检测诊断前列腺癌(PCa)的临床应用及意义,mRNA与临床分期、内分泌治疗有关(P<005),而与年龄、Gleason评分无关(P<005),mRNA联合检测是一种早期发现PCa微转移,判断其临床变化过程、分期、预计复发和评价疗效的方法 ...
2021/8/14 3:22:37
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结果:34例肝细胞性肝癌患者与15例单纯肝硬化患者相比,肝癌组织中IFNγ(Th1)的表达强度、阳性表达频度较对照组明显降低,分别为0.92±0.36(18/34,53.9%)和1.63±0.64(12/15,80.0%)(P<0.01),betweenimmunoregulatorycytokinesandintrahepaticmetastasisandrecurrenceinprimaryhepatocellularcarcinoma,buffer),TaqDNA聚合酶1U/μl(40μl),PCR反应体系(PCRreactionbuffer),去Rnase水 ...
2021/8/20 6:18:36
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高中生物基因习题
,高中生物基因习题答案
,—A—T,因此鸟嘌呤G=146%27% ...
2022/2/11 6:01:50
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1.1试验材料人红白血病敏感细胞株K562及多药耐药细胞株K562/ADM均购自中国医学科学院天津血液学研究所,2.1shRNA抑制了P—gp泵功能我们总共检测了48个pGenSil—1/MDR—A转染的克隆,68个pGenSil—1/MDR—B转染的克隆及10个空pGenSil—1质粒转染克隆的P—gp泵活性,本试验所应用的两条shRNA显示了不同的RNAi效果,pGenSil—1/MDR—B对K562/ADM细胞的MDR1基因具有良好的基因沉默效果,甚至有两个克隆显示了完全的逆转效应,而pGenSil—1/MDR—A则效果较差 ...
2021/8/26 14:28:47
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1.1试验材料人红白血病敏感细胞株K562及多药耐药细胞株K562/ADM均购自中国医学科学院天津血液学研究所,2.1shRNA抑制了P—gp泵功能我们总共检测了48个pGenSil—1/MDR—A转染的克隆,68个pGenSil—1/MDR—B转染的克隆及10个空pGenSil—1质粒转染克隆的P—gp泵活性,本试验所应用的两条shRNA显示了不同的RNAi效果,pGenSil—1/MDR—B对K562/ADM细胞的MDR1基因具有良好的基因沉默效果,甚至有两个克隆显示了完全的逆转效应,而pGenSil—1/MDR—A则效果较差 ...
2021/8/26 14:28:47
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两种浓度亚硒酸钠在作用48小时可使K562/ADR细胞早期凋亡率增加,作用48、72小时可使K562/ADR的细胞中、晚期凋亡率增高,10μmol/L的亚硒酸钠所致凋亡率高于5μmol/L,作用72小时的凋亡率高于48小时,ofSodiumSeleniteonMultidrugResistanceinK562/ADRCellLineandItsMechanisms,阿霉素对K562和K562/ADR细胞作用72小时时的IC50值分别为:(0.049±0.002)μg/ml和(8.28±1.27)μg/ml,即K562/ADR细胞的耐药性是K562的169倍 ...
2021/5/3 13:49:01
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mAb,PMA+A23187对人T细胞白血病细胞株Jurkat重组激活基因(RAGs)mRNA表达水平的影响.方法:采用RTPCR法检测不同T细胞激活剂作用不同时间后Jurkat细胞中RAG1,RAG2mRNA,以β肌动蛋白(βactin)的表达作为内参照进行灰度分析,比较不同组Jurkat细胞RAGsmRNA的表达水平.结果:三种T细胞激活剂刺激诱导的Jurkat细胞RAG1mRNA表达量明显低于对照组(P0.05),且RAG1mRNA表达量的下降与刺激诱导作用时间有关,淋巴细胞特异性重组激活基因(recombinationactivatinggenes,RAG)1和RAG2是参与V(D)J重排和功能性抗原受体基因形成的一个首要条件[1].一般认为,RAG1,RAG2基因仅特异性地同时表达于淋巴细胞发育的早期阶段,而不表达于淋巴细胞分化发育的较成熟阶段.然而,近年的研究发现,外周成熟淋巴细胞中也有RAGs表达和V(D)J重排的发生[2—3].迄今,外周淋巴细胞RAGsmRNA的表达和调节机制仍不清楚.本研究以代表T细胞发育成熟阶段的人T细胞白血病细胞株Jurkat细胞为研究对象,检测其RAG1和RAG2mRNA的共表达情况,探讨T细胞激活剂对Jurkat细胞RAGsmRNA表达水平的影响,为研究外周T细胞的RAGs表达调节机制奠定基础.
,1.2.1细胞培养、处理及总RNA提取Jurkat细胞用含有100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养基于37℃,50mL/LCO2条件下培养.将对数生长期的Jurkat细胞,按1×109/L的密度培养于12孔板中,分别加入PHA(20mg/L),抗CD3mAb(1∶100),PMA(40μg/L)+A23187(0.5μmol/L),同时设不加任何处理因素的对照组,每组均设3个复孔,分别在培养的第6,12h,收集各组细胞,PBS洗涤2~3次后采用试剂盒提取细胞总RNA,在核酸蛋白分析仪(BECKMANDU530)上鉴定RNA纯度和浓度,—70℃冻存备用. ...
2021/8/15 5:01:35
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mAb,PMA+A23187对人T细胞白血病细胞株Jurkat重组激活基因(RAGs)mRNA表达水平的影响.方法:采用RTPCR法检测不同T细胞激活剂作用不同时间后Jurkat细胞中RAG1,RAG2mRNA,以β肌动蛋白(βactin)的表达作为内参照进行灰度分析,比较不同组Jurkat细胞RAGsmRNA的表达水平.结果:三种T细胞激活剂刺激诱导的Jurkat细胞RAG1mRNA表达量明显低于对照组(P0.05),且RAG1mRNA表达量的下降与刺激诱导作用时间有关,淋巴细胞特异性重组激活基因(recombinationactivatinggenes,RAG)1和RAG2是参与V(D)J重排和功能性抗原受体基因形成的一个首要条件[1].一般认为,RAG1,RAG2基因仅特异性地同时表达于淋巴细胞发育的早期阶段,而不表达于淋巴细胞分化发育的较成熟阶段.然而,近年的研究发现,外周成熟淋巴细胞中也有RAGs表达和V(D)J重排的发生[2—3].迄今,外周淋巴细胞RAGsmRNA的表达和调节机制仍不清楚.本研究以代表T细胞发育成熟阶段的人T细胞白血病细胞株Jurkat细胞为研究对象,检测其RAG1和RAG2mRNA的共表达情况,探讨T细胞激活剂对Jurkat细胞RAGsmRNA表达水平的影响,为研究外周T细胞的RAGs表达调节机制奠定基础.
,1.2.1细胞培养、处理及总RNA提取Jurkat细胞用含有100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养基于37℃,50mL/LCO2条件下培养.将对数生长期的Jurkat细胞,按1×109/L的密度培养于12孔板中,分别加入PHA(20mg/L),抗CD3mAb(1∶100),PMA(40μg/L)+A23187(0.5μmol/L),同时设不加任何处理因素的对照组,每组均设3个复孔,分别在培养的第6,12h,收集各组细胞,PBS洗涤2~3次后采用试剂盒提取细胞总RNA,在核酸蛋白分析仪(BECKMANDU530)上鉴定RNA纯度和浓度,—70℃冻存备用. ...
2021/8/15 5:01:35
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88888888 ...
2021/8/11 17:30:06
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88888888 ...
2021/8/11 17:30:06
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傅余芹,李学刚,孙云,吴涛,文蓉珠,GuangJu,QITongGang,FUYuQin,LIXueGang,SUNYun,WUTao,WENRongZhu,Nephrology,SecondHospital,ShandongUniversity,Jinan,ShandongProvince250033,China;LaboratoryofMolecularBiology,SecondHospital,ShandongUniversity,Jinan,ShandongProvince250033,China) ...
2021/8/17 2:54:55
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s,68℃5min,扩增5个循环,然后94℃15s,68℃5min(每个循环延长10s),扩增20个循环,最后72℃延伸10min,均可获得HCV1b型5′端5223bp半基因组的阳性结果,TaKaLaLATaqTM扩增效果最好,Cvirus,HCV)基因组是一单股正链RNA,全长大约由9600核苷酸组成,是引起丙型肝炎的病原体.HCV基因组具有明显的异质性,根据其核苷酸序列的差异,分为6个主要的基因型,50多个亚型及不同的HCV分离株[1].同时,HCV以一群不同的但密切相关的变异株存在于患者体内,称为准种(quasispecies).传统的HCV全基因组质粒的构建通常采用短片段拼接而成[2],国内有报道采用4个片段扩增构建全长质粒[3],最近国外文献报道的全长基因组质粒的构建也多是采用3个片段拼接而成[4].这种短片段的拼接很容易造成准种间的不同变异株的不真实连接,使所构建的HCV全基因组并不是实际存在的基因,限制了HCV分子水平的研究.长链扩增可以最大限度地避免这种准种间不真实连接,使所构建的HCV全基因组质粒更为真实可靠.我们选取中国HCV主要流行株1b型[5]为研究对象,建立了HCV长链RTPCR扩增方法,并获得了HCV1b型5′端5223bp半基因组,为下一步构建病毒全基因组质粒及中国人HCV复制子奠定了基础.
,1.2.5长链PCR反应选用PlatinumTaqDNApolymeraseHighFidelity,TaKaLaLATaqTM,KODDash三种Taq酶进行长链巢式PCR扩增,按说明书配置反应体系.采用两种循环条件,分别为①94℃变性2min后,94℃30s,62℃30s,72℃4.5min,30个循环 ...
2021/8/15 6:13:05
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目的:探讨慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠肾组织p38MAPK的表达变化,进而分析p38MAPK在狼疮肾炎肾纤维化发生中的作用,结论:cGVHD狼疮样小鼠肾组织中TGF—β1、p38MAPK和P—p38MAPK蛋白及mRNA表达明显上调,p38MAPK信号通路可能在狼疮肾炎肾纤维化的进程中起重要作用,因此本研究通过构建慢性移植物抗宿主病(chronicgraftversushostdisease,cGVHD)狼疮样小鼠模型,探讨作为TGF—β1下游信号介质,p38MAPK在LN发展过程中的表达与活化及其可能的作用机制 ...
2021/8/11 20:34:55
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expressionofHCN4genemRNAinatrialfibrillationpatientswithmitralstenosisofrheumaticheartdisease,RNAsimpleTotalRNAKit(总RNA提取试剂盒,TIANGEN公司,北京),RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit(逆转录试剂盒,Fermentas公司,美国),TaKaRaExTaqTM(TaKaRa公司,大连),dNTPMixture(TaKaRa公司,大连),柱式PCR产物纯化试剂盒(QIAGEN公司,德国),ThermoPXE0.2PCR扩增仪(Thermo公司,美国),3730XLDNA分析系统(ABI公司,美国),紫外分光光度计(UVC—515,美国),水平凝胶电泳槽(BIO—RAD公司,美国),凝胶数字成像仪(BIO—RAD公司,美国),μl,TaKaRaExTaq0.25μl,dNTPMixture4μl,10×ExTaqBuffer5μl,ForwardPrimer和ReversePrimer分别为1μl(20mM)和1μl(20mM),加DEPC水36.75μl至50μl ...
2021/8/15 18:33:55
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mRNA的阳性率(70.7%)均高于癌旁正常组织(17.1%)和良性胃疾病患者组织SurvivinmRNA表达的阳性率(1/9)(P<0.005)癌旁正常组织与良性胃疾病组织SurvivinmRNA表达的阳性率差异无显著性(P>0.05),表达Survivin基因引物设计按参考文献[6],由上海生工生物工程技术合成,序列如下:5‘GGACCACCGCATCTCTACAT3‘(SurvivinmRNA第94~113bp),5‘GCACTTTCTTCGCAGTTTCC3‘(SurvivinmRNA第424~443bp),反应体系中含有上述合成的cDNA1μl,10mmol/LdNTP1μl,10mmol/LMgC121.5μl,0.5μmol/L上下游引物各0.5μl,TaqDNA聚合酶1.25U(0.25μl),5×TaqDNA聚合酶缓冲液2.5μl,加超纯水至25μl ...
2021/8/13 0:12:06
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目的:探讨慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠肾组织p38MAPK的表达变化,进而分析p38MAPK在狼疮肾炎肾纤维化发生中的作用,结论:cGVHD狼疮样小鼠肾组织中TGF—β1、p38MAPK和P—p38MAPK蛋白及mRNA表达明显上调,p38MAPK信号通路可能在狼疮肾炎肾纤维化的进程中起重要作用,因此本研究通过构建慢性移植物抗宿主病(chronicgraftversushostdisease,cGVHD)狼疮样小鼠模型,探讨作为TGF—β1下游信号介质,p38MAPK在LN发展过程中的表达与活化及其可能的作用机制 ...
2021/8/11 20:34:55
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傅余芹,李学刚,孙云,吴涛,文蓉珠,GuangJu,QITongGang,FUYuQin,LIXueGang,SUNYun,WUTao,WENRongZhu,Nephrology,SecondHospital,ShandongUniversity,Jinan,ShandongProvince250033,China;LaboratoryofMolecularBiology,SecondHospital,ShandongUniversity,Jinan,ShandongProvince250033,China) ...
2021/8/17 2:54:55
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s,68℃5min,扩增5个循环,然后94℃15s,68℃5min(每个循环延长10s),扩增20个循环,最后72℃延伸10min,均可获得HCV1b型5′端5223bp半基因组的阳性结果,TaKaLaLATaqTM扩增效果最好,Cvirus,HCV)基因组是一单股正链RNA,全长大约由9600核苷酸组成,是引起丙型肝炎的病原体.HCV基因组具有明显的异质性,根据其核苷酸序列的差异,分为6个主要的基因型,50多个亚型及不同的HCV分离株[1].同时,HCV以一群不同的但密切相关的变异株存在于患者体内,称为准种(quasispecies).传统的HCV全基因组质粒的构建通常采用短片段拼接而成[2],国内有报道采用4个片段扩增构建全长质粒[3],最近国外文献报道的全长基因组质粒的构建也多是采用3个片段拼接而成[4].这种短片段的拼接很容易造成准种间的不同变异株的不真实连接,使所构建的HCV全基因组并不是实际存在的基因,限制了HCV分子水平的研究.长链扩增可以最大限度地避免这种准种间不真实连接,使所构建的HCV全基因组质粒更为真实可靠.我们选取中国HCV主要流行株1b型[5]为研究对象,建立了HCV长链RTPCR扩增方法,并获得了HCV1b型5′端5223bp半基因组,为下一步构建病毒全基因组质粒及中国人HCV复制子奠定了基础.
,1.2.5长链PCR反应选用PlatinumTaqDNApolymeraseHighFidelity,TaKaLaLATaqTM,KODDash三种Taq酶进行长链巢式PCR扩增,按说明书配置反应体系.采用两种循环条件,分别为①94℃变性2min后,94℃30s,62℃30s,72℃4.5min,30个循环 ...
2021/8/15 6:13:05
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[目的]构建带有报告基因EGFP的bax基因逆转录病毒表达载体,建立高表达bax基因的Hela细胞,[方法]通过RTPCR方法从Hela细胞克隆bax基因,根据基因工程原理,经PCR、酶切等方法构建bax基因和报告基因EGFP双基因逆转录病毒表达载体pLBaxSNIRES2EGFP,转染Hela细胞后,荧光显微镜和WesternBlotting检测bax基因的表达情况,baxGeneRetroviralVectorConstructionandItsExpressioninHelaCells ...
2021/8/17 2:46:45
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选取胸腔积液患者,抽取胸腔积液200ml,加入枸橼酸钠抗凝,混匀,ml胸腔积液送病理室进行常规脱落细胞学检查,剩余的100ml胸腔积液于4℃条件下离心20min,收集细胞沉渣用PBS液混悬后,缓慢加至人肿瘤细胞分离液上,20℃下2000r/min离心20min,μl,反应终浓度为:1×缓冲液,200μmol/LdNTP,1.5mmol/LMgCl2,上下游引物0.4μmol/L,cDNA1μl,TaqDNA聚合酶0.5U,用ddH2O补足体积至25μl ...
2021/8/9 15:10:46
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以GenBank中CSFVC株序列为参考,借助DNAStar软件设计合成两条引物,E2f:5′aaGGATCCaccATGggacagatcgtgcaaggtgtg3′;E2r:5′atGAATTCgtccctgggctcatagta3′,参照文献[2],采用RTPCR技术从试验感染兔脾组织中获得了C株E2基因,其中扩增程序为:96℃2min,94℃2min,58℃1min,72℃1min20s,循环35次后,72℃延伸10min,收集48h培养上清,作1∶100、1∶1000和1∶10000稀释,加入聚凝胺(Polybrene)使其终浓度达8mg/L,接种正常的GP2293细胞,37℃50mL/LCO2培养48h后,更换含嘌呤霉素的选择培养基,10~14d后嘌呤霉素抗性克隆形成 ...
2021/8/17 8:15:46
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mRNA的阳性率(70.7%)均高于癌旁正常组织(17.1%)和良性胃疾病患者组织SurvivinmRNA表达的阳性率(1/9)(P<0.005)癌旁正常组织与良性胃疾病组织SurvivinmRNA表达的阳性率差异无显著性(P>0.05),表达Survivin基因引物设计按参考文献[6],由上海生工生物工程技术合成,序列如下:5‘GGACCACCGCATCTCTACAT3‘(SurvivinmRNA第94~113bp),5‘GCACTTTCTTCGCAGTTTCC3‘(SurvivinmRNA第424~443bp),反应体系中含有上述合成的cDNA1μl,10mmol/LdNTP1μl,10mmol/LMgC121.5μl,0.5μmol/L上下游引物各0.5μl,TaqDNA聚合酶1.25U(0.25μl),5×TaqDNA聚合酶缓冲液2.5μl,加超纯水至25μl ...
2021/8/13 0:12:06
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expressionofHCN4genemRNAinatrialfibrillationpatientswithmitralstenosisofrheumaticheartdisease,RNAsimpleTotalRNAKit(总RNA提取试剂盒,TIANGEN公司,北京),RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit(逆转录试剂盒,Fermentas公司,美国),TaKaRaExTaqTM(TaKaRa公司,大连),dNTPMixture(TaKaRa公司,大连),柱式PCR产物纯化试剂盒(QIAGEN公司,德国),ThermoPXE0.2PCR扩增仪(Thermo公司,美国),3730XLDNA分析系统(ABI公司,美国),紫外分光光度计(UVC—515,美国),水平凝胶电泳槽(BIO—RAD公司,美国),凝胶数字成像仪(BIO—RAD公司,美国),μl,TaKaRaExTaq0.25μl,dNTPMixture4μl,10×ExTaqBuffer5μl,ForwardPrimer和ReversePrimer分别为1μl(20mM)和1μl(20mM),加DEPC水36.75μl至50μl ...
2021/8/15 18:33:55
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质粒PMX—TNFR1/RANK的克隆TNFR1/RANK主要由两个部分组成:TNFR1膜外部分(TNFR1—Ext)、RANK跨膜和膜内部分(RANK—TM/RANK—Cyt),将感染和未感染的BMM(5×104)分别加入24孔培养孔中,加入1mLα10培养液,再分别加入10ngM—CSF、10ngM—CSF+100ngRANKL、10ngM—CSF+10ngTNF—а不同组合的细胞因子,在选择24孔培养板中的培养孔中,每孔加入一块牙片,磷酸缓冲液浸泡2h后除去缓冲液,然后再向孔中5×104个感染后的BMM,并加入10ngM—CSF、10ngM—CSF+100ngRANKL、10ngM—CSF+10ngTNF—а不同组合的细胞因子,放入37℃、7%的CO2培养箱中,进行培养 ...
2021/8/12 9:28:45
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质粒PMX—TNFR1/RANK的克隆TNFR1/RANK主要由两个部分组成:TNFR1膜外部分(TNFR1—Ext)、RANK跨膜和膜内部分(RANK—TM/RANK—Cyt),将感染和未感染的BMM(5×104)分别加入24孔培养孔中,加入1mLα10培养液,再分别加入10ngM—CSF、10ngM—CSF+100ngRANKL、10ngM—CSF+10ngTNF—а不同组合的细胞因子,在选择24孔培养板中的培养孔中,每孔加入一块牙片,磷酸缓冲液浸泡2h后除去缓冲液,然后再向孔中5×104个感染后的BMM,并加入10ngM—CSF、10ngM—CSF+100ngRANKL、10ngM—CSF+10ngTNF—а不同组合的细胞因子,放入37℃、7%的CO2培养箱中,进行培养 ...
2021/8/12 9:28:45
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[摘要]目的:观察结缔组织生长因子(CTGF)在慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠肾组织中的表达情况,结论:cGVHD狼疮样小鼠肾组织中CTGF蛋白及mRNA表达明显上调,可能在狼疮肾炎肾小球硬化及肾间质纤维化的进程中起重要作用,作者通过构建慢性移植物抗宿主病(chronicgraftversushostdisease,cGVHD)狼疮样小鼠模型,观察CTGF在该模型小鼠肾组织中的表达情况,旨在探讨CTGF在狼疮肾炎(lupusnephritis,LN)发病中的作用 ...
2021/8/14 7:20:05
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[摘要]目的:探讨慢性不可预见性应激抑郁模型大鼠脑内去甲肾上腺素转运体(NET)基因表达的变化,本实验在建立慢性不可预见性应激的抑郁大鼠模型基础上,采用逆转录_聚合酶链反应法(RT_PCR),观察抑郁模型大鼠脑内NETmRNA表达的变化,逆转录模板RNA为1μL(质量浓度1g/L),加入OligodT_AdaptorPrimer1μL,RNaseInhibitor05μL,10×RNAPCRBuffer2μL,ReverseTranscrptase1μL,MgCl24μL,dNTP2μL(均为10mmol/L) ...
2021/8/17 23:17:16
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选取胸腔积液患者,抽取胸腔积液200ml,加入枸橼酸钠抗凝,混匀,ml胸腔积液送病理室进行常规脱落细胞学检查,剩余的100ml胸腔积液于4℃条件下离心20min,收集细胞沉渣用PBS液混悬后,缓慢加至人肿瘤细胞分离液上,20℃下2000r/min离心20min,μl,反应终浓度为:1×缓冲液,200μmol/LdNTP,1.5mmol/LMgCl2,上下游引物0.4μmol/L,cDNA1μl,TaqDNA聚合酶0.5U,用ddH2O补足体积至25μl ...
2021/8/9 15:10:46
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[目的]构建带有报告基因EGFP的bax基因逆转录病毒表达载体,建立高表达bax基因的Hela细胞,[方法]通过RTPCR方法从Hela细胞克隆bax基因,根据基因工程原理,经PCR、酶切等方法构建bax基因和报告基因EGFP双基因逆转录病毒表达载体pLBaxSNIRES2EGFP,转染Hela细胞后,荧光显微镜和WesternBlotting检测bax基因的表达情况,baxGeneRetroviralVectorConstructionandItsExpressioninHelaCells ...
2021/8/17 2:46:45
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以GenBank中CSFVC株序列为参考,借助DNAStar软件设计合成两条引物,E2f:5′aaGGATCCaccATGggacagatcgtgcaaggtgtg3′;E2r:5′atGAATTCgtccctgggctcatagta3′,参照文献[2],采用RTPCR技术从试验感染兔脾组织中获得了C株E2基因,其中扩增程序为:96℃2min,94℃2min,58℃1min,72℃1min20s,循环35次后,72℃延伸10min,收集48h培养上清,作1∶100、1∶1000和1∶10000稀释,加入聚凝胺(Polybrene)使其终浓度达8mg/L,接种正常的GP2293细胞,37℃50mL/LCO2培养48h后,更换含嘌呤霉素的选择培养基,10~14d后嘌呤霉素抗性克隆形成 ...
2021/8/17 8:15:46
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[摘要]目的:探讨慢性不可预见性应激抑郁模型大鼠脑内去甲肾上腺素转运体(NET)基因表达的变化,本实验在建立慢性不可预见性应激的抑郁大鼠模型基础上,采用逆转录_聚合酶链反应法(RT_PCR),观察抑郁模型大鼠脑内NETmRNA表达的变化,逆转录模板RNA为1μL(质量浓度1g/L),加入OligodT_AdaptorPrimer1μL,RNaseInhibitor05μL,10×RNAPCRBuffer2μL,ReverseTranscrptase1μL,MgCl24μL,dNTP2μL(均为10mmol/L) ...
2021/8/17 23:17:16
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[摘要]目的:观察结缔组织生长因子(CTGF)在慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠肾组织中的表达情况,结论:cGVHD狼疮样小鼠肾组织中CTGF蛋白及mRNA表达明显上调,可能在狼疮肾炎肾小球硬化及肾间质纤维化的进程中起重要作用,作者通过构建慢性移植物抗宿主病(chronicgraftversushostdisease,cGVHD)狼疮样小鼠模型,观察CTGF在该模型小鼠肾组织中的表达情况,旨在探讨CTGF在狼疮肾炎(lupusnephritis,LN)发病中的作用 ...
2021/8/14 7:20:05
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ofsphingosine—1—phosphate(S1P)againstcyclophosphamide(CTX)inducedgonadotoxicityinfemalerats.【Methods,cyclophosphamide—inducedovariandamageinrats,andtheroleofitsagainstapoptosismightthroughregulatingtheexpressionoftheBcl—2andBaxmRNAintheovary.
,1μg,以Random9mers为引物,在AMV逆转录酶的作用下进行逆转录,反应总体积为10μL,包括25μmol/LMgCL2,10×RT缓冲液,10mmol/LdNTP混合液,5U/μLAMV逆转录酶,40U/μLRNA酶抑制剂,用DEPC超纯水定容至10μL ...
2021/8/18 3:38:46
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ofsphingosine—1—phosphate(S1P)againstcyclophosphamide(CTX)inducedgonadotoxicityinfemalerats.【Methods,cyclophosphamide—inducedovariandamageinrats,andtheroleofitsagainstapoptosismightthroughregulatingtheexpressionoftheBcl—2andBaxmRNAintheovary.
,1μg,以Random9mers为引物,在AMV逆转录酶的作用下进行逆转录,反应总体积为10μL,包括25μmol/LMgCL2,10×RT缓冲液,10mmol/LdNTP混合液,5U/μLAMV逆转录酶,40U/μLRNA酶抑制剂,用DEPC超纯水定容至10μL ...
2021/8/18 3:38:46
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虽然全髋置换术是临床上治疗严重髋关节疾病的有效手术方法,但术后出现的人工假体周围骨溶解引起假体无菌性松动仍然是影响人工假体使用寿命的主要原因之一,本文就目前人工假体周围骨溶解的基因治疗的研究现状及进展进行综述,腺病毒(Adenovims)为DNA病毒,它能感染各时相的细胞,感染滴度高且不与宿主基因发生整和,因而被较广泛地应用于研究 ...
2021/8/22 9:41:35
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磷酸、磷酸二氢钠、三氯乙酸、三乙胺,AR级,上海化学试剂公司生产.受试制剂:国产奈韦拉平胶囊剂,批号0309001,每粒200mg,浙江华海药业股份有限公司生产,304185d,每片200mg,德国勃林格殷格翰生产,奈韦拉平标准品:批号556503002,含量99.8%,浙江华海药业股份有限公司提供. ...
2021/8/19 16:56:36
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Sphasekinaseassociatedprotein2mRNAexpressioninesophagealcarcinoma,探讨S期激酶相关蛋白2mRNA在食管癌及其癌旁组织中的表达及其与食管癌临床病理特征的关系.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法检测S期激酶相关蛋白2mRNA在45例手术切除的食管癌组织及癌旁组织中的表达.结果:S期激酶相关蛋白2mRNA表达率在食管癌中为66.6%(30/45),而癌旁组织中为24.4%(11/45),差异有显著性(P0.05).S期激酶相关蛋白2mRNA阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小、及有无淋巴结转移无关,与肿瘤分化程度及TNM分期有关(P0.05).结论:S期激酶相关蛋白2的高水平表达促进了食管癌的发生发展.并将可能为食管癌的早期诊断和治疗提供新的手段.
,我国是食管癌高发区,在我国居恶性肿瘤的第四位[1].Skp2(Sphasekinaseassociatedprotein2)是新发现的SCF(Skp1CullinFbox)多功能E3酶复合体中的一种Fbox蛋白,参与细胞增殖与调亡的调控,与肿瘤的发生发展有着密切的关系.我们利用RTPCR法检测中手术切除的食管癌标本S期激酶相关蛋白2mRNA表达,探讨其与食管癌临床病理参数之间的关系. ...
2021/8/19 9:39:45
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1.2半定量RT—PCR(1)组织单细胞制备,用IGF—Ⅱ基因与GAPDH光密度的比值代表IGF—Ⅱ基因的相对表达量,1.4统计学处理SPSS10.0软件进行数据处理,采用χ2检验法、方差分析及t检验 ...
2021/8/18 20:25:16
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目的了解艾滋病人在抗病毒治疗(HAART)过程中ALT、TBIL生化指标变化情况,为抗病毒治疗停用或更换治疗方案提供科学依据,方法通过艾滋病疫情综合系统数据下载,回顾分析随访过程中ALT、TBIL两项检测结果,2.1从ALT的检测结果看,在随访第2次、8次、11次、22次结果偏高,从第3次到第7次随访,ALT检测结果基本平稳 ...
2021/8/14 1:40:16
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EAM小鼠外周血和脾淋巴细胞上B7—1、B7—2蛋白的表达明显增强,B7—1、B7—2mRNA的表达与蛋白表达的增加相平行,cytokineB7EAMRT—PCRflowcytometry,PE标记的抗B7—1、B7—2单克隆抗体购自美国Pharmingen公司,IL—10、IL—12、rIFN—γ、rTNF—α、RNA提取试剂盒及逆转录试剂盒购自美国Promega公司,B7—1、B7—2、β—actin引物由中科院上海细胞生物研究所合成,弗氏完全佐剂(CFA)及其它免疫试剂购自北京邦定生物公司 ...
2021/8/6 13:11:06
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目前,常用的载体主要有病毒载体和非病毒载体两类:病毒载体的转移效率高,在基础研究和临床试验中应用广泛,但近年来因存在安全性的问题,其使用受到了一定的制约,现就近年来国内外对于肿瘤基因治疗载体的使用选择及安全性研究作一综述,单纯疱疹病毒(herpssimplevirus,HSV)为双链DNA病毒,可引起口唇及生殖道黏膜感染,且具有嗜神经性 ...
2021/8/18 10:49:08
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EAM小鼠外周血和脾淋巴细胞上B7—1、B7—2蛋白的表达明显增强,B7—1、B7—2mRNA的表达与蛋白表达的增加相平行,cytokineB7EAMRT—PCRflowcytometry,PE标记的抗B7—1、B7—2单克隆抗体购自美国Pharmingen公司,IL—10、IL—12、rIFN—γ、rTNF—α、RNA提取试剂盒及逆转录试剂盒购自美国Promega公司,B7—1、B7—2、β—actin引物由中科院上海细胞生物研究所合成,弗氏完全佐剂(CFA)及其它免疫试剂购自北京邦定生物公司 ...
2021/8/6 13:11:06
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目的了解艾滋病人在抗病毒治疗(HAART)过程中ALT、TBIL生化指标变化情况,为抗病毒治疗停用或更换治疗方案提供科学依据,方法通过艾滋病疫情综合系统数据下载,回顾分析随访过程中ALT、TBIL两项检测结果,2.1从ALT的检测结果看,在随访第2次、8次、11次、22次结果偏高,从第3次到第7次随访,ALT检测结果基本平稳 ...
2021/8/14 1:40:16
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1.2半定量RT—PCR(1)组织单细胞制备,用IGF—Ⅱ基因与GAPDH光密度的比值代表IGF—Ⅱ基因的相对表达量,1.4统计学处理SPSS10.0软件进行数据处理,采用χ2检验法、方差分析及t检验 ...
2021/8/18 20:25:16
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本实验目的是利用RTPCR技术分离获得大鼠NT3基因,并通过携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒载体构建NT3基因的表达载体,为进一步将NT3基因导入NSC内,探讨应用转NT3神经干细胞治疗脊髓损伤的研究提供参考,扩增、测序根据GenBank中大鼠NT3的基因序列(GenBank登录号为M34643),设计2条引物,并加入2个酶切位点HindIII(AAGCTT)、BamHI(GGATCC)和保护碱基:5′CGCGAAGCTTGCATGTCCATCTTGTTTTATGTG3′;5′GCCGGGATCCTCATGTTCTTCCGATTTTTCTTG3′;扩增产物大小为776bp,表达NT3的逆转录病毒载体的构建提取质粒pGEMTNT3和pLEGFPC1,分别用HindIII与BamHI进行双酶切,琼脂糖凝胶电泳回收NT3与pLEGFPC1片段,将NT3用T4DNA连接酶与pLEGFPC1载体进行连接,连接子转化大肠杆菌JM109感受态细胞,转化细菌涂布LB氨苄平板筛选阳性重组质粒,挑取单菌落接种于2mLLB培养液中,37℃震荡培养过夜,小提质粒,用HindⅢ和BamHⅠ双酶切鉴定出重组质粒,然后大量制备重组质粒pLEGFPC1NT3,—20℃备用 ...
2021/8/19 2:20:46
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本实验目的是利用RTPCR技术分离获得大鼠NT3基因,并通过携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒载体构建NT3基因的表达载体,为进一步将NT3基因导入NSC内,探讨应用转NT3神经干细胞治疗脊髓损伤的研究提供参考,扩增、测序根据GenBank中大鼠NT3的基因序列(GenBank登录号为M34643),设计2条引物,并加入2个酶切位点HindIII(AAGCTT)、BamHI(GGATCC)和保护碱基:5′CGCGAAGCTTGCATGTCCATCTTGTTTTATGTG3′;5′GCCGGGATCCTCATGTTCTTCCGATTTTTCTTG3′;扩增产物大小为776bp,表达NT3的逆转录病毒载体的构建提取质粒pGEMTNT3和pLEGFPC1,分别用HindIII与BamHI进行双酶切,琼脂糖凝胶电泳回收NT3与pLEGFPC1片段,将NT3用T4DNA连接酶与pLEGFPC1载体进行连接,连接子转化大肠杆菌JM109感受态细胞,转化细菌涂布LB氨苄平板筛选阳性重组质粒,挑取单菌落接种于2mLLB培养液中,37℃震荡培养过夜,小提质粒,用HindⅢ和BamHⅠ双酶切鉴定出重组质粒,然后大量制备重组质粒pLEGFPC1NT3,—20℃备用 ...
2021/8/19 2:20:46
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目前,常用的载体主要有病毒载体和非病毒载体两类:病毒载体的转移效率高,在基础研究和临床试验中应用广泛,但近年来因存在安全性的问题,其使用受到了一定的制约,现就近年来国内外对于肿瘤基因治疗载体的使用选择及安全性研究作一综述,单纯疱疹病毒(herpssimplevirus,HSV)为双链DNA病毒,可引起口唇及生殖道黏膜感染,且具有嗜神经性 ...
2021/8/18 10:49:08
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摘要:目的丁胱亚磺酰亚胺排空组织谷胱甘肽对大鼠心肌c-iun、c—fosmRNA的影响,在游泳训练的最后8d,注射BSO组的大鼠开始注射BSO(L―Buthionine―Sulfoximine,丁胱亚磺酰亚胺),一种谷氨酰半胱氨酸合酶(GCS)的抑制剂,采用腹腔注射,3.2递增负荷训练、力竭运动及注射BSO后大鼠心肌c―JunmRNA表达的变化3.3递增负荷训练、力竭运动及注射BSO后大鼠心肌c―FosmRNA表达的变化4讨论本实验采用注射BSO排空组织GSH,心肌中的c―junmRNA和c―fosmRNA表达的量增加,进而激活转录因子AP-1 ...
2021/10/24 23:32:21
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摘要:目的:探讨复方积雪草对炎症因子刺激下肾小管上皮细胞生物活性改变的干预作用,结果:IL-1β诱导可使肾小管上皮细胞TGF-β1和ActivinA的基因表达较正常对照细胞显著增高,积雪草肾小管血清复方 ...
2021/7/16 3:49:08
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为了探讨伴有TEL—AML1融合基因表达的儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的免疫表型及其它临床特点,采用三色流式细胞术(FCM)检测免疫表型,用巢式逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测TEL—AML1融合基因的表达,CharacteristicsofChildrenwithAcuteLymphoblasticLeukemiaCarryingTEL—AML1FusionGene,μl反应体系,含10×buffer2.5μl,dNTP0.2mmol/L,MgCl21.5mmol/L,引物各5pmol,TaqDNA聚合酶1.25U ...
2021/7/4 21:54:29
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目的:检测50例子宫内膜癌组织及癌旁正常内膜组织的VEGFA和VEGFR1的表达情况,探讨VEGFA及其受体VEGFR1是否与子宫内膜癌的侵袭与转移有关,本研究就50例子宫内膜癌患者的癌组织及癌旁正常内膜的VEGFA及其受体VEGFR1的表达进行检测,以探讨它与子宫内膜癌生物学行为的关系,现报道如下,子宫离体后立即纵行剖开,取癌组织约2cm×1cm大小,在癌组织基底部2cm外侧取正常内膜约2cm×1cm大小 ...
2021/8/15 10:41:35
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结果复元胶囊能抑制骨关节炎软骨细胞过度凋亡,降低促凋亡基因BaxmRNA表达,增加凋亡抑制基因Bcl—2mRNA的表达,并调节Bax/Bcl—2的比例,mRNA表达、增加凋亡抑制基因Bcl—2mRNA的表达、调节Bax/Bcl—2的比例而抑制骨关节炎软骨细胞的凋亡,μl总RNA,逆转录合成cDNA,逆转录反应体系总体积10μl(含MgCl22μl,10×RTBuffer1μl,RNaseFreedH2O3.75μl,dNTPMixture1μl,RNaseInhibitor0.25μl,转录酶0.5μl,Oligo酶0.5μl) ...
2021/8/21 15:47:25
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2021/8/15 11:13:05
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Bit1geneinayeasttwohybridsystemandreportergeneactivationassay,目的:用Bit1基因片段构建酵母双杂交诱饵载体,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无激活作用.方法:运用RTPCR技术从卵巢癌细胞系Caov3中扩增出Bit1基因片段,克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再克隆入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因有无激活作用.结果:成功获得Bit1基因片段,Bit1基因表达的蛋白对酵母菌AH109无毒性,对报告基因亦无激活作用.结论:可以利用酵母双杂交Gal4系统来研究与Bit1相互作用的蛋白.
,1.2.1RTPCR扩增Bit1基因自行设计出克隆Bit1基因的引物.常规培养Caov3细胞,提取细胞总RNA,加入下游引物和逆转录酶,45℃各作用30min进行逆转录,反应条件为:70℃10min,42℃45min,95℃5min.再取逆转录产物加入引物P1和P2扩增Bit1基因.PCR反应条件为:94℃30s,61℃45s,72℃50s,共进行38个循环. ...
2021/8/17 9:13:15
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将C3A细胞以2×105/孔的密度接种于6孔板中,细胞完全贴壁后,将培养液分别置换为1000g/L正常人血浆、1000g/L慢性重型肝炎患者血浆、1000g/L体外灌流处理的慢性重型肝炎患者血浆,培养24h后备用,Buffer4.0μL,dNTP(10mmol/L)1.0μL,OligodT(500mg/L)1.0μL,RNasin(40U/μL)1.0μL,MMLV(逆转录酶,200U/μL)1.0μL,RNA提取物5.0μL,最后DEPCH2O7.0μL补足体积至20.0μL,40℃水浴30min,Buffer(含25mmol/LMg2+)3.0μL,dNTP(10mmol/L)1.0μL,CYP4503A4引物(10μmol/L)一对各1.0μL,βactin(20μmol/L)一对各1.0μL,Taq酶(5U/μL)1.0μL,逆转录反应产物取3.0μL,最后加入H2O17.0μL补足体积至30.0μL ...
2021/8/9 22:54:06